Шанхай Китай бесплатные пробы Каннабис, Марихуана

≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈

Гарантии! Качество! Отзывы!

Проверенный магазин!

≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈

▼▼ ▼▼ ▼▼ ▼▼ ▼▼ ▼▼ ▼▼ ▼▼ ▼▼

Наши контакты (Telegram):☎✍

>>>✅(НАПИСАТЬ ОПЕРАТОРУ В ТЕЛЕГРАМ)✅<<<

▲▲ ▲▲ ▲▲ ▲▲ ▲▲ ▲▲ ▲▲ ▲▲ ▲▲

≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡

⛔ ВНИМАНИЕ!

📍 ✅✅✅ Используйте ВПН, если ссылка не открваеться !!!

📍 В Телеграм переходить только по ССЫЛКЕ что ВЫШЕ! В поиске НАС НЕТ там только фейки!

📍 Гарантии и Отзывы!

📍 Работаем честно!

≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡

Шанхай Китай бесплатные пробы Каннабис, Марихуана

Описываем метод индуцирования волосатых корней агробактериями ризогенов-опосредованного преобразования в тартарной гречке Fagopyrum tataricum. Это может быть использовано для исследования функций генов и производства вторичных метаболитов в тартарной гречихе, быть принятым для любой генетической трансформации, или использоваться для других лекарственных растений после улучшения. Тартарная гречка ТБ - Фагопирум татарикум L. Gaertn обладает различными биологическими и фармакологическими видами деятельности, поскольку содержит обильные вторичные метаболиты, такие как флавоноиды, особенно рутетин. Агробактерии rhizogenes постепенно используются во всем мире, чтобы вызвать волосатые корни в лекарственных растений для исследования функций генов и повышения урожайности вторичных метаболитов. В этом исследовании мы описали подробный метод для создания A. Cotyledons и hypocotyledonary соты на дней были выбраны в качестве explants и инфицированных A. Генерируемая трансформация волосатых корней была определена на основе морфологии, отбора резистентности канамицин и экспрессии генов репортера зеленый флуоресцентный белок. Впоследствии, преобразованные волосатые корни были самораспространены по мере необходимости. Результаты показали, что экспрессия генов, связанных с флавоноидами, и урожайность флавоноидных соединений рутина и кверцетина были значительно p qlt; 0. Подробный пошаговый протокол, описанный в данном исследовании для генерации волосатых корней, может быть принят для любой генетической трансформации или других лекарственных растений после корректировки. Тартарная гречка ТБ Fagopyrum tataricum L. Gaertn является одним из видов дикотипидона, относящихся к роду Фагопирум и семейство Polygonaceae 1. Как вид гомологионной пищи китайской медицины, ТБ получает значительный интерес благодаря своему характерю химического состава и разнообразной биоактивности против болезней. Туберкулез в основном богат углеводами, белками, витаминами и каротиноидами, а также полифенолами, такими как фенольные кислоты и флавоноиды 1. Продемонстрировано различные биологические и фармакологические свойства флавоноидов, в том числе антиоксидативные, антигипертензивные 2 и противовоспалительные, а также противораковые и антидиабетические свойства. Agrobacterium rhizogenes является бактерией почвы, которая способствует развитию волосатых корнеплодов в нескольких высших растений, особенно dicotyledons, путем заражения раны сайтов 4 , 5. Этот процесс инициируется передачей T-ДНК в корневой плазмид Ri плазмид 5, , 6 и обычно сопровождается интеграцией и экспрессией экзогенного гена из плазмида Ri и последующими шагами генерации волосатого фенотипа корня 7. Кроме того, волосатые корни, индуцированные A. Они могут быть использованы в нескольких областях исследований, в том числе искусственного производства семян, исследования корневых узелков, а также при изучении взаимодействия с другими организмами, такими как микоризные грибы, нематод, и корнеплоды 7 , 9. Кроме того, волосатые культуры преобразования корней широко используются в качестве экспериментальной системы для исследования биохимических путей и химической сигнализации и для производства вторичных метаболитов растений, которые используются в качестве фармацевтических препаратов, косметики и пищевых добавок 8 , Ценные вторичные метаболиты, в том числе индоле алкалоиды, акониты, тропановые алкалоиды, терпеноиды и флавоноиды, синтезированные в волосатых корнях дикого типа, были исследованы в течение нескольких десятилетий у многочисленных 2 , видов, таких как ginsenoside в panax ginseng 11 , кумарин в Am majmius 12 , и phenolic compounds. Волосатые корни были произведены с использованием A. Например, A. ТБ волосатые преобразования корня также были исследованы 2. Немногие подробные протоколы доступны в отношении развития волосатые корни при посредничестве A. Например, Sandra et al. Полностью развитые волосатые корни могут быть визуализированы через недель после инъекции А. Другое исследование также сообщило трансгенной волосатой корневой системы, индуцированной A. Кроме того, Supaart et al. Однако поэтапный процесс эффективного поколения трансформации волосатых корней, особенно при тб-тбе, был относительно менее продемонстрирован. В этом исследовании, мы описали подробный протокол с использованием A. Эксперимент длился недель, от прививки семян до генерации волосатых корней, включая препарат эксплантации, инфекцию, сокультивирование, субкультирование и последующее распространение. Кроме того, A. FtMYB , который является светоиндуцированным транскрипционным фактором, регулирует синтез рутения при различных условиях света 5. Таким образом, это исследование демонстрирует переэкспрессию FtMYB в ТБ волосатые корни и экспрессия ключевых генов фермента, а также содержание рутения и других флавоноидов, таких как кверцетин. Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian. Туберкулез, используемый в этом исследовании, был назван BT18, который возник из породы 'Цзиньцзяо No 2', культивируемой Исследовательским центром малого разного зерна Академии сельскохозяйственной науки Шаньси. Основные этапы этого протокола иллюстрируются на рисунке 1. Если не указано иное, все эксплантные инкубации проводились при состоянии х света и х темного фотопериода при 25 градусах Цельсия. Если иное не указано, все explants- или бактерий, связанных операций были выполнены в асептических условиях в ламинарный капот потока. Все средства массовой информации ингредиенты для A. После регулировки рН, все носители были автоматически заведомо при градусах по Цельсию в течение 20 мин. Твердые носители были подготовлены путем заполнения 25 мл среднего в чашку Петри диаметром 9 см и позволяющие ему затвердеть. Эксплуатировать все опасные химические вещества в дымовом шкафу и откладывать их в контейнер для опасных отходов. Ген b4 является членом семейства транскрипционных факторов bHLH, который еще не опубликован. Для оценки потенциала тб волосатых корней, A. Активированный A. Корни дикого типа использовались в качестве отрицательного контроля для оценки трансгенного выражения. В этом протоколе, A. Регулярно наблюдайте за ростом волосатых корней во время распространения и своевременно удаляйте загрязненные и инактивированные корни. При необходимости повторите следующие шаги, чтобы распространить более волосатые корни. От субкультивирования до сбора урожая уходит примерно дней. Идентификация также может проводиться в соответствии с волосатым геномом корня и сопротивлением, которые не охвачены в этом протоколе. Эта процедура в первую очередь фокусируется на гене репортера и идентификации гена. Agrobacterium rhizogenes -опосредованный ТБ волосатые корня преобразования Это исследование описывает пошаговое протокол, который был создан для получения генетически преобразованных волосатых корней с использованием A. Потребовалось около недель от прививки семян туберкулеза до сбора выявленных волосатых корней, и некоторые ключевые шаги изображены на рисунке 1 A-H. Кратко, стерилизованные shellized семена были привиты рисунок 1 B для достижения более быстрого стерильного врастворения. За этим следуют некоторые ключевые шаги, в том числе заражение эксрастенив активированными А. Зараженные экспланты должны быть равномерно размещены на затвердевшей среде MS и пространство должно быть сохранено между ними, чтобы легко отделить различные трансгенные линии. Волосатые корни появляются с пушистым белым цветом в плагиотропной манере в местах раны explants Рисунок 1 H. Волосатые корни образуют высоко разветвленную и взаимосвязанные матрицы и могут распространяться по мере необходимости рисунок 1 I. Собранные волосатые корни могут быть использованы для исследования функции гена или гена или взаимодействия белка-белка. Кроме того, ТБ волосатые корни могут быть массово распространены для получения вторичных метаболитов, таких как рутева в назначенных биореакторов. Преобразованные волосатые корни продемонстрировали зеленую флуоресценцию при освещении под синим или ультрафиолетовым светом представлены с помощью черных наконечников стрел на рисунке 2 А , в то время как непреобразованные волосатые корни не демонстрировали зеленую флуоресценцию рисунок 2 B. Волосатые корни с высоким сигналом GFP распространяются в течение двух недель, как показано на рисунке 2 C. Для дальнейшего определения того, успешно ли бинарный вектор трансформировался в геном туберкулеза, были проведены идентификационные данные генов. Праймеры перечислены в таблице 2. Присутствие трех генов во всех трансгенных линиях рисунок 3, полосы показало, что бинарный вектор был успешно преобразован в геном туберкулеза. Кан и GFP отсутствовали в корнях дикого типа рисунок 3, переулок 3 и экспериментальном отрицательном контроле рисунок 3, переулок 4 , в то время как b4 был обнаружен в корнях дикого типа. Эти 3 гена, несомненно, были представлены в положительном контроле Рисунок 3, полоса 2 , но, по-видимому, отсутствует в отрицательном контроле рисунок 3 , полоса 4. Оценка светоиндутого транскрипции фактора FtMYB при ТБ с использованием вышеупомянутой волосатой корневой системы FtMYB был выражен с использованием вышеупомянутого протокола волосатые индукции корня. Вкратце, волосатые корни 0. Впоследствии были проверены регулятивные эффекты FtMYB на экспрессию генов, связанных с синтезом рутена, и выход рутения. По сравнению с контрольной группой, относительное выражение FtMYB продемонстрировало значительное увеличение всех трех независимых трансгенных линий. Рисунок 4 B и Рисунок 4 C иллюстрируют продвижение биосинтеза рутения и кверцетина на метаболическом уровне через переэкспрессию FtMYB Содержание рутения и кверцетина в трансгенных были значительно p qlt; 0. Вместе эти результаты подтвердили, что стратегия, описанная в данном исследовании, может быть успешно использована для генерации волосатых корневых преобразований при туберкулезе и исследования экспрессии генов и метаболической урожайности вторичных метаболитов. Рисунок 1: Процессы по индуцированию А. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры. Рисунок 2: Преобразование бинарного вектора, несущего ген репортера GFP. B и C представляют корень дикого типа и распространение преобразованных волосатых корней, соответственно. Полоса 1 : молекулярный размер маркеров белая стрелка указывает bp , полоса 2 : плазмид двоичный вектор pK7GWIWG2D II проведение Кан , GFP , и b4 генов в качестве положительного контроля, полоса 3 : дикий корень типа, полоса 4 : очищенный H 2 O как отрицательный контроль, и полосы : 7 независимых трансгенных линий. Эксперименты проводились в тройном и проводились 3 раза. D Выражение генов, связанных с флавоноидным синтезом путей в трансгенных линий. Относительный уровень выражения был нормализован до уровня контроля актина. Данные представлены в виде среднего стандартного отклонения n No 3. Таблица 1: Средства массовой информации и их ингредиенты. Таблица 2: Последовательность праймеров. Туберкулез был использован в нескольких исследованиях, связанных со вторичными метаболитами на генетическом и метаболических уровнях 1, , 2, , 5, , 27, , Волосатые корневой культуры, как уникальный источник для производства метаболита, играет ключевую роль в метаболической инженерии 29 и может быть использован для изменения метаболических путей путем вставки связанных генов. Ким и др. Содержание колютина, полученного в волосатых корнях туберкулеза, было более чем в 10 раз выше, чем у корней дикого типа. В настоящем исследовании, введение FtMYB привело к более высокой экспрессии генов, связанных с рутетом и резкое производство рутения в ТБ волосатые корни. Этот метод был подтвержден, чтобы быть склонны к фенотипической характеристики и экспрессии генилпропанидов связанных генов, таких как FtF3H и FtFLS в ТБ волосатые корни 5 , 30 , Чжан и др. Чжоу и др. Эти результаты вместе с нашими выводами указывают на возможное влияние волосатых корней трансформации на взаимодействие между Транскрипционными факторами FtMYB и генами, связанными с биосинтезом рутевого биосинтеза. Хотя имеются ограниченные данные о поэтапном протоколе индукции тб волосатых корней, мы впервые описываем в этом пошаговом протоколе для получения трансгенных тбволосых корней эффективным и стабильным образом с помощью A. Во время этих экспериментальных процессов, многочисленные факторы должны быть тщательно рассмотрены, чтобы получить оптимальные индуцированные волосатые корни. Во-первых, выбор эксплантирующих растений является определяющим фактором. Известно, что сорта туберкулеза влияют на морфологию волосатых корней и выработку фенольных соединений. Thwe et al. Они также нашли волосатые корни в одном сорте, который был темно-красно-фиолетовый из-за его содержания антоциана В нашем исследовании, 2 только что развернулся cotyledons и hypocotyls были выбраны в качестве explants. Это потому, что молодые и нежные листья пользу высокой волосатые корня индукции скорость 2 , 30 , в то время как высоко дифференцированные и старые клетки растений отрицательно влияют на волосатые индукции корня. Во-вторых, штамм А. Различные бактериальные штаммы обладают различными преобразующими способностями с точки зрения морфологии и индукционной эффективности волосатых корней, которые могут быть освещены различными плазмидами, укрытыми штаммами Aye et al. Этот вывод был поддержан Ким и др. Пушистый белый внешний вид волосатых корней, полученных с помощью нашего протокола в согласии с волосатые корни, порожденные в Сальвиа miltiorrhiza 36 , в котором тот же штамм ACCC проведения бинарного вектора pK7GWIWGG2D II был использован, чтобы заставить замолчать целевой ген. В-третьих, degerming втомяя pretreatment материалов и концентрация cefotaxime в селективной культуре также играет существенную роль в волосатых индукции корня. Неполная дезинфекция на любом шаге может привести к провалу волосатого преобразования корня. Кроме того, концентрация бактерий оказывает значительное влияние на выработку transformed корней. Высокие концентрации могут уменьшить растительные клетки путем конкурентного ингибирования, в то время как низкие концентрации могут вызвать низкую доступность 4. Кроме того, культурные условия, такие как среда роста, соответствующее время preculturing и coculturing, и другие биотические или абиотические факторы играют важную роль в волосатый индуктон корня. Хуан и др. Это можно объяснить высокой соляной средой, которая подходит для формирования волосатых корней, в то время как низкая соляная среда способствует чрезмерному бактериальному умножению AS является одним из видов фенольных соединений, которые могут облегчить A. Поэтому мы рекомендуем среду кокультуры с рН 5. Таким образом, они субкультурные волосатые корни каждые 24 дня; однако, мы рекомендуем субкультивировать каждые две недели, чтобы избежать подрумянивания волосатых корней. Кроме того, условия окружающей среды, такие как свет, гормоны, температура и УФ-излучение, как представляется, влияют на экспрессию флавоноидов биосинтеза, связанных с генами, сильно стимулирующим и угнетающим сигнал трансдукции 41 , Предыдущее исследование продемонстрировало значение дальнего красного света в мониторинге экспрессии генов, связанных с рутетом, в тб волосатых корнях 5. Волосатые корни имеют большой потенциал для производства вторичных метаболитов, рекомбинантных белков и дажеантител Это в первую очередь из-за их легкого и быстрого роста в гормональной среде, будучи менее дорогим, нет необходимости для регенерации в полные растения 21 , и относительно высокий урожай вторичных метаболитов по сравнению с тем, что от исходного растительного материала Эти корни также могут быть отделены от первоначального explant для создания долгосрочных, стабильных и характеризуемых корневых клонов, поддерживающих их биосинтетические способности и фенотипы. В целом, на основе этих выводов, этот протокол обеспечивает быстрый, четкий и эффективный метод для производства преобразованных волосатых корней для исследования производства вторичных метаболитов и выдвигает ссылку на волосатые индукции корня в других растениях. Тем не менее, потенциал для изучения волосатые корневые культуры для получения массивных урожаев биологически активных соединений зависит от соответствующей биореакторной системы, в которой определенные параметры, такие как поставка кислорода должны быть обеспокоены 4 , 8. Этот протокол ограничивается производством вторичных метаболитов, полученных в волосатых корнях, и для исследования визуализированного фенотипа функциональных генов, таких как дисперсия цвета и содержание вторичных метаболитов; однако, фенотипические изменения во всем заводе независимо от получения регенерированных растений из волосатых корней не могут быть оценены в этом исследовании. Эта работа была поддержана Фундаментальными научно-исследовательскими фондами для Центральных научно-исследовательских институтов социального обеспечения XKT Mi, Y. To learn more about our GDPR policies click here. If you want more info regarding data storage, please contact gdpr jove. You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions jove. Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login. You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free. To get started, a verification email has been sent to email institution. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your 'Spam' folder. Your access has now expired. Provide feedback to your librarian. If you have any questions, please do not hesitate to reach out to our customer success team. Login processing JoVE Journal Genetics. Подготовка противотуберкулезных установок Подготовка семян туберкулеза Выберите пухлые и неповрежденные семена туберкулеза рисунок 1 A1 , которые сохраняются при температуре менее 20 градусов по Цельсию в течение не более 2 лет. Замочите семена в воде при 28 градусах по Цельсию в течение примерно 20 минут, чтобы семя слоя можно было легко снять рисунок 1 A2. При необходимости используйте ножницы, чтобы вырезать слот на семена для облегчения пилинг. Стерилизация семян туберкулеза Поместите очищенных семян в стерилизненую конильную колбу мл. Эксплуатировать его в дымящийся шкаф и сажать в контейнер для опасных отходов, если в любом случае используется ртуть бихлорид. Вылейте гипохлорит натрия. Вымойте семена с помощью стерильной деионизированной воды 5 раз. Прожтели семена сухими стерильной бибулульной бумагой. Отрегулируйте рН до 5. Распределите 10 семян равномерно на бутылку среды MSSA. Пронзите семена в культурном зале при 25 градусах Цельсия и 1 кв с при условии света в течение дней. Приготовление стерильных эксплуатсов Выберите надежные саженцы туберкулеза рисунок 1 C , когда 2 части котиледона развернуты. Отрежьте саженцы от корней Рисунок 1 C красно-даковых наконечников стрел , избегая контакта со средой. Поместите их в стерильное блюдо Петри. Нарежьте гипокотилы на 0, см сегментами и стриги котиддоны примерно на 0,5 см. Прекультуры этих экскультуры на MSSA среды при условии света для 24 ч. Перенесите их в стерилизненую конильную колбу мл, которая теперь готова к заражению. Подготовка А. Активация а. Инкубировать бактерии при 28 градусах по Цельсию в течение ч. Выберите моноклональную колонию и культивайте ее в другом блюде Петри в том же вышеописанном ключе. Отсрочка А. Спин при х г в течение 10 мин при 20 градусах Цельсия. Инфекция эксплантов Наполнить бактериальной подвеской, полученной в шаге 3. Выняйте экспланты и сужайте их с помощью стерильной бибулульной бумаги. Культура экскультуры с A. Наложение эксрастенив на фильтровальную бумагу при 25 градусах По Цельсия в течение 3 дней в темноте рисунок 1 F. Инкубировать их вертикально при состоянии света при 25 градусах Цельсия и 1 кв. Волосатые корни возникают примерно через 1 неделю после инкубации рисунок 1 H черно-дэшнс наконечники стрел указывают на появление волосатых корней. Выберите волосатые корни, показывающие белый вид и быстрый рост. Нарежьте их на кусочки см. Очевидно, число их на чистой скамейке. Удалите рыжие и загрязненные волосатые корни и выберите те, с белой внешностью. Выберите волосатые корни, демонстрирующие сильный сигнал флуоресценции в пронумерованных трубках или завернутые с помощью отмеченной фольги после высыхания их с абсорбирующей бумагой. Лиофилизируют их в жидком азоте, а затем хранили весь урожай при 80 градусах По Цельсию для дальнейшего исследования. Идентификация гена Тритуруировать 0,1 г волосатых корней в мелкий порошок в жидком азоте. Подготовьте геномную ДНК независимых трансгенных линий туберкулеза с использованием модифицированного метода бромистого цетилтриметилламмония CTAB 25 в соответствии с инструкцией производителя набора геномной ДНК растений. Выполните полимеразы цепной реакции PCR с использованием нг геномных шаблонов ДНК и праймеров, перечисленных в таблице 2. Выполните цикл усиления следующим образом: предденатурация при 94 градусах по Цельсию в течение 5 мин, денатурация при 94 градусах по Цельсию на 30 с, грунтовка при 55 градусах По Цельсию на 30 с и грунтовка при 72 градусах по Цельсию на 30 с. Пятно гели с нуклеиновой кислотой окрашивания и визуализировать их под ультрафиолетовым светом. Play Video. Cite this Article Mi, Y. Before you can use the favorites feature you must sign in or create an account. Continue with Shibboleth or Forgot Password? Please enter your email address so we may send you a link to reset your password. You might already have access to this content! Please enter your Institution or Company email below to check. Please enter an institutional email address. Check access. Create Account. Forgot Password? Reset Password. Phone number. Request trial. Thank You! A JoVE representative will be in touch with you shortly. Waiting for verification email? Please click here to activate your free 2-hour trial. If you do not wish to begin your trial now, you can log back into JoVE at any time to begin. Enable Javascript for audio controls. Get cutting-edge science videos from J o VE sent straight to your inbox every month. We use cookies to enhance your experience on our website. Continue Learn more Close.

Шанхай Китай бесплатные пробы Каннабис, Марихуана

Цена на Соль, альфа pvp Лосиноостровский

Шанхай Китай бесплатные пробы Каннабис, Марихуана

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

Отзывы кокаин Монпелье

Шанхай Китай бесплатные пробы Каннабис, Марихуана

Купить Героин, гашиш Кочин Индия

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

Сайт заблокирован хостинг-провайдером. Вы владелец сайта? Информация о причинах блокировки была выслана на Ваш контактный E-mail. Также Вы можете связаться с нашей службой технической поддержки с помощью раздела 'Помощь и поддержка' в панели управления хостингом или любым удобным для Вас способом. This page is blocked by service provider. Are you the website maintainer? A letter concerning circumstances of this has been sent to your contact email automatically. You can also get in touch with out support team using your Control Panel 'Help and Support' section or in any other convenient way.

Воронеж цена на кокаин