Реагент в Красном Холме

__________________________________

__________________________________

📍 Добро Пожаловать в Проверенный шоп.

📍 Отзывы и Гарантии! Работаем с 2021 года.

__________________________________

✅ ️Наши контакты (Telegram):✅ ️

>>>🔥🔥🔥(ЖМИ СЮДА)🔥🔥🔥<<<

✅ ️ ▲ ✅ ▲ ️✅ ▲ ️✅ ▲ ️✅ ▲ ✅ ️

__________________________________

⛔ ВНИМАНИЕ! ⛔

📍 ИСПОЛЬЗУЙТЕ ВПН (VPN), ЕСЛИ ССЫЛКА НЕ ОТКРЫВАЕТСЯ!

📍 В Телеграм переходить только по ссылке что выше! В поиске тг фейки!

__________________________________

Реагент в Красном Холме

Мы опишем, как измерить возле мембраны и глобальной динамики внутриклеточного кальция в культуре астроцитов использованием полного внутреннего отражения и epifluorescence микроскопии. Мозг содержит глиальные клетки. Астроциты, типа глиальных клеток, уже давно известно, обеспечивают пассивную вспомогательную роль для нейронов. Тем не менее, все больше данных о том, что астроциты также могут активно участвовать в функции мозга с помощью функциональной взаимодействия с нейронами. Одним из важных вопросов является динамика внутриклеточного кальция в переходных астроцитов. Это важно, поскольку кальций хорошо известна как важный вторичный мессенджер и потому, что было предложено, что астроциты высотах кальция может вызвать выпуск передатчиков из астроцитов. Тем не менее, не было никакой детальной или удовлетворения описание около кальция плазматической мембраны сигнализации в астроциты. Полное внутреннее отражение флуоресценции TIRF микроскопия является мощным инструментом для анализа физиологически соответствующих сигнальных событий в течение приблизительно нм плазматической мембраны живых клеток. Здесь мы используем TIRF микроскопии и описывают, как монитор вблизи плазматической мембраны и глобальной динамики внутриклеточного кальция почти одновременно. Дальнейшее уточнение и систематическое применение этого подхода есть потенциал, чтобы сообщить о точных деталях астроцитов сигнализации кальция. Детальное понимание астроцитов динамики кальция могут служить основой для понимания, если, как, когда и почему астроцитов и нейронов проходят кальций-зависимых функциональных взаимодействий. Экспериментальная процедура состоит из двух основных частей, описанных в шаге мудрым образом ниже. Короче говоря, смешанные гиппокампа астроцитов-нейрона культуры были подготовлены с использованием хорошо установленным протоколом 1,2,3. Мы оптимизировали процедуру для получения здорового культурного астроцитов. Все процедуры, перечисленные ниже, должны осуществляться в стерильных условиях, таких как капот ламинарного потока. Поток астроцитов-нейрон культур два раза в неделю с neurobasal среды, начиная через четыре дня после металлизации. Preincubate СМИ около 30 минут в инкубаторе в вентилируемом колбу, чтобы уравновесить температуру и CO 2. Контроль возбуждения и захвата изображений достигается с помощью TILLVision программного обеспечения. Усиление камеры настраивается для каждого астроцитов, чтобы обеспечить лучший сигнал-шум изображения. Фон и принципы микроскопии TIRF были недавно рассмотрели 4, 5. Глубина проникновения МДП может быть рассчитана по уравнениям ниже. В целях обеспечения лазерной выравнивается оптимально для TIRF мы находим его полезным для наблюдения нм флуоресцентного шарик Invitrogen, F Когда в TIRF, наблюдается резкое увеличение сигнал-шум и бисером дисплей броуновской диффузии. Активация этих рецепторов приводит к значительному увеличению внутриклеточного уровня кальция в астроциты. Например, нетрудно заметить внутриклеточного кальция высотах во время применения СПС 30 мкМ на астроциты Рисунок 1. Мультфильм и фотографии изображений создана. Показывает фотографию Микроскоп установлен на airtable, в то время B показывает фотографию лазерной установки, контроллеры и балки коробки. Показывает фотографию столике микроскопа с камеры установлены для работы с изображениями. На левом быстро устройство перфузии можно увидеть наряду с шаговым двигателем и тета трубки. На правом headstage из усилителя Axopatch A не наблюдается. Мультфильм схематизирует пути света в настройке и как TМДФ достигается. В данном случае это буфер записи окружающие астроциты и астроциты себя. В мультфильме ячейки это показано в виде зеленых 'возбужденным' мембранных рецепторов, тогда как в клетке или на верхней поверхности клетки не возбуждаются. Рисунок 2. Красная точка стрелки бусы, которые поселились на стекло покровное, тогда как синие стрелки указывают на бусы, которые диффундируют в воде. С этой точки зрения только приверженец бисером показаны красными стрелками видны. Бисер показано в по синим стрелкам, не в этом регионе и, таким образом, невидимые на изображениях TIRF. Ниже графики показывают 3D-рендеринга образов. Очевидно, что значительное увеличение отношения сигнал-шум происходит для бисера в затухающего поля при наблюдении с помощью микроскопии TIRF. Рисунок 3. EPI изображения поля зрения с пятью астроцитов. Отметим, что образы в А и В существенно различаются. Это потому что с TIRF освещения только плазматической мембраны регионах в тесном прикладывание к покровное стекло в образ будут включены. Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian. Хорошо установлено, что астроциты дисплей внутриклеточного кальция высот. Это происходит спонтанно, может быть вызвана активность нейронов или с применением агонистов для активации рецепторов на поверхности астроцитов Одним из важных и спорный вопрос, является ли астроцитов внутриклеточного кальция высоты может вызвать высвобождение сигнальных молекул, которые активируют рецепторы нейронов на 11, Это спорный, потому что было доказательств за и против этой точки зрения, как это подчеркивается в обзорах Хейдон 7, 13 и Маккарти 11 лабораторий. Исходя из наших последних изображений срез мозга и электрофизиологических данных, мы утверждали, что лучше и точное понимание динамики астроцитов кальция необходимо прежде, чем новые на базе гипотезы эксперименты могут быть разработаны для определения того, как нейроны, астроциты воздействия В этом видео статье мы представляем простой способ изображения вблизи плазматической мембраны и глобальные изменения внутриклеточного кальция почти одновременно в культуре астроцитов. Неизбежные технические требования микроскопии TIRF в том, что культивируемые клетки должны быть использованы, поскольку они придерживаются стекло покровное в затухающих глубины поля 3. Стоит отметить, что астроциты в культуре изменить свои профили экспрессии генов по сравнению с теми в естественных условиях 15, и поэтому этот нюанс следует учитывать при реализации этого метода. При этом рассмотрение в виду, однако простой метод мы доклад не позволяют изображения и количественно около плазматической мембраны и глобальные изменения внутриклеточного кальция почти одновременно. Дальнейшее применение подхода к астроциты обещает предоставление точных данных о внутриклеточные изменения кальция вблизи плазменной оболочки астроцитов. Наличие таких количественных данных будет полезна для полного понимания астроцитов биологии. Эта работа была поддержана Уэхара Мемориальный фонд Японии Е. Shigetomi, E. To learn more about our GDPR policies click here. If you want more info regarding data storage, please contact gdpr jove. You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions jove. Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login. You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free. To get started, a verification email has been sent to email institution. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your 'Spam' folder. Your access has now expired. Provide feedback to your librarian. If you have any questions, please do not hesitate to reach out to our customer success team. Login processing JoVE Journal Biology. Экспериментальных процедур Экспериментальная процедура состоит из двух основных частей, описанных в шаге мудрым образом ниже. Оставить при комнатной температуре в течение ночи. Замените PDL стерильной водой 3 обширные моет. Накануне покрытие астроциты, место отдельных покровных в стерильных также на 6-луночного планшета многоямного плоским дном пластины с крышками, стерильные с BD Bioscience. Положите мкл ламинин на каждом покровное и инкубировать в течение ночи, в инкубаторе, чтобы избежать испарения. Обезглавьте крысят в возрасте P1 обычно 2 щенка следующие рекомендации проверены и одобрены национальными правилами и ваши местные институциональные уходу и использованию животных комитета. Удалить кожу и череп и мозг место в чашке Петри заполнены холодной СМИ рассечение. Удалены мозговых оболочек, рассекать обоих полушарий и рассекать гиппокампе. Как только кусочки ткани осели, удалить папаин осторожно и добавляют 5 мл гиппокампа среду, чтобы удалить все следы фермента. Повторите этот шаг и ресуспендируют в гиппокампе среде 2 мл. После растирают, проходят клетки через ячейки сетчатого фильтра размер пор, 70 мкм, BD Bioscience. Граф клеток в 10 мкл суспензии. Аспирируйте ламинин от покровных, а до крышки можно сухих, пластина мкл суспензии клеток в покровное. Оставьте их приложить в течение 60 мин в инкубаторе, а затем добавить 2 мл гиппокампа среды на лунку. На следующий день, аспирации старые гиппокампа средой для удаления мертвых клеток и мусора и добавьте 2 мл подогретого свежего гиппокампа среды. Обслуживание Neurobasal СМИ: мл neurobasal Invitrogen, 10 мл сыворотки B27 бесплатное приложение Invitrogen, 5 мл пенициллина, стрептомицина Invitrogen, 1,25 мл L-глутамина Invitrogen, Поток астроцитов-нейрон культур два раза в неделю с neurobasal среды, начиная через четыре дня после металлизации. Загрузка красителя кальция индикатор в астроциты Место культуры в хорошо на 6-луночный планшет заполнен 2 мл гиппокампа буфера записи, содержащей 2,5 мкМ Fluo-4, А. Удалить Fluo-4 решения и мыть покровные 3 раза гиппокампа буфера записи и инкубировать при комнатной температуре в течение 30 мин. Место покровное на камеру, а чистая другой стороне покровного с объективом жидкости очистки. Положите одну каплю иммерсионного масла погружение нефти типа DF с Cargille на цель и поставить камеры с открытой камерой на 25 мм выстрел покровное от Warner Instruments на столик микроскопа Olympus IX Посмотрите на клетки, используя пропускание света, чтобы увидеть, как выглядят клетки, и получить их в фокусе. Затем освещения клеток с нм от монохроматора полихромные V от до Vision и определить, если сигнал флуоресценции от Fluo-4 является однородным и обнаруживается в астроциты. Play Video. Cite this Article Shigetomi, E. Before you can use the favorites feature you must sign in or create an account. Continue with Shibboleth or Forgot Password? Please enter your email address so we may send you a link to reset your password. You might already have access to this content! Please enter your Institution or Company email below to check. Please enter an institutional email address. Check access. Create Account. Forgot Password? Reset Password. Phone number. Request trial. Thank You! A JoVE representative will be in touch with you shortly. Waiting for verification email? Please click here to activate your free 2-hour trial. If you do not wish to begin your trial now, you can log back into JoVE at any time to begin. Enable Javascript for audio controls. Get cutting-edge science videos from J o VE sent straight to your inbox every month. We use cookies to enhance your experience on our website. Continue Learn more Close. FluoSpheres carboxylate-modified microspheres, 0.

Купить закладки спайс в Пятигорске