Скорость наркотик Анси
Скорость наркотик АнсиСкорость наркотик Анси
• • • • • • • • • • • • • • • • •
Скорость наркотик Анси
• • • • • • • • • • • • • • • • •
Гарантии ❗ Качество ❗ Отзывы покупателей ❗
• • • • • • • • • • • • • • • • •
👇 👇 👇 👇 👇 👇 👇 👇 👇 👇 👇 👇
Наши контакты:
▶️▶️▶️ (НАПИСАТЬ ОПЕРАТОРУ В ТЕЛЕГРАМ)️ ◀️◀️◀️
👆 👆 👆 👆 👆 👆 👆 👆 👆 👆 👆 👆
• • • • • • • • • • • • • • • • •
🚩 ИСПОЛЬЗУЙТЕ ВПН (VPN), ЕСЛИ ССЫЛКА НЕ ОТКРЫВАЕТСЯ!
🚩 В Телеграм переходить только по ссылке что выше! В поиске тг фейки!
• • • • • • • • • • • • • • • • •
Spontaneously contracting syncytia of cardiomyocytes derived from human-induced pluripotent stem cells (hiPSC-CM) are a useful model of.
Скорость наркотик Анси
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version. Спонтанно Договаривающихся syncytia кардиомиоцитов, производный от человека индуцированные плюрипотентные стволовые клетки являются полезной модели человеческого сердца физиологии и фармакологии. Здесь мы представляем систему высокопроизводительного скрининга для количественного определения эффектов экзогенных соединений на избиение частоты, используя Ca чувствительных Люминесцентную краску и контролем температуры изображений несколькими хорошо пластины читателя. Спонтанно Договаривающихся syncytia кардиомиоцитов, производный от человека индуцированных плюрипотентных стволовых клеток hiPSC см являются полезной модели человеческого сердца физиологии и фармакологии. Мы разработали систему высокопроизводительного скрининга для количественного определения воздействия внешних соединений на hiPSC-CM частоты биений, используя Ca чувствительных Люминесцентную краску и контролем температуры изображений несколькими хорошо пластины читателя. Мы опишем, как подготовить сотовый плит и составные пластин и как запускать автоматизированные assay для достижения высокой чувствительностью и воспроизводимость. Мы также описывают, как для преобразования и анализа данных флуоресценции для предоставления надежных мер воздействия препарата на спонтанный ритм. Этот assay может использоваться в программах обнаружения наркотиков для руководства химических оптимизация, или выгнутых, соединений, влияющих на функции человеческого сердца. Настоящий Протокол описывает метод для измерения воздействия наркотиков на частоте спонтанных избиение syncytia hiPSC-см на физиологически соответствующих ритмов. Человека индуцированных плюрипотентных стволовых клеток могут дифференцироваться в функциональных кардиомиоцитов, которые устанавливают спонтанно syncytia избиение в пробирке 3 , 1 , 2 , 4. Эти hiPSC см могут быть получены в большом количестве через коммерческих провайдеров или производства в лаборатории, и они являются полезным источником клеток для создания модели человеческого сердца физиологии и фармакологии. В частности они могут использоваться для прогнозирования или характеризовать сердечных эффектов, которые могут произойти, когда препарат вводят людей 5. Частота биений hiPSC-CM syncytia может быть измерена в физиологических условиях, с использованием микроэлектродные массивы или импеданса зондирования 1 : эти неинвазивные методы обеспечивают очень подробную информацию о воздействии наркотиков, но они скорее низкая пропускная способность и они не позволяют тестирование большого комплекса библиотек в реалистичные сроки и бюджетные ограничения. Более эффективной системы может быть разработан с использованием ну флуоресценции воображения читателя пластины и Ca чувствительных красителя 6 , но классическая пластины читателей препятствуют субоптимальные температуры контроля и приобретение частоты. Метод, описанный здесь сочетает в себе запись избиения узоры на физиологические ритмы и достаточным разрешением для предотвращения этих проблем. На положительной стороне этот метод является простым, надежным и высокой пропускной способности, которая позволяет быстрое тестирование большого числа соединений по разумной цене. На отрицательной стороне этот метод требует Быстрый плита читателя с эффективной температуры, который является дорогим инвестиций, и он содержит мало механистический информацию о наблюдаемых наркотиков эффекты, которые могут потребовать дальнейших испытаний с более подробными методы. Таким образом это удобно подготовить две ячейки пластины с тремя замороженными аликвоты. В большинстве случаев, вследствие низкой изменчивости этот assay, это достаточно для выполнения повторяющихся измерений испытаний соединений и в каждой ячейке пластина, quadruplicate измерения положительных элементов управления форсколин, N6-cyclopentyl аденозин и E , и складчатых измерения отрицательного контроля ДМСО только. Следующий протокол считает такой эксперимент с тест соединения, две клетки пластины и 12 миллионов клеток, поставляется как три аликвоты замороженные; Это может быть легко увеличен, если нужны дополнительные данные точек. Примечание: Подготовка клетки пластины 3 — 4 недели до начала измерения воздействия наркотиков. Примечание : подготовка документа, составные плиты и пробирного пластины в день измерения воздействия наркотиков, между дней 22 и 28 эксперимента. Использование флуоресцентных пластины читателя, с контролем температуры и флуоресценции соответствующего фильтра kit и возбуждения света источника. Примечание : выполнить сбор данных в день измерения воздействия наркотиков. Выполните шаги 3. Примечание : анализ данных могут выполняться в любое время после измерения. На рисунке 1 показана запись представителя Ca волн на базовом через одну плиту хорошо. Очень редко менее чем 1 из 10 экспериментов , несколько скважин менее 5 имеют аритмии или отсутствие ритма. В трех ну пластины, мы пробовали кардиомиоцитов от другого поставщика см. Таблицу материалы и получил очень похожи исходных значений для спонтанного избиение. Блокаторы сердечной ионных каналов влияют на ритм кардиомиоцитов в воспроизводимый способом 5. Выше 1 мкм, Амлодипин аресты биений пунктирные линии , как можно ожидать от факта что Ca Велоспорт имеет решающее значение для спонтанного схватки. Другие блокаторы кальциевых каналов Ca селективного dihydropyridine производят очень похожие эффекты. Эффект развивается в течение первых 5 минут, и она не меняется в течение следующих 60 мин. Основой для этого неравенства не известна. Эффект хорошо развита в течение первых 5 минут, и она не меняется многое в течение следующих 60 мин. Однако выше 30 мкм, Тетродотоксин аресты избиение в течение первых 5 мин, тогда как после 30 мин, она арестовывает его выше 1 мкм. Другие блокаторы кальциевых каналов Na, например лидокаина или мексилетин, аналогичный эффект все или ничего. Бепридил, блокатор смешанного сердечной Na, Ca и K каналы 9 , также производит эффект все или ничего Рисунок 2D. Это свидетельствует о том, что в этом препарате, блок Na каналов является основным действием бепридил. Ускорение, вызванное Ca канал блок не видели, и более прогрессивный, замедляется вследствие IKr блока появляется масках Na канал эффекта. Рисунок 1: представитель базовых Ca волн через ну плита. A все скважины через пластину демонстрируют курс регулярных биений с маленькой изменчивости. Этот образ записывается непосредственно из программ чтения пластины. Каждый след s в продолжительности. Интенсивность флуоресценции является произвольным относительная свет единиц производные от серого видео камеры. B этой раздутии одной 10 s трассировки показывает низкий шум сигнала. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры. Рисунок 2: представитель эффекты сердечных иона канал блокаторы. Два аспекта являются наиболее важными для успешной записи избиения частоты. Первый — проявлять осторожность с обшивкой клеток и культуры. В частности важно, чтобы попытаться избежать царапин слоя клеток в нижней части скважины при обмене среды. Это приемлемо для сенсорных в нижней части скважины с пипетки, но тот же угол должен использоваться каждый раз, тем самым производить только крошечные нуля в слой клетки и не влияет на производительность assay. Мы не могли получить эта однородность, использование устройств за исключением читателя пластины, используемые здесь, но это может быть возможным с специальные модификации для регулирования температуры: было бы сделать протокол, здесь представлены более широко использоваться за пределами единого бренда пластины читатель. Для достижения стабильности температуры в течение всего эксперимента с устройством, используемый здесь, было необходимо остановить каждую запись, прежде чем она закончилась; в противном случае робот будет извлечь измеренной пластину ячейки. Этот технический вопрос может исчезнуть в следующем выпуске программного обеспечения читателя пластины, но сейчас он остается критическим. Если плита клетки ошибочно передается вне читателя плита, он должен быть загружен обратно внутрь как можно быстрее. Тем не менее качество этого эксперимента будут ухудшаться, потому что изменения температуры влияют на скорость избиение чрезвычайно быстро. Некоторые другие аспекты, которые не были тщательно протестированы, могут быть менее важными. Например hiPSC см производители рекомендуют покрытие культуры клеток пластины перед посевом клетки, но в этой конкретной assay, покрытие не используется, потому что клетки придерживаются довольно легко на различных поверхностях, и это очень трудно правильно пальто Ну плиты. Тем не менее клеток плиты покрытия все еще может быть допустимой, или это может даже улучшить качество анализа. Мы также никогда не испытывал ли растворителей помимо ДМСО будет приемлемым, но из опыта с другими технологиями записи ожидается, что аналогичные концентрации EtOH или метанола также будет терпимой. Мы обычно используем hiPSC-CMs от того же производителя, и были протестированы клетки от только одного дополнительного поставщика, который, как представляется, работают аналогичным образом. Кроме того мы использовали лишь небольшое количество различных серий hiPSC-CMs, которые были выбраны путем prechecking их, чтобы убедиться, что они вели себя подобным образом в первоначальный пакет. Один или два пакетов были сочтены неуместными, потому что их syncytia бедных стабильность и воспроизводимость в условиях культуры используется здесь. В противном случае фармакологии появился очень похож по всей партии, при тестировании ограниченной группы «типичного» соединений форсколин, N6-cyclopentyl аденозин и E, а также эндотелина, isoproterenol, амлодипина и ponesimod. Это может быть целесообразным оценить ли hiPSC-CM, полученных от пациентов с заболеваниями сердца будет предоставлять различные результаты, хотя никакой разницы между здоровых доноров и пациентов наблюдалось при оценке кардиотоксичности ингибитора киназы тирозина Однако мы решили ждать 22 — , 28 дней, потому что это время, когда выражение профиль сердца каналов и маркеры созревания стабилизировалась Он не рассматривался ли сопоставимые результаты будут получены, если клетки использовались раньше или позже. Протокол, в описанный здесь использует очень простой измерения скорости спонтанного избиение hiPSC см для оценки потенциального воздействия препарата на человека сердечной электрофизиологии. Его основные преимущества перед другими методологиями, что i оно поддается среде высокопроизводительного скрининга, ii он записывает деятельность кардиомиоцитов и эффекты препаратов при физиологических температурах, и iii не требует Электрофизиологические опыт для выполнения или для оценки результатов. В исследовании проверки выполняется с много лекарств, одобренных для использования человеком мы показали, что assay реагирует на лекарства, используемые в человеческой медицине как предсказано существующих клинических данных 5. Так как этот метод учитывает все потенциальные последствия для сердечного ритма, он дополняет всеобъемлющий в пробирке Proarrhythmic проба CiPA инициативы 14 , специально оценивает про аритмических потенциал. В будущем этот метод может обеспечить дальнейшее понимание режима действия препаратов, показано, что влияет на уровень спонтанной избиение. Вполне вероятно, что дополнительные механистическая информация присутствует в флуоресценции записей Ca транзиентов например , в их амплитуда или форму. Если флуоресценции записи выполняются на более высокие цены приобретения например , 30 Гц , эти параметры легко извлекаются помимо избиение скорость, и это может быть интересно соотнести изменения этих параметров с известных последствий клинически употребляли наркотики. All rights reserved. Faculty Resource Center. High Schools. Sign In. JoVE Journal Medicine. Automatic Translation. Ertel 1. Summary Спонтанно Договаривающихся syncytia кардиомиоцитов, производный от человека индуцированные плюрипотентные стволовые клетки являются полезной модели человеческого сердца физиологии и фармакологии. Abstract Спонтанно Договаривающихся syncytia кардиомиоцитов, производный от человека индуцированных плюрипотентных стволовых клеток hiPSC см являются полезной модели человеческого сердца физиологии и фармакологии. Introduction Настоящий Протокол описывает метод для измерения воздействия наркотиков на частоте спонтанных избиение syncytia hiPSC-см на физиологически соответствующих ритмов. Protocol 1. Подготовка сотовый плит Примечание: Подготовка клетки пластины 3 — 4 недели до начала измерения воздействия наркотиков. День 0 эксперимента Примечание : для целей планирования, тест соединения приложение может выполняться на любой день между дней 22 — 28 эксперимента. Примечание: Используйте клетки с их поставщик условии соответствия культуры и обслуживания средств массовой информации. Передать 1 мл суспензии клеток тщательно 50 мл Конические трубки. Мыть каждый cryotube с 1 мл теплой обшивка среднего для извлечения оставшихся клетки и добавить мыть СМИ же конической трубки от шаг 1. Смесь тщательно еще 8 мл теплой обшивка среднего в суспензию клеток. Количество живых клеток, используя метод исключения Трипановый синий и hematocytometer 8. Распределить суспензию клеток в двух пластин ячейки Ну, добавляя 25 мкл для каждой скважины около 12 ячеек на хорошо. Примечание: Сотовый плит не нужно быть ветротурбин с любой матрицы см. Замените среднего покрытие 50 мкл теплое обслуживание среды в каждой скважине сотовый плит. Дни 2 — 21 до й день эксперимента Примечание : hiPSC-CMs не нужно любой пассированый за этот период, как они, без деления клеток. Возобновить половину среднего обслуживания каждые 2 — 3 дня и возобновить его полностью на 7, 14 и 21 дней. Примечание: Измерения флуоресценции может производиться между дней 22 и 28 эксперимента. Более длинней продолжительности не пробовал, но все еще могут быть в порядке. Примечание : это может быть также сделано накануне вечером. Примечание : фондовая решения будет разбавленным fold к тому времени они добавляются к клеткам, и целью является достижение финальный тест концентрации 1 мкм форсколин, 30 мкм N6-cyclopentyl аденозин и 10 мкм E, которые производят надежных и воспроизводимых эффекты. Подготовьте испытаний соединений как ДМСО акций решения при fold запланированных испытаний концентрациях например , 10 мм для теста на 30 мкм. Складе решения можно также готовить в день до. Для каждого дубликата измерения требуется минимум 5 мкл Стоковый раствор. Подготовьте составные пластины. Распределить в две составные ну пластины, добавляя 1. Центрифуга для соединения плит на x g за 1 мин. Загрузите соединения плит плиты читателя. Примечание: Следующие шаги следует быть выполнены как можно скорее к минимуму испарения в составные пластины. Подготовьте Люминесцентную краску. Воссоздать Ca чувствительных Люминесцентную краску и утоления с 10 мл теплой обслуживания среды с помощью антибиотиков. Запустите программное обеспечение reader пластины при необходимости и загрузите накапайте советы. Настройка программного обеспечения для записи 2 мин сегмент кальция волны с частотой приобретение по крайней мере 10 Герц для определения базовых избиение ставки для каждой скважины. Для одной ячейки пластины разбавьте 3 мл запасов флуоресценции средних 12 мл теплой обслуживания среды с антибиотиками, чтобы сделать средство флуоресценции. Замените 20 мкл среды в каждой скважине клетки пластины с 30 мкл флуоресценции среды. Пипетка вверх и вниз, 1 x смешивать. Место пластину клеток в считывающее устройство пластины как быстро, как можно скорее, чтобы акклиматизироваться к температуре hiPSC см. Подождите 60 минут до начала сбора данных. Начало сбора данных в программное обеспечение читателя пластины для записи 2 мин сегмент Ca волны с частотой приобретение по крайней мере 10 Гц, чтобы определить базовые, победив ставки для каждой скважины. Примечание : для каждой записи последовательности, убедитесь, что плита ячейки не переносится автоматически из устройства после сбора данных. Это предотвращает пластину клетки от охлаждения при комнатной температуре. С некоторыми версиями программного обеспечения пластины читателя может быть необходимо остановить каждую запись, прежде чем он полностью заканчивается для достижения этой цели. Начало сбора данных в пластине читателя программное обеспечение для записи 2 мин сегменты волн Ca, начиная примерно 5, 15, 30, 45 и 60 мин после нанесения смеси убедитесь, что каждый раз, что клетки пластина остается в устройстве. Экспорт необработанных данных для каждой записи период от программ чтения пластины как ASCII текстовых файлов. Импорт необработанных данных в программное обеспечение для анализа данных. Для каждой скважины и все моменты времени Извлеките основной избиение частоты. Примечание: С программным обеспечением анализа данных, перечисленные в Таблице материалов , победив частоты могут быть рассчитаны с обычной Пользовательский анализ, используя функцию LombPeriodogram, основанный на методе Lomb — Скарджла спектрального анализа наименьших квадратов 7. Периодограмм должна быть рассчитана на диапазон частот от 0,01 до 5 Гц. Основной частоты могут быть извлечены из периодограмм, с помощью процедуры PeakAutoFind. Этот метод анализа обеспечивает более точные измерения, избиение частотах, чем метод поставляется как опция с программным обеспечением чтения пластины. Однако последний может все еще использоваться если настройки программного обеспечения не является альтернативой. Экспорт основной избиение частоты для каждой записи период с программное обеспечение для анализа данных как копии буфера обмена или как текстовые файлы ASCII. Импортируйте частоты первичного избиение в программного обеспечения таблицы буфера обмена вставки или импорта текстового файла. Примечание : шаги 4. Для каждой скважины, нормализовать к базовой частоты биений в каждый момент времени после применения препарата 5, 15, 30, 45 и 60 мин путем деления частоты первичного избиение в то время точки по частоте основного избиение в базовых. Рассчитать средний эффект ДМСО в каждый момент времени после применения препарата 5, 15, 30, 45 и 60 мин путем усреднения нормализованных значений для 20 скважин, где была применена ДМСО. Для каждой скважины и каждый раз точки после применения препарата 5, 15, 30, 45 и 60 мин , вычесть среднее ДМСО эффект время соответствия для же пластины. Средняя повторяющихся измерений. Примечание : Если соединение изменения частоты или программное обеспечение не может найти основной частоты после соединения того, визуальный осмотр избиение шаблон может оценить ли соединение производится аритмий. Representative Results На рисунке 1 показана запись представителя Ca волн на базовом через одну плиту хорошо. Discussion Два аспекта являются наиболее важными для успешной записи избиения частоты. Disclosures Авторы не имеют ничего сообщать. Acknowledgements Авторы имеют без подтверждений. References Guo, L. Estimating the risk of drug-induced proarrhythmia using human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes. Toxicological Sciences. Jonsson, M. Impedance-based detection of beating rhythm and proarrhythmic effects of compounds on stem cell-derived cardiomyocytes. Assay and Drug Development Technologies. Kattman, S. Stem cells and their derivatives: a renaissance in cardiovascular translational research. Journal of Cardiovascular Translational Research. Ma, J. High purity human-induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes: electrophysiological properties of action potentials and ionic currents. Sube, R. Journal of Biomedical Science and Engineering. Sirenko, O. Multiparameter in vitro assessment of compound effects on cardiomyocyte physiology using iPSC cells. Journal of Biomolecular Screening. VanderPlas, J. Understanding the Lomb-Scargle Periodogram. Cornell Univeristy Library. Strober, W. Current Protocols in Immunology. Ertel, E. Calcium channel blockers and calcium channels. Calcium Channel Blockers. Sanguinetti, M. Modulation of potassium channels by antiarrhythmic and antihypertensive drugs. Duran-Riveroll, L. Marine Drugs. Sharma, A. High-throughput screening of tyrosine kinase inhibitor cardiotoxicity with human induced pluripotent stem cells. Science Translational Medicine. Puppala, D. Comparative gene expression profiling in human-induced pluripotent stem cell--derived cardiocytes and human and cynomolgus heart tissue. Tags Медицина. This article has been published Video Coming Soon Keep me updated:. Contact Us. Recommend to library.
Силуэт Сейшелы купить закладку Ганджубас
Scientific Article | Этот протокол направлен на описание новой методологии измерения внутренней скорости сердечного возбуждения с.
АМФЕТАМИН ФЕН бесплатные пробы Абу-Даби
Скорость наркотик Анси
WAX картриджи наркотик Джульяно-ин-Кампанья
Скорость наркотик Анси
Героин купить наркотик Москва Нагатинский Затон
Портативные идентификаторы радиационных изотопов RIIDEye™ X/M. Независимо от того, проводите ли вы анализ образцов воды или почвы или ищете материалы.
Купить закладку скорость соль кристаллы Тасос
Скорость наркотик Анси
Клагенфурт купить Героин закладки
Предисловие к русскому переводу. Уважаемые коллеги! Мы представляем Вашему вниманию полный перевод рекомендаций KDIGO по Острому.
Скорость наркотик Анси
Скорость наркотик Анси
Данилов купить закладку Героин
Скорость наркотик Анси
Купить героин хмурый фенатанил Дуррес