Trans Dominante
🛑 👉🏻👉🏻👉🏻 INFORMATION AVAILABLE CLICK HERE👈🏻👈🏻👈🏻
Хочешь видеть только хорошие новости? Жми!
Лента добра активирована. Это зона смеха, позитива и единорожек.
Лента добра деактивирована. Добро пожаловать в реальный мир.
Профессиональная доминатрикс (женщина, выполняющая доминирующую роль в БДСМ-практиках) Вея Веспер (Vea Vesper) в стриме для TJournal раскрыла несколько профессиональных секретов и поделилась историями о работе.
Веспер, живущая в Нью-Йорке, сообщила, что пришла в профессию по рекомендации мужа, который посоветовал ей монетизировать хобби. «Когда я работала в баре, у меня была пара клиентов, которые предлагали фут-фетиш и даже какие-то чаевые за это платили. Муж сказал: "Нравится — тогда иди работай"», — поделилась секс-работница. Она добавила, что родные и семья мужа знают о ее профессии и относятся к этому нормально.
Женщина отметила, что ее работа принципиально ничем не отличается от проституции, однако уточнила: «В моем случае я не занимаюсь вагинальным или каким-либо еще сексом, не раздеваюсь, меня нельзя потрогать, но я использую страпон». Она обратила внимание на то, что на Pornhub доминатрикс-сессии часто заканчиваются самоудовлетворением или сексом, однако она предпочитает другое завершение встречи с клиентом. После сеанса доминирования она оставляет 10-15 минут на то, чтобы обсудить с мужчинами, что им понравилось и не понравилось.
Как миллениалы изменили отношение всего мира к порно и спасли его от исчезновения
Коронавирус заставил людей по всему миру смотреть порно. Но почему секс-индустрия рушится?
Веспер подчеркнула, что очень серьезно подходит к выбору клиентов. Она всегда запрашивает рекомендации от других доминатрикс, когда к ней обращаются новые клиенты. Кроме того, чтобы попасть на доминатрикс-сессию мужчины, предоставляют ей личные данные или аккаунт в LinkedIn. Женщина обязательно проверяет, был ли потенциальный клиент судим за изнасилования или тяжкие телесные повреждения — судимым Веспер отказывает.
По словам Веспер, перед встречей они с клиентом общаются по электронной почте и обсуждают его предпочтения. Во время сессий она останавливается и спрашивает у мужчин, все ли в порядке. Кроме того, на БДСМ-сеансах практикуется использование стоп-слов. «Очень важно наладить доверие, потому что без доверия ничего не получится», — резюмировала секс-работница.
Ранее порноактриса Миа Халифа пожаловалась на то, что прошлое будет преследовать ее до конца жизни. Звезда фильмов для взрослых отметила, что женщины, снимающиеся в порно, не имеют прав на эти видео. Это значит, что ролики с их участием не получится удалить из сети, а последствия решений, которые они приняли много лет назад, будут с ними до смерти.
Что происходит в России и в мире? Объясняем на нашем YouTube-канале. Подпишись!
Трепет, красота, страх: 10 сильных снимков независимых фотографов
Вступили в силу новые правила техосмотра
Украшения «белого лебедя» России Анастасии Волочковой по цене шикарного особняка
Великая история или погоня за хайпом: какую задачу решил Альфа-банк, наняв на работу Моргенштерна
Я обошел 30 парадных в Петербурге: показываю самые поразительные из них
Шайбу Капризова признали голом недели в НХЛ: видео
В туалете московского торгового центра нашли трупы наркоманов
В Уфе заранее слили плей-офф, оставив финского тренера-ноунейма. «Салават Юлаев» ничего не...
9 фото, доказывающих, что люди раньше старели намного быстрее
«Выбирайте между моногамией, полиаморией и свингерством»
Как отношения с несколькими партнерами стали нормой в современном мире?
Ученые назвали срок гибели всего живого на Земле. Как именно это произойдет?
«Человек не может так долго скрываться»
Российского дальнобойщика признали самым опасным маньяком мира. Теперь его ищут в Москве
Названы гонорары российских фигуристок за медали на ЧМ
Школьников заставили извиняться перед одноклассницами за всех мужчин
В Кремле рассказали о возможности помощи с застрявшим в Суэцком канале судном
Путина попросили разобраться с Моргенштерном
Человек-феномен YouTube: как живет Геннадий Горин и за что его полюбили тысячи россиян
TikTok стал главным приложением года. Как он перевернул весь мир и сделал своих звезд миллионерами?
«Дом-2» смотрела и ненавидела вся Россия. Как проект о любви стал фрик-шоу и что творилось за кадром?
Граждан СССР убеждали в существовании единого советского народа. Каким он был на самом деле?
Россиянка родилась с неизлечимой болезнью, нашла в себе силы жить и помогать другим. Вот ее история
Американцы пытаются искоренить в себе расизм. Почему из-за этого белым становится сложно жить в США?
США и Россия на грани новой холодной войны. Почему в Америке этому не придают значения?
Как национализм в Белоруссии и на Украине должен был укрепить СССР, но лишь приблизил его распад
В Латвии снова почтили память легионеров СС. Как и зачем пособников нацистов превращают в героев?
Одеколон, самогон и водка. Почему Латвия стала самой пьющей страной Европы?
Зеленский повышает ставки в борьбе за власть. Какую роль в этом играют Россия, Крым и Донбасс?
Россия ищет новый путь развития. Почему пример хотят взять с Кореи?
Da Vinci Capital преследуют британские регуляторы. Почему ему нужна компенсация от Павла Дурова?
10 лет назад преступления банды «цапков» потрясли Россию. Почему в Кущевке вновь царит беспредел?
Эти преступления поставили в тупик лучших следователей страны. Десятки лет они остаются нераскрытыми
У губернатора Пензенской области дома нашли 500 миллионов. Кто и за что платил ему такие деньги?
Кто сделал СССР страной героев и почему жизнь в Союзе была сплошным подвигом
На что способны наушники Apple за 63 тысячи рублей
Хабиб окончательно ушел из MMA. Чем займется непобежденный Орел за пределами октагона?
Александр Овечкин продолжает творить историю. Сможет ли русский форвард побить главный рекорд НХЛ?
Как компьютерная игра завоевала мир, принесла миллиарды ее создателям и славу российскому школьнику
Лондонское дерби и новое испытание для «Тоттенхэма» — главные интриги выходных в АПЛ
Фанаты заставили Зака Снайдера переделать «Лигу справедливости». Что из этого вышло?
Может ли писатель воровать: как классиков обвиняли в плагиате и что им за это было
Самый популярный модный телепроект мира приходит в Россию. Что его ждет?
Финчер, кочевники и Черные пантеры: кто будет претендовать на главную кинопремию мира
Twitter оказался под угрозой полной блокировки в России. Что это значит для других соцсетей?
Он рассказывал о свободной любви и спасал от самоубийства: каким был легендарный журнал «Птюч»
Как Клинтоны сохранили брак вопреки секс-скандалам и стали одной из самых богатых семей в США
Домогательства, шантаж и булимия: истории моделей об обратной стороне модных съемок
Как знаменитая летчица боролась за права женщин, в одиночку перелетела Атлантику и погибла в небе
Таинственные обряды, бесконечные молитвы и фотографии трупов. Чем индийский Тибет удивил россиянина
Кровожадные племена, дешевые проститутки и обман. С чем россиянин столкнулся в Эквадоре
Как устроен тайный мир искателей подводных сокровищ, где правят жулики, адвокаты и бухгалтеры
В голове у маленькой девочки появились две тысячи личностей. Как они помогли ей выжить?
История москвички о переезде в Швейцарию
Рассматриваем в деталях самый роскошный седан Bentley Flying Spur
Выбираем самые интересные ролики месяца
Разбираемся, что с произошло с самым компактным кроссовером Субару после рестайлинга
Какие квартиры можно купить в Москве по цене до пяти миллионов рублей
10 самых необычных небоскребов будущего. Где их построят?
Француз решил построить настоящий средневековый замок. Что из этого вышло?
Дома миллионов россиян оказались под угрозой из-за тающей мерзлоты. Как спасти российскую Арктику?
В России появятся цифровые рубли. Как новая валюта изменит экономику?
Что думают о школьной удаленке родители, дети и учителя?
Россияне годами скрывали свои доходы. Как теперь их заставляют платить налоги?
aDepartment of Biology, Stanford University, Stanford, CA 94305;
bDepartment of Genetics, Stanford University School of Medicine, Stanford, CA 94305;
cDepartment of Microbiology and Immunology, Stanford University School of Medicine, Stanford, CA 94305;
dDepartment of Comparative Medicine, Stanford University School of Medicine, Stanford, CA 94305
See allHide authors and affiliations
PNAS October 2, 2018 115 (40) 10136-10141; first published September 18, 2018; https://doi.org/10.1073/pnas.1805195115
Edited by Pei-Yong Shi, University of Texas Medical Branch, and accepted by Editorial Board Member Diane E. Griffin August 22, 2018 (received for review March 25, 2018)
Inhibitors of dengue virus, a mosquito-borne pathogen, are urgently needed. Virally encoded NS2B/3, a two-subunit serine proteinase, is responsible for many cleavages within the viral polyprotein. We demonstrate that two cleavage sites flanking NS3 and one that is internal are self-processing. This strict intramolecular cleavage dictates that, if uncleaved precursors can inhibit viral growth, this phenotype will be trans-dominant. Indeed, a mutation that abrogates one of the self-processing sites caused trans-dominant inhibition of wild-type virus. This site is also the most susceptible to a dengue proteinase inhibitor, providing a compelling rationale for its efficacy. We suggest that explicit targeting of specific intramolecular cleavage sites will be an effective antiviral strategy that can suppress multiple variants in an intracellular quasispecies.
Many positive-strand RNA viruses translate their genomes as single polyproteins that are processed by host and viral proteinases to generate all viral protein products. Among these is dengue virus, which encodes the serine proteinase NS2B/3 responsible for seven different cleavages in the polyprotein. NS2B/3 has been the subject of many directed screens to find chemical inhibitors, of which the compound ARDP0006 is among the most effective at inhibiting viral growth. We show that at least three cleavages in the dengue polyprotein are exclusively intramolecular. By definition, such a cis-acting defect cannot be rescued in trans. This creates the possibility that a drug-susceptible or inhibited proteinase can be genetically dominant, inhibiting the outgrowth of drug-resistant virus via precursor accumulation. Indeed, an NS3-G459L variant that is incapable of cleavage at the internal NS3 junction dominantly inhibited negative-strand RNA synthesis of wild-type virus present in the same cell. This internal NS3 cleavage site is the junction most inhibited by ARDP0006, making it likely that the accumulation of toxic precursors, not inhibition of proteolytic activity per se, explains the antiviral efficacy of this compound in restraining viral growth. We argue that intramolecularly cleaving proteinases are promising drug targets for viruses that encode polyproteins. The most effective inhibitors will specifically target cleavage sites required for processing precursors that exert trans-dominant inhibition.
Dengue virus is a mosquito-borne pathogen that causes an estimated 390 million annual cases globally (1). Infection can lead to dengue fever, dengue hemorrhagic fever, or dengue shock syndrome, and no vaccines or antiviral compounds are currently approved for use. The development of preventative and therapeutic treatments for this and other neglected or emerging diseases is a priority for global healthcare organizations.
Positive-strand RNA viruses encode polyproteins that must be cleaved during and after translation. A virus-encoded serine proteinase (NS3) and its essential cofactor (NS2B) are responsible for virally mediated cleavages among all members of the Flavivirus genus including West Nile (WNV), yellow fever, Japanese encephalitis, Zika, and dengue viruses. When first synthesized, NS2B/3 is embedded within the dengue polyprotein, and is responsible for seven of the processing events within it (2) (Fig. 1A). In WNV, cleavage between NS2B and NS3 has been demonstrated to be exclusively intramolecular (3). For dengue virus, this cleavage is dilution-insensitive (4), suggesting that strict intramolecular processing at this junction is common among flaviviruses. In addition to the proteolytic events that originally defined the viral proteins, there is an internal NS3 cleavage (NS3int). The significance of this cleavage is not yet known, though it has been reported to occur in mammalian but not insect cells (5, 6).
Inhibition of dengue virus by ARDP0006. (A) Dengue virus polyprotein organization showing cleavages made by NS2B/3 (black arrows) and host proteases (gray arrows). (B) Two high-resolution crystal structures of full-length NS2B/3 display multiple conformations of the helicase and protease domains relative to each other (Protein Data Bank ID codes 2VBC and 2WHX, green and teal, respectively). The proteinase active site is shown in red with the internal NS3 cleavage site in orange. (C) Chemical structure of NS2B/3 inhibitor ARDP0006. (D and E) Effect of 25 μM ARDP0006 (dashed lines) on extracellular and intracellular dengue virus (multiplicity of infection, 0.1 PFU per cell) during growth in BHK-21 cells. Inhibition of viral growth is comparable to that observed previously (11), with a reported IC50 of 4.2 μM. n = 4 in D and E.
NS3 makes an attractive drug target, as it has multiple essential functions. The N-terminal domain contains the proteinase active site, and the C-terminal domain exhibits RNA helicase, RNA 5′ triphosphatase (RTPase), and NTPase activities (7). In addition, mutations that alter conserved, nonenzymatic surface residues reduce viral fitness (8). Structures determined by X-ray crystallography have shown two different orientations (Fig. 1B) of the proteinase domain relative to the helicase domain of NS3 (9, 10), arguing that these domains might be flexible with respect to each other in solution as well.
An inhibitor of dengue NS2B/3 proteinase ARDP0006 (1,8-dinitro-4,5-dihydroanthraquinone; Fig. 1C) was previously identified in a high-throughput screen. The NS2B/3 proteinase tested was engineered to contain only the cofactor regions required for NS3 proteinase activity (NS2B residues 49 to 96) joined to residues 1 to 185 of NS3 via a flexible Gly4-Ser-Gly4 sequence. This minimal proteinase efficiently cleaves substrates supplied in trans but cannot self-process. Thus, this screen tested for inhibitors of intermolecular cleavage (11, 12). It is of note that, while the half-maximal inhibitory concentration (IC50) for intermolecular cleavage in solution was 432 μM (12), the IC50 during infection was 4.2 μM (11). The additional inhibitory effect observed in cells could be due to increased local concentrations or off-target effects. However, we envisaged an alternative mechanism in which accumulated proteinase precursors inhibit viral growth.
We set out to investigate mechanisms of viral inhibition by ARDP0006. We tested whether other polyprotein cleavages mediated by NS2B/3 were self-processing, and whether precursors that would accumulate in the absence of self-cleavage would be trans-dominant inhibitors of wild-type (WT) virus. Our findings support the hypothesis that inhibiting one particular self-processing event leads to trans-dominant inhibition of RNA replication. This provides insight into the previously unexplored role of dengue precursors in infection and suggests an approach to antiproteinase drug development by preferentially targeting specific intramolecular cleavages.
Despite extensive screening and chemical synthesis, ARDP0006 remains one of the most potent NS2B/3-targeted inhibitors of dengue viral growth, with a reported IC50 of 4.2 μM (13). Addition of 25 μM ARDP0006 reduced the yield of extracellular and intracellular dengue virus by 100-fold during a single 24-h infectious cycle (Fig. 1 D and E). Negligible cytotoxicity was observed at this concentration of ARDP0006 (SI Appendix, Fig. S1).
ARDP0006 was identified as an inhibitor of fluorogenic substrate cleavage by an NS2B/3 proteinase incapable of self-processing (11). We investigated whether this compound also inhibits NS2B/3 self-cleavage. To this end, a minimal self-cleaving proteinase termed NS2B/3pro was used (14). This construct contains the required cofactor domain of NS2B (amino acids 47 to 95), the last 10 residues of NS2B to reconstruct the cleavage site (amino acids 122 to 131), and the protease domain of NS3 (amino acids 1 to 185), but lacks the transmembrane domains.
To study NS2B/3pro cleavage, conditions under which the kinetic analysis could be performed immediately after synthesis were needed. To this end, rabbit reticulocyte lysate (RRL) was used to produce NS2B/3pro radioactively labeled with [35S]methionine. A proteinase active-site mutation, NS3-S135A, caused this protein to be produced as a precursor only (Fig. 2A, lane 1), and provides a marker for intact NS2B/3pro. We first wanted to establish whether ARDP0006 inhibits NS2B/3 cleavage at the IC50 of intermolecular proteinase activity (432 μM) or of viral inhibition (4.2 μM). The active version was efficiently translated and cleaved into products after a 90-min incubation (Fig. 2A, lane 2). ARDP0006 inhibited this cleavage, as seen by the greater proportion of labeled proteinase precursor with increasing inhibitor concentration (Fig. 2A, lanes 3 to 8). However, the IC50 for NS2B/3pro self-cleavage was high, comparable in magnitude to the Ki for cleavage of small substrates in vitro (Fig. 2B).
Inhibition of NS2B/3pro in vitro by ARDP0006. An in vitro assay was developed to measure inhibition of intramolecular cleavage at NS2B-3 in the dengue minimal proteinase. (A and B) Minimal proteinase was produced in RRL in the presence of increasing concentrations of ARDP0006 (50 μM to 2 mM), and remaining precursor was plotted to determine the IC50 of self-cleavage in vitro (n = 1). (C and D) A pulse–chase assay was developed to monitor the effect of the inhibitor on reaction rate. Peak precursor abundance in RRL occurred at 25 to 30 min (C, lanes 1 to 3), and inactive NS3-S135A protein was robustly translated (C, lane 4) but no cleavage products were observed. The 32-kDa species seen in lane 4 is frequently observed background in this system. After labeling and translation, addition of 100 μM ARDP0006 resulted in modest but statistically significant inhibition of cleavage (D, dashed line) relative to mock treated reactions (D, solid line). Line fitting was performed using GraphPad Prism v.7 using a log[inhibitor] vs. response variable-slope equation for determining the apparent IC50 (B) and single-phase exponential decay functions to fit the data in D. The P value in D was determined by comparing the fit of individual and shared models using the extra sum-of-squares F test. n = 3 (dashed line) or 5 (solid line).
One explanation for the observation that ARDP0006 is a more efficacious inhibitor of viral growth than of NS2B/3 proteinase activity is that, although it was identified as an inhibitor of NS2B/3, it inhibits the virus through an off-target effect. Given that identification of drug targets is often facilitated by the identification of drug-resistant variants, we attempted to select ARDP0006-resistant dengue virus in cultured cells (SI Appendix). From two independent selection pools, there were no individual or shared mutations in NS2B/3, but the mutation A21V in nearby NS4A did arise. This valine substitution is extremely rare in natural dengue isolates, occurring in only 4 of 3,871 sequences deposited in the National Center for Biotechnology Information (NCBI) Virus Variation database (15). Reconstruction of the A21V mutation in isolation showed that it did not confer specific resistance to ARDP0006 but increased the rate of viral growth in both the presence and absence of inhibitor (SI Appendix, Fig. S2). We conclude that there is a high barrier to resistance against ARDP0006 but that rapidly growing variants can emerge, possibly due to off-target effects of the compound.
Recently, ano
Когда женщина доминирует в БДСМ. Ролевые игры подчинения и господства
Доминирующая секс-работница раскрыла секреты профессии: Интернет...
Targeting intramolecular proteinase NS2B/3 cleavages for trans -dominant...
transdominant - Wiktionary
ООО "Доминант Транс", Красногорск (ИНН 5024181605, ОГРН 1175024034041)
Amatur Shemale
Transgender Big Tits
Karina Shemale
Trans Dominante
