Реферат: Обеспечение безопасности при работе с рекомбинантными молекулами ДНК

💣 👉🏻👉🏻👉🏻 ВСЯ ИНФОРМАЦИЯ ДОСТУПНА ЗДЕСЬ ЖМИТЕ 👈🏻👈🏻👈🏻

ОБЕСПЕЧЕНИЕ БЕЗОПАСНОСТИ ПРИ РАБОТЕ С РЕКОМБИНАНТНЫМИ МОЛЕКУЛАМИ ДНК
Студенты кафедры биохимии для исследовательской работы направляются в различные научно-исследовательские институты, а также могут заниматься в лабораториях кафедры. Моя работа проходит в лаборатории "Регуляция экспрессии генов" Института Цитологии РАН. Непосредственно моя научная деятельность не связана с животными и в основном мне приходится иметь дело с культурами клеток млекопитающих или бактериальных клеток. Большую же часть времени отводится на работу с еще более мелкими объектами - молекулами нуклеиновых кислот и белков. Исследования нашей группы связаны с изучением роли продукта гена ретинобластомы (pRb) в регуляции клеточного цикла. Большинство клеток на том или ином этапе своего развития претерпевают деление, т.е. проходят через фазы клеточного цикла. Впервые белок pRb был описан в связи с мутацией кодирующего его гена в трансформированных (т.е. ставших злокачественными) клетках сетчатки глаза. Именно с отсутствием данного белка связаны опухоли этой ткани (ретинобластомы), а также, как выяснилось впоследствии, и других тканей. Белок pRb экспрессируется у всех эукариотических организмов - от дрожжей до человека и у всех выполняет роль супрессора (негативного регулятора) клеточного цикла. Именно поэтому мы считаем, что изучение закономерностей в клеточном цикле, рассмотрение механизмов его регуляции и представляет собой очень важную и интересную область клеточной биологии.
В своей научной работе мы используем самые разные инструменты и методы исследования - от световой микроскопии до радиоактивных изотопов. Находят применение также различные электрические приборы и вычислительные машины - от калькулятора до компьютеров. Непосредственно моя работа связана, как правило, с получением рекомбинантных молекул ДНК и последующим использования их в разнообразных целях.
Необходимо отметить, что администрацией Института Цитологии предусмотрены правила безопасной работы с рекомбинантными молекулам ДНК. Эти правила включают меры безопасности и физические меры защиты.
Меры безопасности слагаются из приемов стандартной микробиологической практики, физической и биологической защиты. В соответствии с правилами к работе с рекомбинантными ДНК допускаются лица, прошедшие медицинский осмотр и получившие подготовку, которая предусматривает знание основ биологии организмов, с которыми предстоит работать, и приемов работы с ними. Подготовка должна быть подтверждена документально.
Физические меры защиты разделяются на несколько уровней.
Эксперименты, требующие физической защиты первого уровня, могут проводится в лаборатории, предназначенной для работы с микроорганизмами ряда Escherichia (штамм E. Coli K-12) с помощью известных и общепринятых микробиологических методов. Работа проводится на открытых поверхностях без специального защитного оборудования. В лаборатории должна поддерживаться строгая чистота. Прием и хранение пищи, курение в этом помещении запрещены. Следует использовать для работы только механические пипетки. В лаборатории Ф1 проводят все эксперименты по клонированию фрагментов ДНК прокариотического и эукариотического направления.
Эксперименты, в которых необходима физическая защита вторго уровня, могут проводится в помещениях, подобных лаборатории Ф1, однако доступ посторонних лиц в лабораторию ограничивается. Автоклав (паровой стерилизатор) устанавливается в том же здании, где расположена лаборатория. Рекомендуется использование боксов с ламинарным потоком воздуха и другие устройства физической защиты, сводящие к минимуму опасность утечки материалов. Использованные в опыте материалы, содержащие микроорганизмы, обеззараживаются. Во время работы на двери лаборатории вывешивается знак биологической опасности. Применяются все приемы, обязательные для Ф1. В лаборатории Ф2 проводятся эксперименты по манипуляции с генами животных и человека, могущих нести потенциальную биологическую опасность (в том числе с онкогенами на основе клеток E. Coli K-12 и векторов типа pBR322, pUC и др.).
Эксперименты, требующие физической защиты третьего уровня, проводятся в лаборатории, имеющей специальные инженерные конструкции и защитное оборудование, а также автономное оборудование: автоклав, СО2 инкубатор, центрифуги, термостаты. Лаборатория отделяется от других помещений дверями с блокировкой, обеспечивающими герметичность. Поверхности стен, полов, столов и потолков должны тщательно очищаться и деконтаминироваться. Внутри лаборатории создается отрицательное давление. Воздух из лаборатории поступает за ее пределы по самостоятельным воздуховодам после предварительной очистки на фильтрах. Работы, проводимые в лаборатории Ф3 включают эксперименты на клетках животных и человека, трансформированных онкогенами и ретровирусами, содержащими различные гены, в том числе онкогены. На дверях лаборатории, оборудовании и материалах устанавливается знак биологической опасности.
Вход в лабораторию Ф3 разрешается только тем лицам, чье присутствие предусмотрено программой исследований и утверждено комиссией института по рекомбинантным ДНК.
Работающие должны пользоваться средствами индивидуальной защиты в соответствии с нормами их бесплатной выдачи.
Непосредственно после работы рабочие поверхности боксов и другого оборудования обеззараживаются, стеклянная посуда стерилизуется непосредственно в лаборатории.
Высокий уровень Ф4 - в Институте Цитологии РАН не предусматривается.
УСЛОВИЯ ТРУДА ВО ВРЕМЯ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
Для выполнения научной работы я пользуюсь следующим оборудованием:
- настольная микроцентрифуга (максимальная скорость - 12000 об/мин)
- центрифуги К-23 и К-24 (максимальная скорость - 15000 об/мин)
- камеры для проведения гель-электрофореза
Регистрация результатов проводится с помощью траниллюминатора, обычных ламп накаливания и фотоаппарата. В связи с этим, определенная часть рабочего времени проходит в фотокомнатах.
Трансиллюминатор представляет собой прибор, состоящей из ламп, испускающих ультрафиолетовый свет и кварцевого стекла (такое стекло используется, поскольку оно пропускает ультрафиолетовые лучи). Так как излучение в ультрафиолетовом диапазоне является небезопасным для глаза, то наблюдение ведется только в специальных очках, приспособленных для этих целей. Ультрафиолетовый свет применяется с целью детекции фрагментов ДНК, разделенных в агарозном геле и связанных со специальным красителем - бромистым этидием, который поглощает свет в указанном диапазоне. Благодаря этому становится возможным наблюдение фрагментов ДНК и определение их размеров, а также получение их в препаративных количествах для последующего использования.
Камеры для электрофореза представляют собой емкости определенной конфигурации, в которые помещается гель, а затем заливается буфер, содержащий заряженные подвижные частицы - ионы. Благодаря такой конструкции обеспечивается подвижность фрагментов нуклеиновых кислот или белков в гелях и их разделение из смеси. Разделение проводится при силе тока до 50 мА и напряжении до 100 V.
Устройство для переноса (блоттинга) состоит из двух платиновых пластин, помещенных в изолирующую камеру. Параметры электрического тока при переносе не превосходят указанных для гель-электрофореза.
Используется термостаты двух типов - воздушный и водяной. Температура в воздушном термостате не превышает 37С, а в водяном - 85С.
Работы проводятся на лабораторном столе. Применяется искусственное освещение рабочей зоны бытовыми лампами накаливания мощностью 100 W. При обработке полученных в ходе исследований данных используется персональный компьютер.
Следует отметить, что поскольку различное оборудование, использующееся в работе, в силу своих естественных габаритов и функционального назначения располагается на различных этажах здания института. Поэтому весьма часто рабочая зона принимает довольно внушительные размеры (с 1-го по 3-ий этаж). Особенно большие неудобства это причиняет, когда в целях экономии электроэнергии, лифты обесточивают, начиная с 16 часов, что позволяет отнести работу в это время к категории IIб. В остальное время работа относится, по всей видимости, к категории легких.
В своей работе мы используем разнообразные приборы, которые питаются от электросети. Гель-электрофорез проводится при силе тока до 50 мА и напряжении до 100 V. Все контакты при этом надежно изолированы. Проводящие ток поверхности присутствуют только в аппарате для переноса (блоттинга), однако они заключены в изолирующую камеру, исключающую контакт с ней во время блоттинга.
ИОНИЗИРУЮЩИЕ И ЭЛЕКТРОМАГНИТНЫЕ ИЗЛУЧЕНИЯ
Источником таких излучений является монитор персонального компьютера. В принципе он излучает электромагнитные волны сверхнизкой частоты, мягкое рентгеновское излучение. Однако монитор, в настоящее время использующийся в нашей лаборатории обладает низкой интенсивностью излучения и соответствует международному стандарту (LR - "Low Radiation"). Кроме того, время непрерывной работы с компьютером не превышает, как правило, одного часа.
При работе с компьютером для повышения контраста изображения и устранения бликов экрана используется экранный фильтр. Кроме того, монитор поддерживает режим построчной развертки "NI" и стабилизации изображения для снижения утомляемости глаз во время работы.
По нормативам СНиП II-4-79 минимальная освещенность рабочей поверхности в данном случае должна быть 300-400 лк при комбинированном освещении. В помещении для общих работ освещение создается пятью верхними люстрами по 2 лампы дневного света каждая и настольными лампами на гибких держателях, позволяющих направлять свет в нужную точку стола. Данная система является вполне адекватной и рациональной.
Основными источниками шумов и вибраций являются центрифуги и шейкеры. Центрифуги К-23 и К-24 находятся в специальном помещении, изолированном и допускающем лишь кратковременное нахождение людей. Что касается микроцентрифуги, то она используется, в основном, в изолированном помещении с постоянной температурой от 4 до 8С ("холодная комната"). То же касается и шейкеров, с той оговоркой, что их приходится применять столь же часто и в изолированном помещении с температурой 37С.
Химические вещества представляют собой источник наибольшей опасности при работе в нашей лаборатории. Для своей деятельности я использую следующие ядовитые вещества: щелочи (NaOH и KOH) и кислоты (HCl и H3РO4), хлороформ, метанол, фенол, уже упоминавшийся бромистый этидий и другие.
Метанол - сильный, преимущественно нервный и сосудистый яд. В организм человека может поступать через дыхательные органы, желудочно-кишечный тракт и неповрежденную кожу.
Щелочи и кислоты при воздействии на организм человека вызывают:
- раздражение слизистых оболочек глаз и верхних дыхательных путей
- коагуляционный некроз тканевых белков
- поражение глаз (возможна полная потеря зрения)
- поражение печени, почек, желудочно-кишечного тракта, сердечно-сосудистой системы, легких
Степень поражения зависит от концентрации, температуры и времени воздействия. Фенол является высокотоксичным веществом и при попадании на кожу вызывает ожоги. Вдыхание паров фенола даже в очень небольших концентрациях сопровождается раздражением и при больших дозах - поражением слизистых оболочек глаз, носа , зева и т.д., а также дыхательных путей и легких.
Бромистый этидий обладает сильным мутагенным действием.
Следует отметить, что далеко не всегда полностью соблюдаются правила работы с каждым из этих веществ. Связано это не с пренебрежением правилами, а с фактической невозможностью их выполнения. Например, метанол должен отпускаться со склада в лабораторию в количестве, не превышающем суточной потребности. Это требование, к сожалению, не может быть удовлетворено в связи с затруднениями при получении веществ со склада (постоянной их нехваткой и т.д.), а также с самим режимом работы склада (получение веществ со склада требует предварительного оформления и долговременного ожидания).
Тем не менее, работа с указанными веществами проводится в вытяжном шкафу и в перчатках и с соблюдением всех мер предосторожности. Вещества, которые не требуют хранения при низкой температуре (щелочи, кислоты и др.), хранятся также в вытяжном шкафу.
Исследования я провожу в холодный и переходный периоды года, поэтому нормой в данном случае являются условия: температура воздуха на постоянном рабочем месте - 16-21С, скорость движения воздуха не более 0,2 м/с, температура воздуха вне рабочего места - 14-20 °С. В здании действует централизованное паровое отопление, однако из-за малой мощности фактически не выполняется ни одна температурная норма даже после тщательного оклеивания окон. Здание Института Цитологии в зимнее время отапливается, однако в связи со своеобразной конструкцией или по другим неизвестным причинам, температура в комнате зимой бывает равной 12-15С.
Предпринимаемые меры по нормализации обстановки с ядовитыми
химическими веществами и микроклимата:
Для увеличения безопасности работы с ядовитыми веществами, они хранятся в специально отведенном для этой цели шкафу в подсобном помещении, которое надежно закрывается и пребывание людей в котором ограничено.
Для более безопасной работы с бромистым этидием, он не добавляется в буфер для электрофоретического разделения, а включается в состав геля, что значительно уменьшает объем загрязненного вещества и облегчает его элиминацию.
Аналогично, для переноса (блоттинга) белков на мембрану из нитроцеллюлозы, в настоящее время используется метод "полусухого" переноса, для которого требуется очень небольшое количество буфера (по сравнению с традиционными методами), в состав которого входит метанол; кроме того перенос этим методом занимает значительно меньше времени. Это также способствует уменьшению контакта сотрудников с ядовитыми веществами и снижению вредных отходов при удалении использованного вещества.
Для повышения температуры на рабочем месте холодный период нами применятся электронагреватели рефлекторного типа. Это, конечно, повышает пожароопасность, но другого выхода в наших условиях не остается, и на это идут, обращая при этом повышенное внимание на пожарную безопасность. По достижении в комнате температуры, соответствующей комфортному климату, приборы выключаются. Последний уходящий в конце рабочего дня отключает групповые щитки розеток и оставляет запись в журнале дежурного по комнате.
Милохов В.В., Егоров Е.М., Аксенов А.А. Охрана труда: Учебное
пособие.- Л: Изд-во Ленинградского университета, 1983. 112 с.
Правила безопасной работы с рекомбинантными молекулами ДНК
Инструкция #1 по охране труда при получении, хранении и выдаче метанола
в подразделениях Института Цитологии РАН
Инструкция #3 по технике безопасности при работе с органическими веществами
Инструкция #12 по технике безопасности при проведении работ с
использованием кислот и щелочей в подразделениях Института Цитологии РАН

Название: Обеспечение безопасности при работе с рекомбинантными молекулами ДНК
Раздел: Рефераты по трудовому праву
Тип: реферат
Добавлен 00:06:06 18 марта 2007 Похожие работы
Просмотров: 733
Комментариев: 16
Оценило: 4 человек
Средний балл: 5
Оценка: неизвестно   Скачать

Срочная помощь учащимся в написании различных работ. Бесплатные корректировки! Круглосуточная поддержка! Узнай стоимость твоей работы на сайте 64362.ru
Если Вам нужна помощь с учебными работами, ну или будет нужна в будущем (курсовая, дипломная, отчет по практике, контрольная, РГР, решение задач, онлайн-помощь на экзамене или "любая другая" учебная работа...) - обращайтесь: https://clck.ru/P8YFs - (просто скопируйте этот адрес и вставьте в браузер) Сделаем все качественно и в самые короткие сроки + бесплатные доработки до самой сдачи/защиты! Предоставим все необходимые гарантии.
Привет студентам) если возникают трудности с любой работой (от реферата и контрольных до диплома), можете обратиться на FAST-REFERAT.RU , я там обычно заказываю, все качественно и в срок) в любом случае попробуйте, за спрос денег не берут)
Да, но только в случае крайней необходимости.

Реферат: Обеспечение безопасности при работе с рекомбинантными молекулами ДНК
Курсовая Работа На Тему Требования К Качеству Мяса И Сроки Хранения. Особенности Приготовления Жареной Рыбы
Реферат: A Separate Peace Contrasting Gene And Phineas
Сборник Контрольных Работ По Математике 8 Класс
Реферат На Тему Финансовая Деятельность Государства
Почему Возникают Конфликты Сочинение
Дипломная работа по теме Формування естетичних цінностей молодших школярів засобами мистецтва
Курсовая работа по теме Тепловой расчет котельного агрегата
Реферат: Объединение Италии
Курсовая работа по теме Модифицированные 'тощие' бетоны для устройства оснований дорожной одежды
Дипломная работа по теме Агрессивное поведение детей младшего школьного возраста с умственной отсталостью
Эссе Роль Петра 1 В Истории Росси
Курсовая работа: Делегирование руководителем полномочий
Курсовая работа: Проектування вагона-хопера для перевезення зерна
Курсовая работа: Цех железобетонных конструкций
Районные Суды Реферат
Диссертации Ргпу Герцена
Реферат по теме Международная торговля: Сравнительные преимущества
Дипломная работа по теме Экспрессивность в поэтических текстах М. Цветаевой
Курсовая работа по теме Введение в физику скачков
Я Хочу Стать Детским Врачом Сочинение
Реферат: Мотивация учения младших школьников
Топик: Эльза Триоле (Elsa Trioler)
Реферат: Кодовый замок