Иммунологические методы, основанные на взаимодействии антиген–антитело - Биология и естествознание курсовая работа
Главная
Биология и естествознание
Иммунологические методы, основанные на взаимодействии антиген–антитело
Двойная радиальная иммунодиффузия по Ухтерлони: принци, проведение, определение титра, применение. Простая линейная иммунодиффузия по Удену. Простая радиальная иммунодиффузия по Манчини. Нефелометрия. Иммунодот и иммуноспот. Области применения методов.
посмотреть текст работы
скачать работу можно здесь
полная информация о работе
весь список подобных работ
Нужна помощь с учёбой? Наши эксперты готовы помочь!
Нажимая на кнопку, вы соглашаетесь с
политикой обработки персональных данных
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
(КЕМЕРОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ)
В современное время широко используют методы, основанные на взаимодействии антиген - антитело. К данным методам относятся методы иммунодиффузии, нефелометрии, иммунодот и иммуноспот. Они широко используются для определения числа антигенов в различных жидкостях (сыворотке крови, цереброспинальной жидкости), для оценки чистоты препаратов при выделении антигенов, для сравнения известных антигенов и антител с неизвестными. Твердофазный иммуноферментный анализ является наиболее популярным методом в диагностике различных вирусных, бактериальных, грибковых и паразитарных болезней человека и животных.
В слое агарового геля равномерной толщины на определенном расстоянии друг от друга вырезают лунки для антигена и антисыворотки и заполняют их соответствующими растворами. После этого антигены и антитела диффундируют в гель, встречаются друг с другом и образуют иммунные комплексы, которые преципитируют в полях геля и становятся видимыми как линии преципитации.
Готовят последовательные двукратные разведения изучаемого антигена и равные объемы каждого разведения вносят в лунки, расположенные по периферии той лунки, в которой антисыворотка (стандартный объем). При оценке результатов иммунодиффузии учитывают:
1. расстояние, отделяющее линию преципитации от центральной и периферических лунок;
2. последнее разведение антигена, которое еще дает видимый преципитат;
3. интенсивность и ширину полос преципитации.
Последнее разведение антигена, дающее преципитат, считают его титром. Подобным образом можно титровать содержание антител в антисыворотке.
Гель, содержащий антисыворотку, помещают в стеклянные трубки или пробирки. Трубки вертикально погружают в раствор антигена, и в пробирках раствор антигена наслаивают на гель. Антигены диффундируют в гель со скоростью, пропорциональной их концентрации, и, соединившись со специфическими антителами, образуют с ними беловато-мутные преципитаты. Число линий преципитации зависит от числа реагирующих систем антиген-антитело. Чем продолжительнее диффузия, тем дальше фронт преципитации каждой линии удаляется от границы, разделяющей гель и жидкость. Расстояние, которое он проходит за определенное время при строго постоянной концентрации антисыворотки в геле, зависит только от концентрации диффундирующего антигена. При постоянных условия опыта (температура, серия антисыворотки и ее концентрация в геле, концентрация самого геля) с помощью простой линейной иммунодиффузии можно определять количество антигена.
На ровную поверхность равномерным слоем наносят гель, содержащий антитела. В геле вырезают лунки и заполняют их раствором антигена. Молекулы антигена радиально диффундируют из лунки и, встретившись с антителами, образуют кольцо преципитации. До тех пор пока в лунке сохраняется избыток антигена, происходит постепенное увеличение диаметра кольца преципитации.
В пределах своей чувствительности радиальная иммунодиффузия пригодна для количественного определения любого антигена, если имеются соответствующие моноспецифические антисыворотки и чистые или стандартные антигены, чтобы построить калибровочную кривую для данной системы.
При помощи этого метода чаще определяют белковые антигены, например белки сыворотки крови, цереброспинальной жидкости, секретов желез. Радиальная иммунодиффузия пригодна также для сравнительного качественного и количественного анализа иммунохимически близких белков.
Преимущества нефелометрии - относительная простота и быстрота процедуры, а также возможность ее автоматизации. Однако этот метод предъявляет особые требования к качеству антисыворотки. Она должна содержать достаточно антител, чтобы в разведении антител не менее 1:5 обеспечить величину максимальной экстинкции выше 0,2. Антисыворотка должна быть прозрачной.
Твердофазный иммуноферментный анализ является наиболее популярным методом в диагностике различных вирусных, бактериальных, грибковых и паразитарных болезней человека и животных. Однако этот метод имеет ряд недостатков. В модифицированном варианте для адсорбции различных антигенов используют нитроцеллюлозные фильтры. Такую модификацию называют dot-ELISA (точечный твердофазный иммуноферментный анализ). В dot-ELISA минимальные объемы растворов антигена или антител наносят на нитроцеллюлозную подложку в виде серии точек. Преципитирующие хромогенные субстраты на белом нитроцеллюлозном фильтре образуют цветные пятна. Фильтры с результатами анализа могут храниться в темноте в течение многих лет без потери окраски.
В dot-ELISA можно применять различные препараты антигенов. На нитроцеллюлозных мембранах можно сорбировать как жизнеспособные или фиксированные формалином простейшие, так и супернатанты, полученные после разрушения клеток.
Пятно антигена наносят в объеме от 0,1 до 3 мкл. В случае препаратов солюбизированных антигенов предпочтительнее использовать мембраны с малым диаметром пор. При применении целых клеток величина пор не играет большой роли.
Все стадии инкубации и промывки выполняют при комнатной температуре. Сначала диски с антигеном обрабатывают блокирующим раствором (3 - 5%-ный раствор очищенного бычьего сывороточного альбумина в солевом триэтаноламиновом буферном растворе). Можно успешно применять и цельную лошадиную сыворотку или 1%-ный раствор нормальной сыворотки кролика в фосфатном буферном растворе с NaCl. При обнаружении антител 50 мкл сыворотки в 1%-ном растворе БСА-СТБ инкубируют на диске. Антитела специфически связываются с антигеном, сорбированном на диске. Затем диски трижды промывают в растворе детергента (0,05%-ный раствор нонидета Р-40 в СТБ, 0,05%-ный раствор твина-20 в солевом растворе трис- НCl). После промывки диски инкубируют с 50 мкл конъюгата аффинно очищенных антивидовых антител с ферментом (пероксидаза, щелочная фосфатаза).
После отмывки несвязавшегося материала добавляют преципитирующий хромогенный субстрат. При окислении субстрата ферментом в присутствии пероксида водорода образуется четкое пятно.
При определении антигенов пробы наносят непосредственно на подложку, затем проводят иммунологическую реакцию или со специфическими антителами и конъюгатом вторичных антител с ферментом и хромогенным субстратом, или с конъюгатом специфических антител с ферментом-маркером и субстратом.
В двухсайтовом dot-ELISA при определении антигенов сначала на подложку наносят специфические антитела. Антигены в пробе связываются с антителами. Потом добавляют меченые специфические антитела против другого эпитопа антигена и проводят реакцию с преципитирующим субстратом. Для таких методик характерна высокая специфичность.
Важным преимуществом метода dot-ELISA является возможность его применения для самых разнообразных медицинских целей. Все модификации dot-ELISA отличаются экономичным расходом реагентов, не требуют приборов с электропитанием для регистрации результатов.
1. Тертон М., Бангхем Д.Р., Колкотт К.А. Новые методы иммуноанализа. - М.: Мир, 1991. - С.116.
2. Иммунологические методы. Под ред. Х.Фримеля. - М.:Мир, 1979. - С. 31 - 55.
Описание химического состава плодов и овощей. Роль обмена веществ и энергии в жизни живых существ. Биологическое значение цикла Кребса. Микро- и макроэволюция как две стороны единого эволюционного процесса. Определение понятий "антиген", "антитело". контрольная работа [24,2 K], добавлен 13.10.2010
Методы определения аффинности антител. Способы расчета констант комплексообразования реакции антиген—антитело, ее кинетические закономерности. Сущность метода равновесного диализа. Экспериментальные методы и определения кинетических констант реакции. контрольная работа [744,7 K], добавлен 19.09.2009
Кишечнополостных (Coelenterata или Cnidaria) выделяют в отдельный тип животных, их около 9000 видов. Для них характерна радиальная симметрия: они имеют одну главную продольную ось, вокруг которой в радиальном порядке расположены различные органы. доклад [10,9 K], добавлен 25.06.2008
Рассмотрены основные области применения протеаз - ферментов, расщепляющих белки. Пищевая промышленность. Применение в бытовой химии. Применение протеаз в легкой промышленности. Применение протеиназ в кожевенном производстве. Меховое производство. реферат [8,7 K], добавлен 19.04.2004
Специфическое взаимодействие антитела с антигенами, роль силы гидрофобного взаимодействия. Степень соответствия между антигенной детерминантой и антигенсвязывающей областью активного центра антитела. Взаимодействие антигена с субпопуляцией антител. контрольная работа [254,3 K], добавлен 19.09.2009
Степень избирательности связи "антиген – антитело" и перспектива создания аффинных хроматографических колонок для очистки белков. Понятие аффинных иммуносорбентов. Поиск антигена после электрофореза смеси белков. Радиоактивные изотопы в биологии. реферат [82,0 K], добавлен 13.12.2009
Молекула антитела с двумя идентичными антиген-связывающими участками. Функциональные свойства, строение антител и их многообразие. Проблема получения индивидуальных антител. Роль специфических последовательностей ДНК. Механизмы экспрессии генов антител. курсовая работа [174,8 K], добавлен 25.05.2009
Работы в архивах красиво оформлены согласно требованиям ВУЗов и содержат рисунки, диаграммы, формулы и т.д. PPT, PPTX и PDF-файлы представлены только в архивах. Рекомендуем скачать работу .
© 2000 — 2021
Иммунологические методы, основанные на взаимодействии антиген–антитело курсовая работа. Биология и естествознание.
Классический танец как средство формирования исполнительской культуры в ансамбле народного танца
Курсовая Работа По Дисциплине Управление Проектами
Реферат по теме Общие сведения о сахарном диабете
С. Г. Зыбелин – первый русский профессор
Курсовая работа по теме Исследование влияния нелинейности на характеристики двигателя
Доклад по теме Сен-Пьер и Микелон
Дипломная работа по теме Бюджетный и налоговый учет бюджетных учреждений на примере Управления по делам молодежи муниципального образования Нижнего Тагила
Контрольная работа: Лабораторная работа по ВМС и ТКС N1. Скачать бесплатно и без регистрации
Реферат: Место рекламы в механизме возникновения договорных отношений. Скачать бесплатно и без регистрации
Реферат На Тему Организационное Обеспечение Деятельности Судов
Сочинение по теме Старые поэтические жанры на новом витке
Курсовая работа: Теневая экономика – причины, масштабы, роль. Скачать бесплатно и без регистрации
Курсовая работа по теме Психолого-педагогические условия развития речи младших школьников в процессе языкового образования
Дипломная работа по теме Оптимизационное планирование деятельности предприятия
Курсовая Работа По Экономике Предприятия В Таблицах
Контрольная работа: Технология металлов и конструкционные материалы
Подходы к верификации моделей
Курсовая Работа На Тему Обучающая Программа-Переводчик Текста
Реферат: Понятие ноу-хау в мировой торговле. Скачать бесплатно и без регистрации
Сочинение На Тему Спорт На Английском
Экономическая оценка морального ущерба работника от несчастного случая на производстве (на примере ОАО "Черномортранснефть") - Безопасность жизнедеятельности и охрана труда реферат
Правила безопасности на морских судах - Безопасность жизнедеятельности и охрана труда курсовая работа
Рабочее место на предприятии: планировка, оснащение и аттестация - Безопасность жизнедеятельности и охрана труда реферат