Пробы Экстази, Лсд 25 Юрьевец

≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈

Гарантии! Качество! Отзывы!

Проверенный магазин!

≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈

▼▼ ▼▼ ▼▼ ▼▼ ▼▼ ▼▼ ▼▼ ▼▼ ▼▼

Наши контакты (Telegram):☎✍

>>>✅(НАПИСАТЬ ОПЕРАТОРУ В ТЕЛЕГРАМ)✅<<<

▲▲ ▲▲ ▲▲ ▲▲ ▲▲ ▲▲ ▲▲ ▲▲ ▲▲

≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡

⛔ ВНИМАНИЕ!

📍 ✅✅✅ Используйте ВПН, если ссылка не открваеться !!!

📍 В Телеграм переходить только по ССЫЛКЕ что ВЫШЕ! В поиске НАС НЕТ там только фейки!

📍 Гарантии и Отзывы!

📍 Работаем честно!

Пробы Экстази, Лсд 25 Юрьевец

≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡

Вы точно человек? Пользовательское соглашение Политика конфиденциальности.

Пробы Экстази, Лсд 25 Юрьевец

Закладки Героин, Метадон купить Междуреченск

Пробы Экстази, Лсд 25 Юрьевец

Вы точно человек?

Отзывы Героин, гашиш Кувандык

Жетысай купить наркотик Каннабис, Марихуана в телеграм

ТЕСТ-СИСТЕМЫ ПЦР ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ГЕНОМА КАПРИПОКСВИРУСОВ И ВИРУСА ЗАРАЗНОГО УЗЕЛКОВОГО ДЕРМАТИТА

Пробы Экстази, Лсд 25 Юрьевец

Гашиш, Бошки, Шишки Вила-Нова-ди-Гая

Вы точно человек?

Интенсификация животноводства неизбежно повышает риски заноса и распространения инфекционных заболеваний, из которых наиболее опасны трансграничные. Инфекции крупного рогатого скота, вызываемые каприпоксвирусами, в частности вирусом заразного узелкового дерматита ЗУД, Lumpy skin disease, LSD , поражают крупный и мелкий рогатый скоту, нанося существенный экономический ущерб. До года территория Российской Федерации была благополучна по ЗУД, однако из-за локальных конфликтов на Ближнем Востоке и изменений климата заболевание распространяется в северном направлении масштабные вспышки LSD в Турции, странах Балканского полуострова, ЕС и в России. Широкое использование живых гомологичных вакцин против LSD в соседних странах также актуализирует разработку методов диагностики этого возбудителя, позволяющих выявлять геномы полевых изолятов и дифференцировать вакцинный вирус ЗУД КРС. Нами впервые в России разработан и валидирован комплекс методов ПЦР в режиме реального времени для однорежимного тестирования проб на наличие генома каприпоксвирусов, полевых изолятов вируса заразного узелкового дерматита и вакцинного вируса ЗУД КРС типа Neethling. На основе выравнивания полногеномных последовательностей идентифицированы сайты, наиболее пригодные для специфичной амплификации при выявлении генома полевых изолятов, вакцинных штаммов и каприпоксвирусов. Для амплификации фрагмента генома вакцинных штаммов использовали участок ORF, в котором присутствуют уникальные замены, характерные только для таких штаммов, для каприпоксвирусов — участок гена P32 , консервативный для всех представителей рода Capripoxv irus. Апробацию тест-систем проводили на панели из проб биологического материала, собранного при вспышках каприпоксвирусных инфекций в России, — стабилизированной крови, сыворотки крови, соскобов кожи нодулы , назальных и окулярных смывов, молока, тканей лимфатических узлов, легких, трахеи, селезенки и абортплодов, отобранных от животных, инфицированных в естественных условиях. Следует отметить, что с помощью разработанного комплекса тест-систем ПЦР-РВ в рамках мониторингового исследования на заразный узелковый дерматит в ряде регионов Российской Федерации отмечены случаи выявления генома вакцинного вируса ЗУД КРС. Это может свидетельствовать либо о нелегальном использовании запрещенной к ввозу в Россию аттенуированной живой вакцины типа Neethling, либо о естественном распространении вакцинного Neethling. На основе разработанных методов оформлено два патента РФ на изобретения, что подтверждает оригинальность и значимость предложенных методик для диагностических исследований. Ключевые слова: заразный узелковый дерматит, нодулярный дерматит, вакцинный штамм, каприпоксвирус, ПЦР, Neethling. Заразный узелковый дерматит нодулярный дерматит крупного рогатого скота Lumpy skin disease, LSD — трансграничная инфекционная болезнь крупного рогатого скота КРС , которая проявляется повышением температуры тела, образованием кожных узлов бугорков , при генерализации инфекционного процесса — лимфаденитом, поражением конъюнктивы, слизистых оболочек органов дыхания и пищеварения Возбудитель LSD — ДНК-содержащий оболочечный вирус из семейства Poxviridae родa Capr ipoxvirus , к которому отнесены родственные этому вирусу возбудители оспы овец и оспы коз 5. Геном вируса представлен двуцепочечной ДНК длиной тыс. Согласно данным литературы, самым распространенным путем передачи инфекции считается заражение через укусы кровососущих насекомых 11 , 12 и клещей 13 , 14 , однако однозначно вектор пока не установлен. В России болезнь впервые зарегистрирована в году 20 , а в год в 16 субъектах на территории страны отмечено вспышек инфекции, главным образом в Центральном федеральном округе В годах вспышки начали регистрировать в Приволжском федеральном округе вблизи от государственной границы Российской Федерации Живые гомологичные вакцины против LSD на основе аттенуированного вакцинного штамма Neethling активно используются в приграничных странах как на территории Казахстана, так и в ЕС. Поэтому необходим комплекс методов для выявления и дифференциации возбудителей каприпоксвирусных инфекции, в том числе идентификации вакцинного штамма Neethling, который также способен вызывать клинические проявления болезни у животных 23 , В году вспышку этого заболевания отмечали уже в Северо-Кавказском регионе России, а в годах — на территории Центрального федерального округа С учетом беспрецедентного распространения вируса LSD, в том числе субклинического переболевания 25 , 26 , требуются высокочувствительные методы диагностики, позволяющие проводить мониторинг среди латентно инфицированных восприимчивых животных для быстрого выявления генома возбудителя, борьбы с инфекций и предотвращения ее распространения. Целью исследования была разработка комплекса методов ПЦР в режиме реального времени, позволяющих выявлять геномы и дифференцировать всех представителей рода Capripoxvirus , полевые изоляты вируса LSD и вакцинный штамм типа Neethling в различных биоматериалах. Результаты интерпретировали по тому, пересекается или не пересекается кривая флуоресценции с пороговой линией, что соответствует наличию или отсутствию значения порогового цикла Ct. Для оценки специфичности тест-системы ПЦР-РВ протестировали с генетическим материалом гомологичных и гетерологичных вирусов. Эксперименты по определению специфичности были поставлены индивидуально с ДНК каждого вируса и в присутствии ДНК нескольких вирусов. Для статистической верификации полученных результатов и построения линейной регрессии провели три повторных эксперимента с кратными разведениями геномной ДНК. Для оценки вариабельности значений порогового цикла один образец тестировали 3 раза в 5-кратной повторности 1 запуск — 5 повторений на протяжении 3 сут. Диагностическую чувствительность ДЧ и диагностическую специфичность ДС тест-систем проверяли на пробах крови и назальных смывах, которые получали от естественно зараженных животных. Исследовали проб биологического материала от животных с клиническими признаками заболевания: стабилизированную кровь, сыворотку крови, соскобы кожи нодулы , назальные и окулярные смывы, молоко, ткани лимфатических узлов, легкого, трахеи, селезенки, а также абортированные плоды. Примененные нами праймеры и зонды кратко охарактеризованы в таблице 1. На основе выравнивания последовательностей мы идентифицировали сайты, наиболее консервативные только у полевых изолятов, только у вакцинных штаммов и у всех каприпоксвирусов. Для амплификации участка генома полевых изолятов выбрали рамку считывания LSDV для гена EEV вируса нодулярного дерматита, в котором у других представителей семейства Capripoxviridae и вакцинных вирусов типа Neethling делетирован участок 27 п. Для амплификации фрагмента генома вакцинных штаммов выбрали участок LSDV, в которой присутствуют уникальные замены, характерные только для таких штаммов см. Для амплификации генома каприпоксвирусов был выбран ген P32 , консервативный для всех представителей семейства Capripoxviridae см. Для проверки специфичности метода использовали материал, содержащий ДНК гетерологичных вирусов вирус чумы мелких жвачных, вирус везикулярного стоматита, вирус эктимы овец, вирус оспы коров. В результате при тестирования диагностической системы с ДНК каждого вируса по отдельности, а также со смесью ДНК нескольких вирусов ложноположительных результатов мы не выявили. Для оценки эффективности амплификации провели три повторных эксперимента и получили значения Сt, которые использовали для расчета эффективности. На основе коэффициента угла наклона, полученного при построения графика линейной регрессии см. При оценке воспроизводимости результатов для шести последовательных кратных разведений стандартное отклонение SD варьировало от 0,12 до 0, Эффективность амплификации см. Основные количественные характеристики разработанных тест-систем суммирует таблица 3. Лабораторная диагностика LSD важна для подтверждения предположительного диагноза и, соответственно, своевременности действий по предотвращению распространения вируса. При этом следует отметить, что биологические и эпизоотологические свойства LSDV изучены недостаточно и требуют более глубокого понимания. Вирусы заразного узелкового дерматита и оспы овец представляют серьезную угрозу животноводству всех стран, включая Российскую Федерацию Что касается оспы овец, то это заболевание регистрировалось, главным образом, на Дальнем Востоке и Северном Кавказе. Единственным способом борьбы с каприпоксвирусами считается вакцинация, а в случае с LSD — вакцинация гетерологичными и гомологичными аттенуированной вакцинами Гетерологичная вакцина на основе вируса оспы овец безопасна для КРС, тогда как живые аттенуированные вакцины, например Lumpyvax ЮАР и аналогичные ей, при введении животным могут вызывать проявление клинических признаков заболевания Поэтому актуальны методы дифференциальной молекулярной диагностики. В этом сообщении впервые представлен разработанный комплекс тест-систем ПЦР-РВ, позволяющих одновременно выявлять геномы каприпоксвирусов, полевых изолятов вируса LSD и вакцинного штамма Neethling. Преимущество такого подхода заключается в том, что все тесты проводятся с одинаковыми концентрациями компонентов реакции и при одинаковом температурном профиле. Эти тест-системы успешно валидированы с использованием большого числа проб, отобранных как при вспышках заболевания, так и от экспериментально зараженных животных. Полученные при этом результаты подтверждены секвенированием и выделением вируса в культуре клеток данные не представлены. Все локусы для амплификации и сайты отжига зондов выбирались по критериям консервативности по всем изолятам, данные по которым доступны в GenBank и уникальности для обеспечения высокой специфичности см. Для каждой из разработанных тест-систем ПЦР-РВ детекция указанных вирусов стала возможной благодаря уникальности генетических сигнатур. Более того, высокая диагностическая чувствительность и специфичность при тестировании с панелью ДНК гомологичных и гетерологичных вирусов делает этот комплекс незаменимым в постановке диагноза при работе с пробами полевого материала. В литературе есть несколько публикаций о методах для выявления геномов каприпоксвирусов, полевого или вакцинного штамма LSDV. Ранее широко использовался классический метод D. Ireland и Y. Binepal 29 на основе классической ПЦР, однако он не специфичен в отношении конкретного вируса и выявляет все каприпоксвирусы К тому же классическая ПЦР несет риски кросс-контаминации и имеет более низкую чувствительность. Для вариантов ПЦР-РВ в литературе представлены работы по выявлению генома каприпоксвирусов 30 , полевых изолятов 31 , вакцинного и полевого штамма в формате дуплекс Duplex PCR, одновременное выявление двух генов-мишеней При оценке специфичности мы использовали изоляты, циркулирующие на территории России, тогда как зарубежные коллеги оценивали специфичность на штаммах, выявленных за пределами нашей страны. Для того чтобы признать какие-либо методы универсальными, необходимо провести кросс-валидацию с включением всех штаммов, детектированных к настоящему времени в мире. Одновременно преимущество и недостаток метода E. Agianniotaki с соавт. В нашем исследовании тест-системы работают независимо в разных пробирках в отличие от дуплекса, где из-за одновременного присутствия обоих вирусов чувствительность реакции снижается. Такая особенность дуплексной ПЦР особенно критична в начале кампании по вакцинации живыми вакцинами в зонах с активной циркуляции полевых штаммов вируса. Разработанный комплекс ПЦР тест-систем апробирован на пробах биоматериала образцы различных тканей и органы от КРС с LSD, зараженного в естественных условиях на территории Российской Федерации в годах 21 см. Необходимо отметить, что при отборе проб в случае подозрения на LSD должны учитываться и клинически здоровые животные, поскольку они могут быть скрытыми носителями вируса без видимых симптомов Это имеет особое практическое значение, так как надзор над эпизоотической ситуацией по LSD КРС проводится главным образом прижизненно. Генетический материал вируса также выявлялся в тканях легких, лимфоузлов и в молоке, однако из-за ограниченного числа проб статистически оценить эти результаты однозначно пока нельзя. Важно отметить, что пробы от животных поступали в период начала развития клинических признаков, что могло сказаться на результативности выявления вируса LSD. Например, отсутствие генома вируса в большинстве проб смывов, в сыворотке крови и в цельной крови, вероятно, объясняется тем, что вирус еще не успел накопиться в достаточной количестве, чтобы при экскреции в биологические жидкости его концентрация превышала предел чувствительности тест-системы. Более того, S. Babiuk с соавт. Эти свойства, возможно, объясняют слабую трансмиссию вируса между животными при отсутствия лёта переносчиков. Важно отметить, что система ПЦР-NEE для тестирования вакцинного штамма, валидированная на таком же объеме материала, позволила выявить несколько случаев возможного нелегального использования вакцины против LSDV на основе штамма Neethling в ряде регионов России данные не представлены , хотя впервые геном вакцинного штамма Neethling был обнаружен в Республике Башкортостан у коров с клиническими признаками ЗУД КРС Все результаты, полученные с помощью предложенных нами тест-систем, подтверждены выделением вируса в чувствительной культуре клеток данные не представлены , что свидетельствует о надежности используемых методов ПЦР-РВ при дифференциации вакцинного штамма и полевого изолята. Высокая степень апробированности и валидации предложенных тест-систем подтверждена оформлением патентной заявки РФ, что также свидетельствует о новизне разработки 35 , Таким образом, нами разработаны надежные тест-системы ПЦР-РВ для однорежимного тестирования проб на наличие генома каприпоксвирусов, полевых изолятов вируса заразного узелкового дерматита и вакцинного штамма LSDV. Методы показали высокую специфичность и чувствительность при тестировании с панелью проб биоматериала от естественно зараженных животных. Описание тест-систем см. Зона отжига зонда для выявления полевых изолятов вируса заразного узелкового дерматита крупного рогатого скота А , вакцинных штаммов этого вируса Б и каприпоксвирусов В в ПЦР-РВ см. Графики линейной регрессии значений Ct при тестировании кратных разведений ДНК каприпоксвирусов А и вакцинного штамма вируса заразного узелкового дерматита Б в ПЦР-РВ, подтверждающие линейность полученных результатов. The cattle and sheep industry is economically important for sustainable growth. However, the increasing demand for livestock products drives animal population growth and risks for infection diseases. Lumpy skin disease LSD has recently expanded its historical range northward reaching countries that were never affected before. Prior to the territory of the Russian Federation was free of lumpy skin disease, whereas by Turkey, Serbia, Greece, Azerbaijan have reported incursions of this virus. Not only lumpy skin disease but also sheep pox has increased in incidence. Given this scenario, timely detection of these pathogens is key towards successful control and eradication. Moreover, diagnostic tools should detect both LSDV genome in the face of the use of live vaccine LSD virus strains and distinguish between the two. In this paper we report the development of a set of one-run real-time PCR assays to detect and differentiate between Capripoxvirus genome, field and vaccine LSD virus genomes. The assay for field LSD virus targets the 27 bp deletion in ORF, the assay for vaccine LSD virus targets genetic signatures unique to Neethling vaccine strains, and the capripoxvirus assay targets the conserved P32 gene. The assays proved highly sensitive and specific. The set of PCRs was validated against a panel of samples collected in the field, including whole blood, serum, skin lesions, nasal and ocular discharge, milk, lymph nodes, lungs, trachea, spleen and aborted calves. Using the assays reported here some samples obtained as part of national surveillance for LSD virus from animals exhibiting clinical signs consistent with LSDV turned out to be positive for vaccine LSD virus genome in This vaccine strain is highly likely to have derived from commercial live-attenuated vaccines against LSD virus. The way of introduction of a vaccine LSD virus strain into Russian cattle remains to be investigated. Keywords: lumpy skin disease, vaccine, diagnostics, real-time PCR, genome, virus. Колебания величины Ct при измерении показателей иллюстрирует таблица 4. В каждом запуске по 5 повторений. Lumpy skin disease. Coetzer, R. Tustin eds. Oxford University Press, Cape Town, Hunter P. Lumpy skin disease in southern Africa: a review of the disease and aspects of control. Journal of the South African Veterinary Association, , doi: Woods J. Lumpy skin disease: a review. Tropical Animal Health and Production, , 20 1 : Sameea Yousefi P. Epidemiological study of lumpy skin disease outbreaks in North-western Iran. Transboundary and Emerging Diseases , , 64 6 : doi: Buller R. Family Poxviridae. In: Virus taxonomy: classification and nomenclature of viruses. Fauquet, M. Mayo, J. Maniloff, U. Desselberger, L. Ball eds. Elsevier Academic Press, San Diego, Tulman E. Genome of lumpy skin disease virus. Journal of Virology , , 75 15 : doi: Elhaig M. Lumpy skin disease in cattle: frequency of occurrence in a dairy farm and a preliminary assessment of its possible impact on Egyptian buffaloes. Onderstepoort Journal of Veterinary Research ,, 84 1 : e1-e6 doi: Gomo C. Tropical Animal Health and Production , , 49 3 : doi: Swiswa S. Long-term changes in the spatial distribution of lumpy skin disease hotspots in Zimbabwe. Tropical Animal Health and Production , , 49 1 : doi: Zeynalova S. Epizootology and molecular diagnosis of lumpy skin disease among livestock in Azerbaijan. Frontiers in Microbiology , , 7: doi: Carn V. An investigation of possible routes of transmission of lumpy skin disease virus Neethling. Chihota C. Mechanical transmission of lumpy skin disease virus by Aedes aegypti Diptera : Culicidae. Lubinga J. Transovarial passage and transmission of LSDV by Amblyomma hebraeum , Rhipicephalus appendiculatus and Rhipicephalus decoloratus ticks. Experimental and Applied Acarology , , 62 1 : doi: Tuppurainen E. Lumpy skin disease: attempted propagation in tick cell lines and presence of viral DNA in field ticks collected from naturally-infected cattle. Ticks and Tick-borne Diseases , , 6 2 : doi: Tasioudi K. Emergence of lumpy skin disease in Greece, Transboundary and Emerging Diseases , , 63 3 : doi: Epidemiology and Infection , , 1 : Alkhamis M. Spatial and temporal epidemiology of lumpy skin disease in the Middle East, Frontiers in Veterinary Science , , 3: 19 doi: Mercier A. Spread rate of lumpy skin disease in the Balkans, Transboundary and Emerging Diseases , , doi: Abutarbush S. Lumpy skin disease in Jordan: disease emergence, clinical signs, complications and preliminary-associated economic losses. Transboundary and Emerging Diseases , , 62 5 : doi: Бирюченкова М. М, Зиняков Н. Результаты генодиагностики нодулярного дерматита в Дагестане и Чеченской Республике — первое официальное подтверждение болезни на территории Российской Федерации. Ветеринария сегодня , , 4 15 : Sprygin A. Epidemiological characterization of lumpy skin disease outbreaks in Russia in Transboundary and Emerging Diseases , , 65 6 : doi: Follow-up report No. Без даты. Detection of lumpy skin disease virus in skin lesions, blood, nasal swabs and milk following preventive vaccination. Transboundary and Emerging Diseases , , 65 2 : doi: Kononov A. Determination of lumpy skin disease virus in bovine meat and offal products following experimental infection. Transboundary and Emerging Diseases, , doi: Capripoxvirus diseases: current status and opportunities for control. Transboundary and Emerging Diseases , , 64 3 : doi: Пестова Я. Е, Артюхова Е. Е, Шумилова И. Разработка ПЦР в режиме реального времени для выявления возбудителя заразного узелкового дерматита в пробах от крупного рогатого скота. Сельскохозяйственная биология , , 53 2 : doi: Lin L. A concordance correlation coefficient to evaluate reproducibility. Biometrics , , 45 1 : doi: Ireland D. Improved detection of capripoxvirus in biopsy samples by PCR. Journal of Virological Methods , , 74 1 : doi: Stubbs S. Validation of a high-throughput real-time polymerase chain reaction assay for the detection of capripoxviral DNA. Journal of Virological Methods ,, 2 : doi: Vidanovic D. Real-time PCR assays for the species detection of field Balkan strains of lumpy skin disease virus. Acta Veterinaria Belgrade ,, 66 4 : doi: Agianniotaki E. Development and validation of a TaqMan probe-based real-time PCR method for the differentiation of wild type lumpy skin disease virus from vaccine virus strains. Journal of Virological Methods , , doi: Babiuk S. Quantification of lumpy skin disease virus following experimental infection in cattle. Transboundary and Emerging Diseases , , 55 7 : doi: Detection of vaccine-like lumpy skin disease virus in cattle and Musca domestica L. Transboundary and Emerging Diseases , , 65 5 : doi: Спрыгин А. В, Кононов А. Олигонуклеотидные праймеры и флуоресцентно-меченый зонд, способ и тест-система ПЦР в режиме реального времени для выявления генома каприпоксвирусов. Олигонуклеотидные праймеры и флуоресцентно-меченый зонд, способ и тест-система для выявления генома полевых изолятов вируса заразного узелкового дерматита нодулярного дерматита КРС в реакции полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Штаммы и изоляты вирусов, использованные в исследовании. Эффективность, величина стандартного отклонения SD и коэффициент детерминированности r 2 тест-систем ПЦР-РВ для выявления и дифференциации полевых изолятов вируса заразного узелкового дерматита крупного рогатого скота, вакцинных штаммов этого вируса и каприпоксвирусов.

Купить Гашиш, Бошки, Шишки Янгон Мьянма

Пробы Экстази, Лсд 25 Юрьевец

Сердобск бесплатные пробы кокаин