Руза бесплатные пробы Трава, марихуана

≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈

Гарантии! Качество! Отзывы!

Проверенный магазин!

≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈

▼▼ ▼▼ ▼▼ ▼▼ ▼▼ ▼▼ ▼▼ ▼▼ ▼▼

Наши контакты (Telegram):☎✍

>>>✅(НАПИСАТЬ ОПЕРАТОРУ В ТЕЛЕГРАМ)✅<<<

▲▲ ▲▲ ▲▲ ▲▲ ▲▲ ▲▲ ▲▲ ▲▲ ▲▲

≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡

⛔ ВНИМАНИЕ!

📍 ✅✅✅ Используйте ВПН, если ссылка не открваеться !!!

📍 В Телеграм переходить только по ССЫЛКЕ что ВЫШЕ! В поиске НАС НЕТ там только фейки!

📍 Гарантии и Отзывы!

📍 Работаем честно!

≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡

Руза бесплатные пробы Трава, марихуана

Мы предоставляем экономически эффективного и быстрого молекулярного генотипирования протокол, который использует различные конкретные ПЦР-праймеры, что целевой последовательности ДНК, различия внутри хлоропласта trnL-F Spacer региона различать сорта Этот метод был разработан и протестирован с использованием свежих, замороженных, а в последнее высушивают ткани листа. Ядерная и пластид ДНК извлекается одновременно. ПЦР-праймеры, используемые в настоящем протоколе основывается на последовательности различия между пластид trnL-F Spacer области cogongrass и JBG генотипов. Эти различия возникают в виде полиморфизмов Single нуклеотидные полиморфизмы и индели вставка и удаление , что позволило развитие эстрадно-специфических праймеров путем размещения грунтовки в местах уникальных последовательностей рис. Включите положительный контроль, чтобы все ПЦР реагентов работают хорошо и может генерировать группы. Включите отрицательный контроль, чтобы ни один из реагентов загрязненных нежелательных ДНК. Отрицательного контроля не содержит шаблон и должно привести к отсутствию группы продукции. Это подтверждает, что все ПЦР реагентов работают хорошо. Кроме того, отрицательный контроль без шаблона реакция не должна содержать полосы для любого грунтовка си др. Это подтверждает, что ни один из реагентов были заражены. Потому что JBG и вернулся JBG имеют одинаковые последовательности нуклеиновых кислот, то они будут, следовательно, имеют одинаковые полосы узоров. Если многие образцы для сравнения на геле в то же время, мы рекомендуем запускать все образцы, полученные от каждого праймера установить рядом друг с другом, тем самым облегчая поиск образцов для положительного результата. Рисунок 1. Сравнение парниковых выросли императы цилиндрической обл. Koenigii японская трава крови , Восстановлено I. Рисунок 2. Рисунок 4. Последовательность выравнивания trnL-F регионов императы цилиндрической обл. Вертикальные черные стрелки указывают на различия в последовательности, в результате ОНП и индели. Горизонтальная зеленые стрелки указывают на положение дикого типа грунтовки cogongrass для cogongrass-ПЦР. Рисунок 5. Питомник США и пейзаж промышленности процветать на выращивании и продаже экзотических и новых видов растений. Это, в сочетании с растущей глобализацией торговли, увеличивает вероятность того, что инвазивных видов растений войдет, создание и распространение в США, возможность регулирования федерального таких растений основывается на информации, которая зачастую отсутствует, в том числе могут стать инвазивными , правильный таксономии, и генетические отличия от родных и натурализованный таксонов. Потому что наши знания о инвазивных растений часто ограничены, импортные растения со скрытыми инвазивные характеристики были добровольно введены только узнать позже, что они вторгаются в нашу сельского хозяйства и природных ресурсов. Этот протокол направлен на решение таких проблем, связанных с I. Генетическое секвенирование ДНК, собранных из этих растений, занесенных в глубине сравнения 9 независимых областей ДНК широко используется для штрих-кода растений 2. Только ядерный ЕЕ и хлоропластов trnL-F регионах различия, которые могут быть использованы для генетически различия между cogongrass и JBG. Эти генетические различия позволили эстрадно-ПЦР праймеры, которые будут разработаны, что может отличить дикого типа cogongrass и JBG возвращается. Наиболее надежные результаты пришли из праймеров происходит от пластид trnL-F региона. Для создания грунтовки, более характерные для сорта идет речь, и, чтобы избежать ложных срабатываний от близкородственных видов, др. Хотя, мы рассмотрели различные конкретные первичной последовательности через 29 видов трав, специфику эстрадно-специфических праймеров не был всесторонне рассмотрен на его способность усиливать ДНК от большинства других видов трав. Таким образом, ткани, используемые для экстракции ДНК должны быть тщательно определены, как и я cylindrica до начала этого протокола. Если трава не могут быть определены либо как cogongrass или JBG, то мы предлагаем секвенирование ПЦР-продукта, чтобы убедиться, что последовательности точно соответствует cogongrass или JBG. В настоящее время наиболее точный метод для проверки подлинности данного трава образец для выполнения ПЦР и на т РНБ-F и ее регионов, а затем последовательность проверки продуктов ПЦР и сравнения последовательностей известных последовательностей точно определить таксонов. ДНК может быть усилен контроль использования праймеров, описанных в этом протоколе для trnL-F области или других праймеров, которые доступны в других публикациях Последовательность гораздо больше труда и дорогостоящие, чем при использовании нашей упрощенной процедуре. Качество праймеров для ПЦР имеет решающее значение для успеха процедуры. Преимущество заказа праймеров из Oblique Bio является то, что они хранят большое количество порции каждого праймера с одинаковым серийное производство образца праймеров мы использовали для оптимизации в нашей лаборатории. Следовательно, грунтовки не только в той же последовательности, но тэй приходят с того же серийного производства, которая была использована в данном протоколе. Использование праймера от той же партии, может помочь избежать посторонних переменных в процедуре, которая может быть следствием различий в качестве праймеров ПЦР. Кроме того, в то время как другие полимеразы Taq должно работать нормально для ПЦР, качество Taq полимеразы использовать окажет влияние на качество результатов ПЦР. Для обеспечения лучшей согласованности в ПЦР реагентов, мы оптимизировали протокол с использованием реагентов из Clontech. Преимущество 2 полимеразы Clontech, Mountain View, CA, Cat или представляет собой смесь из надежных, горячего старта Taq-полимеразы и корректура фермент, который помогает обеспечить высокую специфичность и более точные уточнениями. Поскольку этот протокол основывается на хлоропластов ДНК, которая наследуется по материнской линии в травах, гибридизация между событиями cogongrass и JBG генотипов не могут быть захвачены с нашими молекулярно процедуру идентификации. В случаях, когда это hypridization suspeИДКТК, мы рекомендуем использовать ядерное регионов, которые наследуются от обоих родителей. Наиболее часто используемые, не пластид переменная региона рассмотреть на заводе генотипирования является ядерной рибосомальной регионе ЕЕ , В настоящее время мы добиваемся прогресса в направлении усиления мультиплексирования хлоропласта trnL-F региона с ядерной области ИТС в то же ПЦР-пробирку. Мультиплексирование пластид с ядерной области ДНК потенциально обойти ограничения использования как в одиночку, однако, такие методы требуют оптимизации и дополнительной оценки с целью определения возможности в каждом конкретном случае. Использование количественного ПЦР в реальном времени КПЦР и новых технологий, таких как молекулярные маячки флуоресцентных зондов грунтовка , также оценивается как аварийные и точные методы генотипирования растений. Протокол, представленные здесь обеспечивает быстрый и надежный способ отличить JBG вернуться из этого дикого cogongrass. Мы рекомендуем использоватьRS этого протокола связаться с нами, чтобы сообщить результаты, полученные с использованием этого протокола. Такой обмен информацией поможет предоставить информацию о распределении JBG возвращается. Это также поможет регуляторов USDA принимать обоснованные решения о действиях, которые могут быть нужны, чтобы обойти распространения и потенциального гибридизации сортов высоко инвазивный cogongrass. Эта работа финансировалась Национальным рыбного и охотничьего фонда. Cseke, L. To learn more about our GDPR policies click here. If you want more info regarding data storage, please contact gdpr jove. You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions jove. Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login. You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free. To get started, a verification email has been sent to email institution. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your 'Spam' folder. Your access has now expired. Provide feedback to your librarian. If you have any questions, please do not hesitate to reach out to our customer success team. Login processing JoVE Journal Biology. Коллекция образцов и охраны Этот метод был разработан и протестирован с использованием свежих, замороженных, а в последнее высушивают ткани листа. Благодаря ярко-красные листья, декоративные JBG легко визуально отличить от дикого типа cogongrass и JBG вернуться, однако cogongrass и JBG вернуться почти неотличимы друг от друга. Cogongrass и JBG вернулся фенотип есть зеленый, листья больше, значительно больше и больше корневища, листья и больше площади, чем JBG 12 рис. Свежие ткани листа обеспечивает наиболее распространенных и высокое качество ДНК и может быть собрана из поля или парниковых выросли I. Если свежие ткани, которые будут использоваться, извлечение ДНК в течение 3 часов после сбора, чтобы предотвратить деградацию. В противном случае, подготовить ткань для хранения, keepiнг ткани прохладно и от прямых солнечных лучей. Не допускайте замороженной ткани таять до выделения ДНК. Передача замороженных тканей жидким азотом до шлифовальных шаги экстракции ДНК для предотвращения оттаивания. Для сухого хранения, поместите ткань в бумажный конверт и хранить конверт в обезвоженной силикагелем или другим активным осушителем при комнатной температуре. Небольшое количество индикаторов кремния, смешанного с не-указывает кремния будет гарантировать, что кремний является полностью обезвоженный и подходит для сушки растительной ткани. Используйте как минимум в 10 раз больше, чем силикагель свежей ткани листьев по весу. Завод ткань должна высохнуть в течение 24 часов. Качества и количества ДНК снижается за счет сухого хранения в течение долгого времени как в случае с гербарных образцов с. Недостаточное разрушение исходного материала или недостаточное лизис может также привести к снижению урожайности ДНК. Тщательно растереть Tiss ие и не перегружайте столбцы со слишком большим количеством ткани. Передача мг порошка из замороженных свежих или замороженных тканей или 20 мг порошка из сухой ткани в 1,5 мл микроцентрифужных пробирку, содержащую мкл буфера AP1 и 4 мкл РНКазы А. Каждая трубка может быть помещена в небольшую стойку на баланс для контроля правильного веса ткани в трубку. Добавить мкл буфера AP2 для каждого образца. Смешайте путем обращения трубки ы в несколько раз, и инкубировать в течение 5 минут на льду. Внесите каждый лизат в отдельном столбце мини спина QIAshredder, и поместить каждого столбца в 2 мл пробирку входит в комплект. Передача мкл смеси в DNeasy Мини колонки спина в 2 пробирки мл. Повторите этот шаг с остальной смеси для каждого образца. Поместите спина колонке а в новой 2 мл пробирку ы , и добавить мкл буфера AW в верхней части каждой колонки. Добавьте еще мкл буфера AW в верхней части каждой колонки. Этот шаг будет сухой колонны, таким образом удаляя остаточный этиловый спирт, содержащийся в буфер, который может подавлять ПЦР. Передача каждого спина колонку на новую трубу 1,5 мл образца микроцентрифужных. Добавить мкл буфера AE в верхней части каждой колонке для элюирования и инкубировать колонке а в течение 5 мин при комнатной температуре. Повторите эти шаги элюирования один раз, элюируя ДНК в те же 1,5 мл микроцентрифужных трубки для получения мкл образца. ДНК концентрации зависит от типа ткани и условий хранения. Оптимальные урожаи получены при элюирования ДНК в общей сложности мкл буфера AE, однако концентрация может быть увеличена, если элюирования объемы снижаются до всего лишь 50 мкл. Это поможет обеспечить успех последующих шагов. С помощью спектрофотометра, тест ДНК качество и количество. В качестве примера, на рисунке 2 показывает хорошие результаты качества, используя спектрофотометр NanoDrop ThermoScientific, Уилмингтон, Делавэр. Качество грунтовки может оказать существенное влияние на результаты ПЦР. Заказ грунтовки от уважаемой компании. Набор результатов в группе, что составляет базисных пунктов. Набор результатов в группе, то есть базисных пунктов. Развести каждого праймера акции до 12 мм до шага установки ПЦР. Подготовьте все реакции в тонкостенных труб ПЦР для улучшения теплообмена между блоком Термоциклер и образцом. Мы рекомендуем использовать коммерчески доступные аэрозоль без пипетки советов, которые помогут избежать заражения. Если несколько образцов готовятся, сделать коктейль, содержащий все реагенты, за исключениемДНК шаблон для установления единых условий между всеми реакциями. Этот учебник набор одинаково хорошо работает на cogongrass, JBG, JBG вернуться и других трав и приведет в группе, базисных пунктов. Установка отрицательного контроля с использованием тех же грунтовка контроль установлен в качестве положительного контроля, используя DDH 2 O, а не ДНК. Если все реагенты не содержат ДНК загрязняет, эта реакция может привести к не группа. Мы используем Mastercycle про S Термоциклер Eppendorf, Hauppauge, NY настроен для работы со стандартными условиями линейного изменения температуры. Любое качество Термоциклер должны выполнить хорошо. Мы рекомендуем использовать градиент способны Термоциклер при определении оптимальной температуры отжига. Если Термоциклер используется не нагретой крышкой, добавьте 1 каплю минерального масла в верхней части каждого образца для предотвращения испарения во время велосипедных ПЦР. В ультрафиолетовом свете например, короткие волны ультрафиолетового света окна , в результате осмотра полосы, чтобы увидеть, если соответствующий фрагмент усиливается. Документ гель и в результате диапазонах доступных фото-документации системы или камеры. Коммерческие маркер ДНК была использована для анализа размера. Все растения были сохранены в теплице находится в университете штата Алабама в Хантсвилле Huntsville, AL. Play Video. Cite this Article Cseke, L. Before you can use the favorites feature you must sign in or create an account. Continue with Shibboleth or Forgot Password? Please enter your email address so we may send you a link to reset your password. You might already have access to this content! Please enter your Institution or Company email below to check. Please enter an institutional email address. Check access. Create Account. Forgot Password? Reset Password. Phone number. Request trial. Thank You! A JoVE representative will be in touch with you shortly. Waiting for verification email? Please click here to activate your free 2-hour trial. If you do not wish to begin your trial now, you can log back into JoVE at any time to begin. Enable Javascript for audio controls. Get cutting-edge science videos from J o VE sent straight to your inbox every month. We use cookies to enhance your experience on our website. Continue Learn more Close. Discussion Питомник США и пейзаж промышленности процветать на выращивании и продаже экзотических и новых видов растений. Disclosures Нам нечего раскрывать. Materials Name.

Руза бесплатные пробы Трава, марихуана

Купить Экстази, скорость Чегем телеграм бот

Руза бесплатные пробы Трава, марихуана