Тонкослойная хроматография (ТСХ) лекарственных средств
MacondoRCМы в телеграмм:
💡 Получите все необходимое вместе с Macondo. Стать членом сообщества можно через Macondo Synthesis или Macondo Shop (ссылка в шапке профиля).
У нас вы найдете:
🟢 Рецепты синтеза:🔹Мефедрон🔹A-PVP🔹МДМА🔹Амфетамин🔹Метамфетамин🔸Рецепты других веществ
🟠 Товары:🔹Реактивы и прекурсоры🔹Лабораторная посуда и оборудование🔹Конструкторы почтой🔹Конструкторы кладом
🟡 Услуги:🔹Консультации для новичков🔹Консультации для магазинов🔸 Справочник WIKI
🟣 Прочее:🔹 Правила🔹 Контакты
Хроматография используется для разделения смесей веществ на их компоненты. Все формы хроматографии работают по одному и тому же принципу. В этой статье я объясню этот метод, определив Rf амфетамина, метамфетамина и мефедрона.
Хроматографические пластинки имеют неподвижную фазу (твердое тело или жидкость, нанесенную на твердое тело) и подвижную фазу (жидкость или газ). Подвижная фаза протекает через неподвижную фазу и увлекает за собой компоненты смеси. Различные компоненты перемещаются с разной скоростью. Причины этого мы рассмотрим далее на странице. Тонкослойная хроматография выполняется именно так, как указано: с использованием тонкого однородного слоя силикагеля или оксида алюминия, нанесенного на кусок стекла, металла или жесткого пластика. Силикагель (или оксид алюминия) является неподвижной фазой. Неподвижная фаза для тонкослойной хроматографии также часто содержит вещество, которое флуоресцирует в УФ-свете или в йодной камере – по причинам, которые вы увидите позже. Подвижная фаза представляет собой подходящий жидкий растворитель или смесь растворителей.
Как работает тонкослойная хроматография?
Силикагель представляет собой форму диоксида кремния (кремнезема). Атомы кремния соединены через атомы кислорода в гигантскую ковалентную структуру. Однако на поверхности силикагеля атомы кремния присоединены к группам -ОН. Итак, на поверхности силикагеля вместо связей Si-O-Si имеются связи Si-OH. На диаграмме показана небольшая часть поверхности кремнезема. Поверхность силикагеля очень полярна и благодаря группам -ОН может образовывать водородные связи с подходящими соединениями вокруг нее, а также дисперсионные силы Ван-дер-Ваальса и диполь-дипольное притяжение.
Подготовка.
Вам понадобится:
1. Шприц на 5 мл х 42. Пластиковая баночка для анализа мочи х 4
3. Большие пластиковые контейнеры для еды (или одна большая мензурка и пластиковый контейнер) х 2
4. Пластинка для ТСХ со слоем силикагеля 5х10 см (можно большой отрежьте ножницами)
5. Растворители этилацетат, метанол, гексан (можно заменить на четыреххлористый углерод), водный раствор аммиака 10% и выше, спиртовой раствор йода
6. Мягкий карандаш, линейка и плоскогубцыНе забудьте про перчатки и респиратор, проводить эксперимент в проветриваемом помещении.
Изготовление хроматограммы.
1. Вам необходимо приготовить текучий раствор этилацетат:метанол:раствор аммиака 85:10:5. На 10 мл нужно взять 8,5 мл этилацетата, 1 мл метанола и 0,5 мл раствора аммиака и смешать.
2. Очистите пластину силикагелем этим раствором. Поместите пластинку в раствор, ее глубина должна составлять 3-4 мм в большом стакане (как на рис.1). Для комфортных манипуляций можно использовать пинцет. Важно: не мочите тарелку водой, иначе она испортится. Вы должны держать пластину в растворе до тех пор, пока фронт растворителя не достигнет верхнего края пластины.
3. Начнем с простого случая. Существует четыре вещества: амфетамин ( А ), метамфетамин ( L ), кофеин ( К ) и мефедрон ( М ).
Для этого эксперимента вам необходимо получить бесплатную базу лекарств. Поместите 10-15 мг образца (несколько комочков) в стеклянную (пластиковую) банку, залитую двумя каплями водного раствора аммиака. Затем налейте 3–4 капли гексана или четыреххлористого углерода и встряхивайте одну минуту. Свободное основание вашего препарата разбавлено в органическом слое.
4. Теперь вам нужно поместить его на заранее подготовленную хроматографическую пластинку. Возьмите иглу от шприца и обрежьте ее плоскогубцами, как на примере. Вам нужно получить ровный край.
Возьмите чистую и сухую тарелку и проведите карандашом линию примерно на 5-6 мм вверх от нижнего края. Любая маркировка на пластине, показывающая исходное положение капли, также должна быть сделана карандашом. Если бы что-либо из этого было сделано с чернилами, красители чернил также будут перемещаться по мере развития хроматограммы. Отметьте четыре точки на равном расстоянии между ними. Погрузите конец обрезанной иглы в органический слой первого наркотического раствора. Коснитесь пластины кончиком иглы и сделайте небольшое пятно диаметром 3-4 мм, подождите, пока оно высохнет, повторите процедуру 10 раз. Повторите этапы 2 , 3 для остальных веществ.
Распространенная ошибка: не делайте большое жирное пятно, так как во время эксперимента ваше вещество может перекрывать другие вещества.
5. Когда пятна свободных оснований высохнут, пластинку выдерживают в неглубоком слое растворителя в закрытом стакане. Важно, чтобы уровень растворителя находился ниже линии, на которой находится пятно . Подождите, пока линия растворителя не достигнет 4-5 мм от верхнего края пластины, и вытащите ее. После проведите карандашом линию по лицевой линии растворителя. Высушите на воздухе.
6. Хроматограмму помещают в закрытый контейнер (например, в другой стакан, накрытый часовым стеклом, или в большой пластиковый контейнер) вместе с несколькими кристаллами йода. Пары йода в контейнере реагируют пятнами на хроматограмме. Интересующие вас вещества могут проявляться в виде цветных пятен. Обведите их карандашом и в центре каждого пятна нарисуйте точки.
Также вы можете использовать УФ-лампу с длиной волны 254 и 365 нм.
Как подготовить йодную камеру.
Возьмите одну пластиковую или стеклянную банку, налейте 10–15 мл воды, 4–5 капель спиртового раствора йода. Перемешивайте 7-10 минут. Слейте воду. Йод осаждается в воде по стенкам банки. Поместите эту банку в контейнер.
Фактор удерживания.
После завершения разделения отдельные соединения выглядят как пятна, разделенные вертикально. Каждое пятно имеет коэффициент удерживания (Rf), который равен расстоянию, пройденному растворителем за общее расстояние. Формула Rf выглядит следующим образом: Rf = расстояние, пройденное образцом/расстояние, пройденное растворителем.
Значение Rf можно использовать для идентификации соединений благодаря их уникальности для каждого соединения. При сравнении двух разных соединений в одинаковых условиях соединение с большим значением Rf является менее полярным, поскольку оно не прилипает к неподвижной фазе до тех пор, пока полярное соединение будет иметь более низкое значение Rf. На значения Rf и воспроизводимость может влиять ряд различных факторов, таких как толщина слоя, влажность на пластине ТСХ, насыщенность сосуда, температура, глубина подвижной фазы, природа пластины ТСХ, размер образца и параметры растворителя. Эти эффекты обычно вызывают увеличение значений Rf. Однако в случае толщины слоя значение Rf уменьшится, поскольку подвижная фаза движется вверх по пластине медленнее.
Обсуждение результатов.
В эксперименте я получил три места вместо ожидаемых четырех. Повторение эксперимента показывает, что кофеин не элюируется раствором этилацетат:метанол:аммиак 85:10:5. Экспериментально подтверждено, что этот раствор пригоден для элюирования таких лекарств, как амфетамин, метамфетамин и мефедрон.
Rf исследуемых препаратов:
- Амфетамин - 0,53
- Метамфетамин - 0,55
- Мефедрон - 0,65
Объяснение.
У меня есть две таблички с результатами. Два измеренных расстояния между начальной точкой и серединой обведенной точки. Пятно амфетамина прошло 42 мм на первой тарелке и 49 мм на второй тарелке от линии старта, линия фронта растворителя прошла 85 и 86 мм соответственно. Rf1 =42/85=0,49, Rf2 =49/86=0,52. Затем я вычислил среднее арифметическое 0,53. Такие же расчеты были произведены и для других веществ.
Заключение.
Как показывает эксперимент, вы можете измерить Rf вашего лекарства и сравнить его с известным веществом в той же пластинке. Сделайте пятно своей безлекарственной основы и 1-4 пятна других лекарств для проверки Rf. Если пятна находятся на одинаковом расстоянии от линии старта, то, вероятно, они представляют собой одно и то же вещество. Кроме того, если от препарата у вас появилось несколько пятен, вероятно, у вас смесь веществ. Некоторые лекарства имеют несколько пятен, поскольку представляют собой смесь лекарства и побочных продуктов синтеза. Однако сравнить их с другими препаратами можно с помощью тонкослойной хроматографии.