Рідкий міцелій із спор та уникнення причин зараження
Fera GeneticsПриготування спорової зависі.
Зазвичай, гриби до нас потрапляють до рук у вигляді відбитка спор на квадратику паперу, вміщеному в zip-lock пакет. Щоб підготувати спори для проростання, з відбитка потрібно зробити спорову суміш.
Для приготування спорової суміші нам знадобляться
1. Дистильована вода з аптеки в ємності з гумовою пробкою або в ампулах.
2. 5-кубовий шприц (або кілька шприців).
3. Відбиток спорів грибів.
Рекомендується вата, спирт чи інші дезінфекційні засоби.
На замітку...
Спорова суспензія у шприці активна близько місяця. Далі вона може не прорости. На відміну від цього, споровий відбиток активний протягом 1-2 років. Зрозуміло, що заготовляти спори краще з відбитка. Спорову суміш зберігають у шприці, поміщеному в холодильник, а відбиток у zip-lock пакеті в темряві, наприклад, у тумбочці.
Відбитка діаметром близько 3 см цілком вистачає, щоб заправити шість 5-кубових шприців споровою суспензією.
Заправляємо шприц спорами за хвилину.
Дії, описані нижче, робимо максимально швидко, щоб уникнути попадання бактерій усередину шприца. Слід протерти спиртом шприц та поверхню, на якій працюємо.
Ковпачок з голки не знімаємо, поки в цьому не буде потреби.
I. Витягуємо поршень зі шприца, зіскребаємо 1/6 відбитка спор в отвір. Поршень забиваємо назад. Для зішкрібання спор зручно використовувати стерильну швейну голку, кінчик ножа, або щось подібне, але не користуватися голкою від даного шприца.
ІІ. Знімаємо ковпачок з голки та повільно випускаємо зі шприца все повітря (спори залишаться всередині). Протираємо спиртом голку.
ІІІ. Набираємо в шприц 5-6мл дистильованої води крізь гумову пробку (якщо вода в ампулах надламуємо скло і набираємо воду з ампули).
Суспензія готова, але використовувати її поки що не можна. Спори мають пройти регідрацію, «ожити».
Кладемо шприц у темне місце на 6-12 годин. За цей час підготуємо банки, в яких розвиватиметься міцелій. Для цього на кришках банок встановимо фільтр для пропускання чистого повітря.
На замітку...
Постає питання, скільки шприців заготовляти і скільки грибів можна виростити з одного шприца. Дозування таке: одним кубічним мілілітром спорової суспензії інокулюється одна 600-грамова баночка із зерном пшениці. У результаті 5-кубового шприца вистачає на 5 банок. Згодом з одного куб. мілілітра суміші у нас виростуть гриби в однолітровій ємності, що відповідає обсягу стандартного харчового судочка.
Можливі причини зараження
Заражений інокулят
При зараженні шприца зі споровою сумішшю більшість чи всі банки, щеплені цим шприцом, зазвичай виявляють одні й самі зараження. Це поширена проблема для нових культиваторів.
Купуйте спорові суміші у авторитетного постачальника і використовуйте надійні методи виготовлення своїх власних. Завжди можете придбати чистий споровий матеріал у Fera Genetics!
Якщо при перенесенні спор із певної області спорового відбитка, буде заражено кілька банок із зерном або чашок Петрі, як правило, всі наступні інокуляції з цієї ділянки будуть заражені.
Обмежте перенесення спор до невеликої кількості, переносіть їх з іншої області, уникаючи зовнішніх сторін відбитка.
Рідкі культури легко заразити, оскільки всі забруднюючі речовини в інокуляті, що використовується для їх створення, будуть розповсюджені по всьому бульйону. Банки із зараженою рідкою культурою зазвичай здаються нормальними, але при тривалому інкубуванні бактеріальне зараження може надати йому каламутного вигляду або створити пухирчасті утворення.
Заражені культури на агарі також можуть не подавати будь-яких ознак зараження. Зараження може приховуватись у вигляді спор на самому міцелії або рости під міцелієм. Щоб уникнути цього міцелій ізолюють шляхом перенесення невеликого шматочка міцелію із зовнішнього краю колонії за допомогою інокуляційної петлі, при цьому варто уникати повністю колонізовані чашки Петрі. Але такі чашки можуть бути корисними при виявленні зараження запахом.
Помилки під час інокуляції
Помилки під час інокуляції можуть призвести до часткової або повністю зараженої банки із зерном або PF Tek, чашки Петрі, або банки з рідкою культурою. До таких факторів належать: дотик до голки, скальпеля чимось, що не є стерильним; дотик до стерильної внутрішньої частини банки рукавичками; зараження з повітря; переміщення нестерильних предметів стерильними областями або переміщення нестерильних предметів між фільтром і стерильними предметами при використанні ламінарного потоку.
Заражене зерно
Зараження у банці із зерном, найчастіше, не проявляється до того часу, поки це зерно не використовують для інокуляції більшої кількості зерна чи кейсингу. Що призводить до великої кількості заражених банок при G2G або зараження субстратних блоків. Інокуляцію G2G завжди необхідно проводити в SAB (Still Air Box), рукавичному боксі, або з використанням ламінарних потоків повітря. Банки мають бути перевірені на запахи перед інокуляцією. Першочергово важливо продезінфікувати банки та кришки.
Погана стерилізація
Недостатня температура/час стерилізації переважно призводять до бактеріального зараження.
Бактерії швидко поширюються субстратом, з'являючись через дні-тижні після стерилізації. Важливо синхронізувати час стерилізації після повного закипання води в скороварці/каструлі.
Великі ємності вимагають більш тривалого часу стерилізації, тобто дволітрова або літрова банка вимагає менш тривалої стерилізації ніж 4 літрові, навіть якщо використовується однакова кількість субстрату.
Банки із зерном містять багато порожнього простору між зернами, що уповільнює проникнення тепла. Стерилізація вимагає використання скороварки, або дуже тривалого часу стерилізації в каструлі.
Шар сухого вермикуліту
Сухий шар вермикуліту вгорі банки при використанні PF Tek служить фільтром, що захищає від заражень. Якщо шар зсувається при переміщенні банки, це створює можливість попадання зараженого вермикуліту на поверхню стерильного субстрату. З цієї причини гарною ідеєю буде заповнити всю банку, так щоб кришка тримала шар вермікуліту нерухомо. Великий вермикуліт у цьому плані менш ефективний, використовуйте дрібнішу фракцію. Якщо шар стане вологим, то він не запобігатиме потраплянню заражень.
Пошкоджений/вологий фільтр
При пошкодженні фільтра або якщо він намокне, на субстрат можуть проникнути практично всі види заражень.
Неправильна пастеризація
Температура пастеризації знаходиться у діапазоні 60-80 °C. Нижньої межі цього діапазону не завжди достатньо для запобігання зараженню. Навпаки, коли температура надто висока або підтримується надто довго, вона знищить корисні бактерії. Найбільш уразливі для цього гнойові та компостні субстрати. Найчастіше результатом надмірних температур пастеризації є неповна колонізація основного субстрату з наступною інфекцією Триходермою.
Зараження після пастеризації
Необхідно мінімізувати ризик зараження субстрату під час кейсингу. Руки, одяг та волосся є головними джерелами зараження пастеризованого субстрату. Остигаючий після пастеризації субстрат повинен бути накритий, для захисту від потрапляння зараження з повітря. Матеріал покривного шару не менш вразливий, погана підготовка може призвести до таких заражень як Cladobotryum або Вертицилл. При використанні непастеризованого ґрунту слід використовувати щойно відкритий із запечатаних мішків.
Недостатній газообмін під час обростання субстрату
Відсутність газообміну під час колонізації основних субстратів утворюють анаеробні умови, які позитивно впливають на розвиток анаеробних бактерій. Може з'явитися запах бродіння. У найгірших випадках грибний міцелій не захопить весь субстрат, що дозволить це зробити цвілі.
Недостатнє охолодження основного субстрату
Приводить до загибелі міцелію. Міцелій гине при температурі трохи вище сорока градусів, якщо температура трохи нижче, то це призведе до затримки зростання і зрештою субстрат захоплять конкурентні організми, тому рекомендуємо охолодити субстрат до кімнатної температури перед кейсингом.
Джерело: ShroomMery
Адаптація: Fera Genetics