Пробы Экстази, скорость Невель

__________________________________

__________________________________

📍 Добро Пожаловать в Проверенный шоп.

📍 Отзывы и Гарантии! Работаем с 2021 года.

__________________________________

✅ ️Наши контакты (Telegram):✅ ️

>>>🔥🔥🔥(ЖМИ СЮДА)🔥🔥🔥<<<

✅ ️ ▲ ✅ ▲ ️✅ ▲ ️✅ ▲ ️✅ ▲ ✅ ️

__________________________________

⛔ ВНИМАНИЕ! ⛔

📍 ИСПОЛЬЗУЙТЕ ВПН (VPN), ЕСЛИ ССЫЛКА НЕ ОТКРЫВАЕТСЯ!

📍 В Телеграм переходить только по ссылке что выше! В поиске тг фейки!

__________________________________

Пробы Экстази, скорость Невель

Это исследование описывает классическую гидратацию с использованием тонкого метода липидной пленки для нанолипосомного препарата с последующей характеристикой наночастиц. Метод может быть адаптирован к инкапсуляции гидрофобных молекул. Липосомы нанокапсулы были применены для многих целей в фармацевтической, косметической и пищевой промышленности. Атрибуты липосом включают их биосовместимость, биоразлагаемость, неиммуногенность, нетоксичность и способность заманивать как гидрофильные, так и гидрофобные соединения. Классическая гидратация тонких липидных пленок в органическом растворителе применяется в данном документе в качестве метода инкапсулирования тарина, растительного лектомного, в нанолипосомы. Нанолипосомного размера, стабильности, эффективности захвата и морфологической характеристики описаны в деталях. Липиды сначала растворяются в хлороформе, чтобы получить тонкую липидную пленку, которая впоследствии регидратируется в растворе сульфата аммония, содержащем белок, который будет захвачен и инкубирован на ночь. Затем, sonication и экструзии методы применяются для создания наноразмерных unilamellar пузырьков. Индекс размера и полиписперсии нановезиклов определяется динамическим рассеянием света, в то время как морфология нановсикулов оценивается с помощью сканирующей электронной микроскопии. Эффективность захвата определяется соотношением количества неинкапсулированного белка к первоначальному количеству первоначально загруженного белка. Однородные липосомы получаются со средним размером нм и значением индекса полидисперсности 0, В последние годы возросло число исследований, посвященных эффективным системам доставки лекарств. Однако такие ограничения, как быстрое расчистка, плохое биораспределение и растворимость при физиологическом рН и недостаточное клеточное поглощение, все еще должны быть преодолены. Использование наносистем стало недавний прогресс в терапии рака, применяется для увеличения внутриклеточной концентрации наркотиков внутри раковых клеток при минимизации токсичности в здоровых клетках. Кроме того, наночастицы, полученные из различных материалов например, полимеров, дендримеров, липосом, вирусов, углеродных нанотрубок и металлов, таких как оксид железа и золото , в настоящее время применяются для усиления противораковых эффектов и снижения системных токсичность 1. Липосомы нанокапсулы, в частности, были применены для многих целей в фармацевтической, косметической и пищевой промышленности. В последние годы различные нутрицевтические продукты, такие как витамины, ферменты и растительные экстракты были разработаны с использованием липосомного технологии 2. Липосомы являются сферические пузырьки, состоящие из одного или нескольких концентрических липидных двухслойных спонтанно формируется дисперсии фосфолипидов в водном носителе 3 , 4. Полярные головки фосфолипидов расположены на наружной и внутренней поверхностях мембран, в контакте с водной средой. В отличие от этого, цепи жирных кислот образуют гидрофобное ядро мембран и защищены от воды 5. Некоторые атрибуты липосомы, которые делают их привлекательными системдоставки наркотиков включают их биосовместимость, биоразлагаемость, неиммуногенность, нетоксичность, и способность заманить как гидрофильные и гидрофобные соединения 6. Липосомы могут быть подготовлены с помощью различных процессов, таких как возбуждение, звукование, экструзия, лиофилизация, замораживание и оттаивание. Классические методы включают обратное испарение фазы, инъекцию растворителя и диализ моющего средства. Наиболее прикладным методом является тонкая гидратация липидной пленки, также известный как метод Бангама, который используется для получения везикулярно-липидных форм 7, 8, 9, 10 , Ламелларитность количество фосфолипидных двуслой и размер частиц являются классическими параметрами, используемыми для характеристики липосом как 1 униламеллярных пузырьков ULVs , образованных уникальным флосфолипидным двуслойным и меняющимся по размеру следующим образом: i небольшой униламеллар vesicles SUVs, 0. Размер Vesicle является важным параметром при рассмотрении для терапевтического использования, например, в лечении рака, в котором размеры lt; нм идеально подходят, чтобы позволить нановезики пересечь эндотелиальный барьер и достичь опухолевых тканей 4. При этом, инкапсуляция процедура после классической гидратации тонкой липидной пленки техника 7 была описана с использованием тарина, лектин растений характеризуется как гидрофильный шаровой белок 13 , 14 , Наноразмерные пузырьки производятся путем включения звуковой и экструзионной ступеней в основной технике, в результате чего стабильные липосомальные нановезики с высокой эффективностью захвата Все образцы стандарты BSA и липосомы супернатант должны быть проанализированы в тройном. Также подготовьте пустую трубку. PdI близко к 0. Для определения стабильности, хранить липосомы при 4 градусах Цельсия и регулярно проверять распределение размера и средний размер. Образцы, содержащие нанолипосомы, полученные в шаге 1. Рисунок 1 описывает нанолипосому препарат 16, 20, Липидная пленка затем была регидратирована в раствор сульфата аммония, содержащий гидрофильный белок тарин , который был захвачен, и инкубация была выполнена в одночасье. Затем, sonication и экструзии методы были применены для создания небольших unilamellar пузырьков. Ультрацентррифегация шаг отделил липосомальный препарат от свободных липидов и неинкапсуляенных белков, в то время как супернатант был использован для определения эффективности захвата. Нанолипосомы, произведенные с использованием вышеупомянутой методологии, продемонстрировали распределение размеров в диапазоне от 51— нм и средний размер нм таблица 2. Препарат был однородным, так как индекс полидисперсности составлял 0, Морфологические нанолипосомы характеристики были оценены SEM. Рисунок 2 A,B отображает круглую форму липосомного пузырьков в диапазоне нм и анализируется на 20 кВ, в то время как рисунок 2 C,D отображает недостаточно подготовлены Образцы. Нанолипосомы были просто высушены воздухом без предыдущей фиксации или любого другого лечения, описанного в этом исследовании. В результате наблюдались более крупные и поврежденные пузырьки в диапазоне мкм и проанализированы при 5 кВ. Рисунок 1: Схематическое представление нанолипосома. Липидная пленка затем регидратировалась в соленом буфер, содержащий гидрофильный белок тарин , который будет захвачен, и инкубация была выполнена в одночасье 4. Затем, sonication и экструзии методы были применены для создания внедорожников 5, 6. Ультрацентррифифационный шаг отделил липосомальный препарат от свободных липидов и неинкапсуляемого белка, в то время как супернатант был использован для определения эффективности захвата 7. Эта цифра была изменена с Корреа и др. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры. Рисунок 2: Нанолипосомного фотомикроскопия SEM. A, B Изображения круглых липосомальных пузырьков в диапазоне нм и проанализированы при 20 кВ. C,D Изображения недостаточно подготовленных образцов. Таблица 1: Приготовление тариновых липосомальных нанокапсул. Индекс размера и полидисперсности оценивался по динамическому рассеянию света, в то время как эффективность инкапсуляции определялась в соответствии с Peterson Таблица 2: Размер, индекс полидисперсности и эффективность захвата нанолипосом. Протокол, описанный здесь, был протестирован Correa et al. Методология дала успешные результаты, что позволило выработать стабильные нанолипосомы соответствующего размера для терапевтического применения. Формула представляет контролируемое высвобождение на различных уровнях рН в физиологических условиях. Он также потенцирует тарин фармакологические свойства, такие как ингибирование глиобластомы человека U MG и рака молочной железы MDA-MB клеточные линии и стимуляции клеток костного мозга мышей. Липосомальный препарат не проявлял токсического воздействия в здоровых клетках мышей Классический метод, впервые описанный Bangham et al. Адаптация этого метода, как сообщается в настоящем исследовании, успешно применяется путем включения дополнительных шагов, таких как соникация и экструзия через 0,2 мкм поликарбонатной мембраны. Это позволяет вывести более однородную дисперсию относительно размера в диапазоне нанометров 16, 23, Поэтому для обеспечения успешных результатов следует строго соблюдать описанный здесь протокол инкапсуляции и липосомную формулировку. Это естественные компоненты мембраны животных, и последние могут придать текучесть нанолипосомой архитектуры, обеспечивая широкое применение для биологической доставки соединений у человека. Нанолипосомы pegylation имеет важное значение для обеспечения стабильности липосомы структуры. Отсутствие ПЭГ приводит к увеличению размера, высокому индексу полидисперсности и низкой эффективности захвата. Оптимальные результаты могут быть получены с DOPE в качестве основного компонента липосомы. Однако это дорогостоящий фосфолипид. Финансовые затраты на производство нанолипосом могут быть достигнуты путем замены DOPE другими аналогичными липидами, такими как DOPC 1,2-диолеил-сн-глицерофосфохолин. CHEMS является молекула холестерина, естественно, в клетках животных мембран, которые не должны быть исключены из формулировки, так как важно обеспечить липидной двухслойной текучести и податливости Другие аспекты протокола инкапсуляции также могут быть адаптированы. Хлороформ, используемый для растворения липосомных компонентов, может быть легко заменен метанолом без каких-либо последствий для среднего размера, однородности и эффективности захвата. Тем не менее, некоторые утечки белка может произойти при хранении под 4 КК Ночной инкубационный шаг с раствором сульфата аммония, содержащим тарин, не является обязательным; однако, для удобства это может быть выполнено без ущерба для нанолипосомальных биофизических характеристик, инкапсуляции или потери эффективности стабильности, как показано на Correa et al. Шаг экструзии выполняется при комнатной температуре, которая может уменьшить скорость потока между шприцев, если 0,1 мкм размер мембраны размера. Для преодоления этой проблемы следует рассмотреть вопрос об использовании мембраны размером 0,2 мкм или нагревательного держателя экструдера над температурой перехода липидов. Аналитик должен быть осторожным, чтобы не повредить липиды или белок, которые могут быть инактивированы и потерять биологическую активность. Кроме того, липосомный препарат можно диализать против HBS вместо ультрацентрифугации, используя отсеченную мембрану в соответствии с молекулярным весом белка. Выбор химического характера буфера, в котором нанолипосомы приостанавливаются после ультрацентрифугации, напрямую связан с его последующим применением. Поскольку перспективы этого исследования включают in vivo и in vitro анализы, подвеска в HEPES буферного соливого раствора была адекватной для обеспечения никаких цитотоксических эффектов и диапазона рН, близкого к физиологическим условиям. Липосомы должны быть мелко обработаны, подобно живым клеткам, чтобы получить более высокое качество SEM изображений. Процедуры фиксации и сушки важны для обеспечения визуализации более мелких неповрежденных пузырьков, поддерживающих значения выше 20 кВ в вакуумных условиях. Рисунок 2 A,B отображает наноразмерные пузырьки, совместимые с процедурой экструзии. Визуализация пузырьков в диапазоне от нм возможна при надлежащей подготовке образца после этой процедуры. Шаги включают фиксацию, сушку путем увеличения концентрации этанола, и химическое обезвоживание, чтобы избежать образования агрегатов и разрыв пузырьков, вызванных вакуумным и электронным лучом. С другой стороны, на рисунке 2 C,D показаны липосомы пузырьки, высушенные при комнатной температуре и не подвергшиеся описанному здесь лечению, что означает, что они были подготовлены неадекватно. В результате неадекватной процедуры образуются гигантские пузырьки даже после экструзии через мембрану размера поры 0,2 мкм. Разорванные пузырьки также наблюдаются в обеих панелях в результате повреждения вакуумного и электронного луча. Процедура инкапсуляции может преодолеть плохую растворимость липофильных соединений в дополнение к обеспечению биосовместимости, биоразлагаемости, неиммуногенности и нетоксичности характеристик, присущих липосоме нанокапсул Адаптация протокола должна приниматься во внимание в зависимости от маршрута и цели администрирования, таких, как разработка новых липосомформул для устного администрирования. To learn more about our GDPR policies click here. If you want more info regarding data storage, please contact gdpr jove. You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions jove. Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login. You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free. To get started, a verification email has been sent to email institution. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your 'Spam' folder. Your access has now expired. Provide feedback to your librarian. If you have any questions, please do not hesitate to reach out to our customer success team. Login processing JoVE Journal Bioengineering. Взвесьте липосомы, используя аналитический баланс, как показано в таблице 1. Растворите липидные компоненты в хлороформе с помощью объемной колбы объемом мл, которая помещается в роторный испаритель, чтобы избежать потери материала. Удалите хлороформ с помощью роторного испарителя при следующих условиях: Отрегулируйте рот объемной колбы до стандартного положения 25 ' для оптимальной эффективности, при контакте с водой из отопительной ванны. Стандартная позиция может варьироваться в зависимости от марки оборудования. Установите температуру конденсатора до минимума 3 градусов по Цельсию. Установите температуру обогрева ванны до 40 и 1 градусов по Цельсию. Отрегулируйте вакуум до мбар и точки кипения до 20 градусов по Цельсию. После 25 мин, удалить колбу и отбросить испаряется растворитель, оставаясь в конденсаторе, надлежащим образом. Испаряемый растворитель, оставшийся в конденсаторе, должен храниться в получателях утилизации хлорированных , которые должны обрабатываться специализированной компанией для соответствующего отбрасывания. Перемешать смесь в течение 40 минут и инкубировать на ночь при 4 градусах Цельсия. Ночная инкубация не является обязательной. После инкубации, sonicate подвески в течение 1 мин при температуре 25 градусов по Цельсию комнатная температура; RT уменьшить размер везикулы и избежать агрегации. Выполните циклэксион через 0,2 мкм поликарбонатной поры мембраны. Мембрана пор0,1 мкм также подходит. В этом случае предварительно разогревайте держатель мини-экструдера выше температуры перехода липидов для облегчения экструзии, сохраняя при этом физикохимические характеристики как липидов, так и белков. Подходит части мини экструдера, как описано в руководстве производителя. Поместите поликарбонатную мембрану между двумя предмокрыми опорами фильтра и поместите ее в держатель. Вставьте в устройство пустой шприц объемом 1 мл, заполните другой шприц до его общего объема липосомальной подвеской и вставьте его на противоположную сторону. Медленно нажимайте образец с одного шприца на другой. Соберите экструдированную подвеску в предварительно охлажденный трубку. Липосомальная суспензия должна стать ясной в процессе экструзии в результате уменьшения размера из-за образования внедорожников. Около 0,2 мл образца может быть потеряно во время этого шага. Отделить липосомы от ультрацентрифугации. Отделить внедорожники от остальных компонентов и сульфат аммония с помощью ультрацентрифуги с ротором скач-ковш см. Взвесьте образец в титановой трубке, которая подходит ротору и уравновешить трубки. Проверьте минимальный объем, необходимый в соответствии с ротором, используемым, чтобы избежать повреждения труб, и настроить липосомальный объем подвески с сульфатом аммония, если это необходимо. Включите вакуум перед использованием центрифуги, чтобы позволить ему хранить в холодильнике. Приготовь титановые трубки в ведра качели. Отпустите вакуум, откройте дверь центрифуги и поместите ротор внутрь. Закройте дверь центрифуги, нажмите Вакуум и подождите, пока вакуум не достигнет от до 20 микрон или от 26 Па до Злт;3 Па. Используйте веб-сайт центрифуги для преобразования устройства в соответствии с ротором используется. Напомним, проверьте условия, и нажмите Начало запуска. После 90 минут, отпустите вакуум, нажав кнопку вакуума и открыть дверь центрифуги, когда вакуум достигает микрон эквивалент Pa. Выключите центрифугу, снимите ротор изнутри и оставьте его на скамейке с ведрами, чтобы высохнуть. Поддерживайте ультрацентрифугные образцы на льду. Осторожно, отделите супернатант от гранул, превратив трубку вверх дном в одноразовую центрифугу 15 мл, чтобы отделить супернатант и гранулы. Он будет использоваться для определения эффективности инкапсуляции. Гранулы предстает в виде полупрозрачного желе. Na 2 HPO 4 может быть заменен NaHCO 3 или опущен, чтобы избежать вмешательства, если липосомомного концентрация должна быть определена. Раствор hBS 2x бульон ассоциированный должен быть разбавлен в дистиллированной воде для получения HBS 1x перед использованием. Подготовка реагента B путем разбавления Фолин-Ciocalteu фенол реагент в дистиллированной воде. Для определения окончательных объемов реагентов А и В сначала определите количество реакционных трубок, которые будут использоваться, учитывая три различные концентрации BSA, пустые и образцы в тройном. Реагент А должен быть хорошо гомогенизирован перед использованием и может храниться при 25 градусах Цельсия RT в течение 2 недель. Реагент B также стабилен при 25 градусах Цельсия RT , если он хранится в янтарной бутылке. Разбавить липосомы супернатант водой до конечного объема 1 мл, содержащего мкг белка. Целевой белок может быть восстановлен путем центрифугирования, избегая липидных помех. Тщательно отбросьте супернатант, повернув трубку вниз и уложив ее на абсорбирующую бумагу. Сохраните гранулы для последующего шага. Спектрофотометрии Приостановить гранулы, полученные от шага 2. Тщательно перемешайте, чтобы убедиться, что гранулы растворяются и перенесите образец в новую пробирку. Приготовьте разбавления стандартов альбумина BSA до окончательного объема 1 мл. Добавьте 1 мл реагента А в трубки со ступени 2. Добавьте 0,5 мл реагента B в трубки со ступени 2. Определите абсорбцию на уровне нм с помощью спектрофотометра. Рассчитайте концентрацию белка в супернатанте на основе стандартной кривой следующим образом. Определите сверхнатальную концентрацию белка C по соотношению между значением абсорбции и угловым коэффициентом k , затем умножайте на общий объем следующим образом: Определить эффективность инкапсуляции по следующей формуле: где заряженный белок - 10 мг, неэнкапсулированный белок - значение С, полученное в шаге 2. Включите оборудование DLS за 30 минут до использования для разогрева лазерной лампы. Перенесите липосомальный препарат, полученный в шаге 1. Установить параметры оборудования следующим образом: разослатель типа - вода RI No 1. Нажмите на начало и подождите, пока оборудование закончит чтение. Снимите квет и выключите оборудование. Закрепите стеклянные крышки диаметром 13 мм на дне чашки Петри с помощью двусторонней ленты. Разрежьте ленту на мелкие кусочки соответствующий размер, чтобы зафиксировать крышки , удалите защитную бумагу под ним и зафиксите ее на дне чашки Петри. С помощью пинцета, удалить защитную бумагу на верхней части ленты и зафиксировать крышки на нем. Пальто крышки с поли-L-лизин. Поместите влажные фильтрованные бумаги внутри чашки Петри для поддержания влаги и инкубировать в течение 1 ч на RT 25 градусов по Цельсию. После покрытия промойте крышки дистиллированной водой. Заполните крышки с каплей образца от шага 1. Поместите влажные фильтрованные бумаги внутри чашки Петри и запечатайте блюдо для поддержания уровня влаги. Инкубировать при 4 градусах по Цельсию на 48 ч. Промыть крышки 3x в течение 5 минут с тем же фосфатным буфером. Образцы должны быть разрешены для высыхания на ночь внутри сушилки или внутри дыма капот на RT. Смонтировать высушенные образцы на заглушку с углеродной проводящей клейкой лентой. Распылите поверхность крышки в вакууме с электрически проводящим слоем 20 нм толщиной золотистого палладия. Запись изображений с помощью сканирующего электронного микроскопа SEM в режиме низкого вакуума и низкого напряжения 20 кВ. Play Video. Before you can use the favorites feature you must sign in or create an account. Continue with Shibboleth or Forgot Password? Please enter your email address so we may send you a link to reset your password. You might already have access to this content! Please enter your Institution or Company email below to check. Please enter an institutional email address. Check access. Create Account. Forgot Password? Reset Password. Phone number. Request trial. Thank You! A JoVE representative will be in touch with you shortly. Waiting for verification email? Please click here to activate your free 2-hour trial. If you do not wish to begin your trial now, you can log back into JoVE at any time to begin. Enable Javascript for audio controls. Get cutting-edge science videos from J o VE sent straight to your inbox every month. We use cookies to enhance your experience on our website. Continue Learn more Close.

Пробы Экстази, скорость Невель