Вирусологические Методы Исследования Реферат
Вирусологические Методы Исследования Реферат
Главная
Коллекция "Otherreferats"
Медицина
Вирусологические исследования
Взятие патологического материала для вирусологических исследований. Лабораторные методы диагностики вирусных болезней. Выделение вирусов путем заражения чувствительных биологических моделей. Подготовка патологического материала для лабораторных анализов.
посмотреть текст работы
скачать работу можно здесь
полная информация о работе
весь список подобных работ
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Размещено на http://www.allbest.ru/
Взятие патологического материала для вирусологических исследований
При взятии вируссодержащего патологического материала большое значение имеет правильность выбора материала и его свежесть. Вирусы очень чувствительны к нагреванию и гниению. Поэтому материал надо брать от свежих трупов (не позднее 12 часов после гибели), а еще лучше от убитых клинически больных животных. При выборе материала учитывают тропизм вирусов и клиническое проявление болезни, вид и возраст животного, стадию течения болезни, наличие видимых изменений в органах и тканях и т.д.
При жизни животного в качестве вируссодержащего материала можно использовать: афты и их содержимое (ящур), пустулы (оспа), слизь и смывы со слизистых, моча (чума свиней и др.), кровь и лимфа (при пантропных инфекциях). Посмертно кроме указанных материалов берут кусочки паренхиматозных и других органов (печень, селезенка, почки, мозг, лимфотические узлы). Трупы мелких животных направляют обычно целиком.
Берут материал по возможности стерильно при помощи стерильных инструментов и в стерильную посуду. Если лаборатория рядом, материал отправляют в неконсервированным и обычно в термосе со льдом. Если же материал надо транспортировать далеко, то его обычно консервируют и тщательно упаковывают (особенно, если отправляют по почте или самолетом). Кусочки органов консервируют в 50% стерильном глицерине или в насыщенном растворе хлорида натрия и дополнительно помещают в термос со льдом. Жидкий материал консервируют замораживанием и сохраняют при -20 о С (в термосе с сухим льдом). К материалу прилагают сопроводительный документ, в котором указывают эпизоотологические, клинические и патологоанатомические данные.
Лабораторные методы диагностики вирусных болезней
После постановки предварительного диагноза на вирусную болезнь, его необходимо подтвердить лабораторными исследованиями. Последние включают два метода:
Включает исследование патологического материала на наличие вируса.
1. Обнаружение вируса микроскопия мазков:
а) обычная световая (на наличие телец-включений); люминесцентная (МФ - метод флуорохромирования, МФА- метод флуоресцирующих антител); ИФА - иммуноферментный анализ; электронная;
б) индикация вирусов -РГА (реакция гемагглютинации), РГАд (реакция гемадсорбции).
2 . Выделение вирусов путем заражения чувствительных биологических моделей :
3. Идентификация вируса (определение вида), типизация (определение типа, варианта) и дифференциация .
Проводят путем постановки серологических реакций с известными биофабричными биофабричными иммунными сыворотками, с помощью ПЦР и электронномикроскопически.
Серологический метод (применяют исследуемые сыворотки на наличие антител), постановка реакций с известными биофабричными вирусными антигенами . РДП, РИЭОФ, РЗГА, РНГА, РСК, МФА, ИФА, РЗГАд, РН.
Подготовка патологического материала для лабораторной диагностик и .
Присланный в лабораторию материал принимают, и по возможности, сразу начинают исследование, если же такой возможности нет, то его хранят до начала исследований в холодильнике при -20 о С.
Подготовку материала к вирусологическим исследованиям начинают с осмотра органов и тканей, если они были консервированы, их отмывают физраствором от консерванта.
Если труп поступил целый, сначала его осматривают, а затем проводят вскрытие, измененные органы тщательно осматривают, извлекают и помещают в стерильные флаконы, или чашки Петри. При подозрении на бешенство часто присылают голову трупа. В этом случае, ее осматривают, а затем вскрывают и извлекают мозг.
Жидкий материал проверяют на бактериальную загрязненность микроскопией мазков и посевом на среды (МПБ, МПА, среду Киитт-Тароцци и среду Сабуро) и при необходимости обрабатывают антибиотиками (пеницилин и стрептимицин по 500-2000 ЕД на мл среды в зависимости от степени загрязненности). патологический вирусный биологический
Из кусочков органов готовят суспензию. Для этого из присланных органов и тканей берут небольшие кусочки (1-1,5 г) и помещают в стерильную ступку, где после измельчения ножницами тщательно растирают до кашицеобразной массы со стерильным песком или стеклом. Затем добавляют стерильный физраствор в соотношении 1:5 или 1:10 и получается суспензия. Ее переносят в центрифужные пробирки и туда же вносят вышеуказанные антибиотики в тех же дозах. Суспензию в пробирках 2-3 раза замораживают (при -20 о ,-50 о С) и оставляют при комнатной температуре или в термостате при 37 о С. При этом происходит дополнительное разрушение клеток и освобождение вируса. Затем пробирки с суспензией центрифугируют 15-20 минут при 3000 об./мин. Надосадочную жидкость проверяют на стерильность посевом на среды в аэробные и анаэробные условия и затем используют как вируссодержащий материал для: заражения лабораторных животных; заражения куриных эмбрионов; заражения культур тканей; постановки серологических реакций в качестве антигена.
Одновременно из исходного патматериала готовят мазки или мазки-отпечатки, которые исследуют на наличие телец-включений и вируса в клетках, после специальной окраски под обычным микроскопом или применяют люминесцентную микроскопию с использованием иммунофлуоресценции (флуоресцирующие антитела). При необходимости можно из органов готовить гистосрезы и исследовать их гистологически (например, при бешенстве).
Выделение вируса проводят на развивающихся куриных эмбрионах, в культуре тканей и на лабораторных животных
Выделение вирусов на лабораторных животных.
Выбор лабораторных животных зависит от вида вируса. Лабораторные животные являются биологической моделью. Иногда приходится проводить 3-5 "слепых", безсимптомных пассажей, прежде чем удастся адаптировать вирус к лабораторным условиям. Однако, к некоторым вирусам лабораторные животные не чувствительны, в этом случае приходится использовать естественно восприимчивых животных. Как, например, при чуме свиней и инфекционной анемии лошадей.
Цель заражения лабораторных животных.
Изучить патогенез болезни; выделить вирус из пат. материала; наработка иммунных и гипериммунных сывороток; наработка вакцин; поддержание вирусов в условиях лаборатории; титрация, с целью определения количества вируса в единице объема; биологическая модель для постановки реакции нейтрализации.
Выбор метода заражения лабораторных животных зависит от тропизма вируса. Так, при культивировании нейротропных вирусов животных заражают в мозг; респираторных интранозально, интратрахеально; дерматропных - подкожно и внутрикожно. Заражение производят с соблюдением правил асептики и антисептики. Различают много Способы заражения животных: подкожный; - интрацеребральный; внутрикожный; интраперитониальный; внутримышечный; интраокулярный; внутривенный; интранозальный; алиментарный.
После заражения животных метят, помещают их в изолированный бокс и ведут наблюдение в течение 10 суток. Гибель животного в первые сутки после заражения считается неспецифичной и в дальнейшем не учитывается.
3 признака указывают на результативность заражения: наличие клинических признаков, гибель животного, патологоанатомические изменения (величины, формы, цвета и консистенции органа).
Выделение вирусов на куриных эмбрионах
Куриный эмбрион - это оплодотворенное куриное яйцо, в котором развивается зародыш (эмбрион). Культивирование вирусов на куриных и перепелиных эмбрионах в последнее время получило широкое распространение как один из наиболее простых и надежных методов культивирования и диагностики многих вирусов и некоторых бактерий - бруцеллы, риккетсии, вибрионы.
Многие вирусы человека и животных способны культивироваться в развивающихся куриных эмбрионах. Эмбриональная ткань, особенно оболочки эмбриона, богатые тканями зародышевого эпителия, является благоприятной средой для размножения многих вирусов. Вирусы, имеющие эпителиотропные свойства (оспа, ИЛТ и др.), успешно развиваются на хорионаллантоисной мембране, вызывая макроскопически видимые изменения. Различные представители миксовирусов (грипп, болезнь Ньюкасла, чума плотоядных и др.), вирусы инфекционного бронхита, гепатита утят, арбовирусы и др. хорошо размножаются в эмбрионе при введении материала в аллантоисную полость. Некоторые вирусы успешно культивируются в желточном мешке.
Преимущества: экономически выгодно, кроме того яйца легко доступны.
У развивающихся куриных эмбрионов отсутствуют защитные механизмы, т.к. система иммунитета еще не развита;
Скорлупа яиц препятствует проникновению через неё бактерий и вирусов из окружающей среды;
Для культивирования и выделения вирусов на куриных эмбрионах требуется очень несложное оборудование - обычный термостат или инкубатор.
1. Яйца получают из хозяйств заведомо благополучных по инфекционным заболеваниям;
2. Куриные эмбрионы лучше получать от белых пород кур (леггорн, русская белая), т. к. они более устойчивы к манипуляциям и не гибнут от маленьких травм. Кроме того, у них скорлупа белая и более прозрачная, чем у других пород, и легче просвечивается, что удобно для просмотра и наблюдения в процессе работы с ними;
3. Для инкубирования отбирают оплодотворенные яйца снесенные не более 10 суток тому назад;
4. Берут незагрязненные яйца, т. к. мыть их перед инкубированием нельзя, а грязные яйца хуже просвечиваются при просмотре (овоскопии) и при работе с ними можно инфицировать эмбрион в процессе манипулирования;
Инкубируют яйца в инкубаторе или в термостате с водяным нагревом и доступом воздуха, причем в процессе инкубации в термостате яйца 2-3 раза в сутки нужно переворачивать и для лучшего газообмена вынимать на 5-10 минут на воздух. Для поддержания определенной влажности в термостат ставят сосуд с водой для испарения, температура в термостате должна быть 38°.
Развитие зародыша происходит уже в первые сутки инкубирования, происходит закладка головного мозга, скелета. Строение куриного эмбриона в возрасте 7-9 дней.
Для заражения наиболее часто используют эмбрионы 7-12 суточного возраста. Работу с куриными эмбрионами проводят в стерильной комнате-боксе со строжайшим соблюдением асептики.
Цель заражения куриных эмбрионов : - выделить вирус из пат. материала; для приготовления живых и убитых вакцин; поддержание вируса в условиях лаборатории; - титрация вирусов; -биологическая модель для постановки реакции нейтрализации; - изучение интерференции вирусов и наработка интерферона;
Для заражения нужно отбирать жизнеспособные эмбрионы с хорошо выраженной подвижностью. Перед заражением все эмбрионы тщательно просматривают в затемненной комнате на овоскопе. Доза заражения составляет 0,1-0,2 смз.
В зависимости от вида вируса и цели заражения имеются различные методы введения вируссодержащего материала: Заражение на хориоаллантоисную оболочку. Заражение в аллантоисную полость.
Заражение в желточный мешок. Заражение в амниотическую полость Заражение в тело эмбриона и заражение в головной мозг. Заражение в крупные кровеносные сосуды.
После заражения куриные эмбрионы ставят в термостат. Их ежедневно овоскопируют в течение 7-8 суток в зависимости от вида вируса. Если эмбрион погиб в течение первых 14-18 часов после заражения, то гибель считается неспецифической и в дальнейшем не учитывается. Поэтому, так же как и при заражении лабораторных животных, в сомнительных случаях рекомендуется, делать несколько пассажей и в опыт брать на каждый материал по несколько эмбрионов.
После вскрытия погибших зараженных куриных эмбрионов наблюдают характерные изменения, вызванные вирусом. Наиболее часто поражения наблюдают на хориоаллантоисной оболочке: появляются кровоизлияния и воспалительные очаги круглой формы. Кровоизлияния могут быть на теле эмбриона. Весь материал собирают в стерильную посуду.
Причины заражения корью и краснухой. Симптомы заболеваний у детей. Диагностика, профилактика и лечение вирусных инфекций. Молекулярно-генетические, иммунохимические и вирусологические методы исследования. Иммунитет после перенесенных заболеваний. презентация [1,4 M], добавлен 25.04.2015
Конкретные причины, механизмы и общие закономерности возникновения, развития и завершения болезней, патологических процессов состояний и реакций. Признаки типового патологического процесса и методы их выявления (диагностики), лечения и профилактики. презентация [163,3 K], добавлен 04.09.2015
Понятие о патогенезе и инфекции. Стадии патогенеза и периоды развития инфекционной болезни. Условная классификация вирусов на группы по тропизму (в зависимости от вида клеток-мишеней). Профилактика вирусных заболеваний сельскохозяйственных животных. реферат [36,4 K], добавлен 12.10.2015
Основные симптомы и синдромы заболеваний печени и желчевыводящих путей. Основные лабораторные синдромы при диффузных поражениях печени. Степени активности патологического процесса в печени. Физические методы исследования и перкуссия печени по Курлову. презентация [58,2 K], добавлен 08.11.2012
Выписка, раздача и хранение медицинских препаратов в больнице. Изучение правил обращения с наркотическими средствами. Способы введения лекарственных средств. Забор материала для лабораторных исследований. Сбор мокроты и ее хранение. Взятие мазка из носа. реферат [155,3 K], добавлен 23.12.2013
Преимущества ПЦР–диагностики как метода микробиологического исследования выявления заболеваний, вызванных инфекционными возбудителями. Основные процедуры ПЦР–диагностики: подготовка пробы материала при выделении ДНК И РНК, реакция и детекция продукта ПЦР. реферат [33,2 K], добавлен 18.12.2010
Характеристика вирусов – неклеточных форм жизни, изучаемых с помощью микроскопа. Основные свойства вирусов: поражение вирусами лимфоцитов, особенность образовывать включения Оспа, бешенство, корь. Виды вирусных болезней: продуктивные, персистирующие. презентация [186,2 K], добавлен 12.12.2011
Работы в архивах красиво оформлены согласно требованиям ВУЗов и содержат рисунки, диаграммы, формулы и т.д. PPT, PPTX и PDF-файлы представлены только в архивах. Рекомендуем скачать работу .
© 2000 — 2020, ООО «Олбест»
Все права защищены
Вирусологические исследования
ВИРУСОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ — Большая...
Общая характеристика вирусов. Классификация.
Тема 11. Вирусологические методы исследования .
реферат - Вирусы. Методы их исследования .
Психология И Социология Науки Реферат
Стоит Ли Терпеть Обиды Сочинение Горький
Официально Деловой Стиль Документов Реферат
Сочинение По Творчеству Куприна И Бунина
Физическая Подготовка Спортсмена В Адаптивном Спорте Реферат