Практические работы по физиологии. Реферат. Биология.
🛑 👉🏻👉🏻👉🏻 ИНФОРМАЦИЯ ДОСТУПНА ЗДЕСЬ ЖМИТЕ 👈🏻👈🏻👈🏻
Вы можете узнать стоимость помощи в написании студенческой работы.
Помощь в написании работы, которую точно примут!
Похожие работы на - Практические работы по физиологии
Скачать Скачать документ
Информация о работе Информация о работе
Скачать Скачать документ
Информация о работе Информация о работе
Скачать Скачать документ
Информация о работе Информация о работе
Скачать Скачать документ
Информация о работе Информация о работе
Скачать Скачать документ
Информация о работе Информация о работе
Скачать Скачать документ
Информация о работе Информация о работе
Нужна качественная работа без плагиата?
Не нашел материал для своей работы?
Поможем написать качественную работу Без плагиата!
Определение примесей в таблетках диазепама и
феназепама методом двухступенчатой капиллярной газовой хроматографии с
масс-спектрометрическим детектированием
Определение примесей в фармацевтических
препаратах является важной и актуальной задачей, так как состав примесей
определяет качество продукта и позволяет судить о производителе продукции и ее
фальсификации, которая принимает все большие масштабы во всех странах мира.
Необходимо также отметить, что в ряде случаев примеси, присутствующие в
препарате в следовых концентрациях, по своей токсичности намного превосходят
токсичность основного компонента.
Одно из ведущих мест в анализе фармацевтических
препаратов на содержание органических примесей (как правило, заданных) занимает
высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ). При обнаружении и
определении неизвестных примесей возможности этого метода весьма ограничены.
УФ-детектор с диодной матрицей, как наиболее селективный, часто используется
при определении заданных примесей в фармацевтических препаратах, однако для
идентификации неизвестных примесей в фармацевтических препаратах данный
детектор использован не был. Принципиально диодно-матричный детектор может быть
использован для этой цели путем сравнения спектра со спектром библиотеки,
однако УФ-спектры не так характеристичны, как масс-спектры, и после
идентификации соединения по УФ-спектру ее необходимо подкрепить применением
таких методов как ГХ/МС или ВЭЖХ/МС. Сочетание ВЭЖХ с масс- спектрометрией (МС)
используют в большинстве случаев для подтверждения известных (заданных)
примесей, присутствующих в фармацевтической продукции. Возможности такого
сочетания для идентификации неизвестных примесей весьма ограничены; это
обусловлено возможностью потери информации о ряде компонентов смеси из-за
различных ион-молекулярных реакций примесей в элюенте, а также регистрацией
только молекулярных масс компонентов смесей (когда это возможно). В ряде
случаев для идентификации примесей используют выделение соответствующих
фракций, их концентрирование с заменой растворителя и последующую регистрацию
спектров ядерного магнитного резонанса (ЯМР) (если это возможно - в связи с
низкой чувствительностью метода ЯМР). Помимо ВЭЖХ, для контроля содержания
заданных примесей в фармацевтической продукции используют высокоэффективную тонкослойную
хроматографию и реже газовую (ГХ), сверхкритическую флюидную хроматографию и
капиллярный электрофорез. Каждый из этих методов имеет определенные
преимущества перед ВЭЖХ, однако их ограничениями являются селективность,
эффективность, емкость колонки и чувствительность детектора.
Для большинства термостабильных летучих и
среднелетучих соединений идентификация примесей наиболее легко и эффективно
обеспечивается использованием сочетания капиллярной газовой хроматографии с
масс-спектрометрией (ГХ/МС). Одним из возможных методов, позволяющих
одновременно снизить предел обнаружения примесей и улучшить чувствительность,
эффективность и селективность анализа, является метод двухступенчатой off-line
капиллярной газовой хроматографии (КГХ) в сочетании с масс-спектрометрией.
Известно, что бензодиазепины, в том числе
диазепам и феназепам, удовлетворяют требованиям метода ГХ/МС по своей летучести
и термостабильности. В частности, их метаболизм и фармакокинетика были успешно
изучены методами ГХ и ГХ/МС.
В связи с этим целью настоящей работы являлось
изучение возможности определения примесей в таблетированной форме
рассматриваемых фармацевтических препаратов с использованием двухступенчатой
КГХ в сочетании с масс-спектрометрическим детектированием в режиме off-line.
В качестве объектов исследования были выбраны
два фармацевтических препарата в таблетированной форме, активными веществами
которых являлись диазепам
(7-хлор-2,3-дигидро-1-метил-5-фенил-1Н-1,4-бензодиазепин-2-он) и феназепам (7-бром-5-(орто-
хлорфенил)-2,3-дигидро-1Н-1,4-бензодиазепин-2-он).
Для приготовления рабочего раствора диазепама
одну таблетку (с содержанием активного компонента 5 мг) растирали в порошок в
ступке. Порошок растворяли в 6 мл ацетонитрила, при растворении использовали
активацию ультразвуковым полем в течение 30 мин. Затем раствор центрифугировали
15 мин со скоростью 5000 об/мин. Жидкость над осадком сливали и для получения
более концентрированного раствора 2,0 мл полученного раствора упаривали в токе
азота при комнатной температуре до 200 мкл.
Для приготовления рабочего раствора феназепама
пять таблеток (с содержанием активного компонента 0,5 мг) растирали в порошок в
ступке. Далее феназепам извлекали 6 мл ацетонитрила по той же методике, которая
описана для извлечения диазепама. Для холостых опытов 2,0 мл растворителя -
ацетонитрила - упаривали до 200 мкл.
Первую ступень двухступенчатой КГХ в режиме off-line
с концентрированием примесей осуществляли с использованием газового
хроматографа "DANI
6500" с пламенно-ионизационным детектором (ПИД). Разделение проводили на
капиллярной кварцевой колонке 0,5 м х 0,32 мм х 1 мкм с неподвижной фазой RTX-5
фирмы Restec (США).
Режим программирования температуры колонки: 50° С (3 мин) → 30°/мин →
250 °С (6 мин). Температура испарителя хроматографа составляла 250 °С,
температура ПИД - 250 °С. Колонку к детектору и инжектору присоединяли без
поддува и сброса потока. В качестве газа-носителя использовали водород со
скоростью потока 5 мл/мин. Для сбора и обработки хроматографических данных
использовали программное обеспечение "Chrom
- Card" для Windows
3.1 Server
Ver. 1.1.
Концентрирование примесей осуществляли на
сорбционном картридже, подключенном к выходу капиллярной колонки (см. рисунок).
Картридж представлял собой металлическую трубку
длиной 4 см и внутренним диаметром 3 мм, наполненную тенаксом (длина слоя 1,6
см) и хромосорбом W с 15 % SE-30
(длина слоя 1,6 см). Зоны сорбентов внутри трубки отделялись друг от друга
кварцевой ватой. Улавливание веществ проводили при потоке газа-носителя,
направленном от слоя хромосорба W
с 15 % SE-30 к слою
тенакса.
Для концентрирования примесей на первой ступени
двухступенчатой КГХ в режиме off-line
использовали систему, представленную на рисунке.
Схема установки для двухступенчатой off-line
КГХ: ( 1, 10 - вентиль «открыт/закрыт»; 2 - кран тонкой регулировки; 3 -
манометр; 4 -инжектор хроматографа; 5 - ГХ колонка; 6 - термостат ГХ; 7 -
тройник; 8 - ПИД; 9 - сорбционный катридж).
На конце разделительной колонки был установлен
тройник (7), позволяющий направлять поток газа-носителя на сорбционный картридж
(9) и частично ПИД (при открытом вентиле 10) или полностью через ПИД (8) (при
закрытом вентиле 10). Примеси на сорбционном картридже концентрировали по следующей
схеме. Отбирали 5 мкл рабочего раствора и вводили его непосредственно в
инжектор ГХ, при этом вентиль 10 был открыт. Для сброса основной части
активного компонента (диазепама или феназепама) вентиль 10 закрывали после
начала выхода пика основного компонента, а после окончания его выхода открывали
(с 7,5 по 12,4 мин при анализе раствора диазепама и с 8,4 по 12,4 мин при
анализе раствора феназепама). Эту операцию повторяли два раза. Начало и конец
выхода пика основного компонента определяли в предварительном опыте.
Для определения сконцентрированных примесей на
второй ступени использовали систему ГХ/МС (газовый хроматограф фирмы "Varian"
(США) модели 3400 с масс-спектрометрическим детектором "Incos
50" фирмы "Finnigan
МАТ" (США) в режиме ионизации электронным ударом). Для перевода
адсорбированных соединений в капиллярную колонку ГХ картридж с помощью иглы
соединяли с испарителем хроматографа и осуществляли термодесорбцию, нагревая
картридж потоком горячего воздуха (250 °С), при этом поток газа-носителя пропускали
через картридж в направлении, обратном направлению потока при улавливании.
Термодесорбированные примеси разделяли на
капиллярной кварцевой колонке 30 м х 0,32 мм х 0,5 мкм с неподвижной фазой CPSil
24 СВ. Режим программирования температуры колонки: 50 °С (10 мин) →
10°/мин → 290 °С (20 мин). Температура испарителя хроматографа составляла
270 °С. Пробу вводили в режиме без деления потока. В качестве газа-носителя
использовали гелий со скоростью потока 1,5 мл/мин. Температура переходной линии
составляла 260 °С, температура источника ионов - 180 °С, энергия электронов -
70 эВ, диапазон сканируемых масс от 50 до 500 а.е.м., скорость сканирования - 2
скан/с.
До определения примесей в исследуемых образцах
методом двухступенчатой off-line
КГХ/МС сначала регистрировали примеси без концентрирования, вводя пробу (1 мкл)
рабочего раствора непосредственно в инжектор хроматомасс-спектрометра. Примеси
определяли в условиях, описанных для второй ступени. Предварительно провели
холостой опыт, проанализировав 1 мкл ацетонитрила, упаренного в 10 раз, в тех
же условиях. При обработке хроматомасс-спектрометрических данных учитывали
результаты холостого опыта. Холостым опытом при определении примесей методом
двухступенчатой off-line
КГХ/МС являлся предварительно проведенный анализ ацетонитрила, упаренного в 10
раз, в условиях двухступенчатой offline
КГХ/МС.
Для обработки хроматомасс-спектрометрических
данных использовали программное обеспечение GCQ
версии 2.2. Неизвестные примеси идентифицировали сравнением масс-спектра неизвестного
соединения с базой данных NIST
(National
Institute
of Standards
and Technology,
USA). Отнесение
спектра к определенной структуре считали достоверным, если значения
коэффициентов сходимости при прямом и обратном библиотечном поиске были больше
700.
Содержание примесей оценивали с использованием
метода внешнего стандарта - раствора нафталина-d8
с концентрацией 1 • 10 -8 г/мкл. Проводили 6 параллельных опытов, относительное
стандартное отклонение при определении примесей составило не более 0,25.
Данные по определению примесей в диазепаме и
феназепаме методом хроматомасс-спектрометрии представлены, соответственно, в
табл. 1 и 2.
Таблица - Примеси, определенные в препарате
диазепама при прямом вводе 1 мкл раствора препарата в хроматомасс-спектрометр,
и оценка их содержания в таблетке (n
= 6; Р = 0,95; Sr
≤0,25)
154(100),
153(39), 152(28), 151(10), 76(30), 63(12)
206(58),
205(100), 151(11), 121(20), 76(30), 57(9)
241(40), 239(93), 205(100),
110(28), 75(53)
* - здесь и далее масс-спектры приведены в
следующей форме: молекулярный ион (если он наблюдается), пять наиболее
интенсивных ионов в спектре в порядке убывания значений массовых чисел ионов
(для изотопных галогенсодержащих ионов приведены пики только 35Cl
и 79Br-содержащих
ионов)
Таблица - Примеси, определенные в препарате
феназепама при прямом вводе 1 мкл раствора препарата в хроматомасс-спектрометр,
и оценка их содержания в таблетке (n
= 6; Р = 0,95; Sr
≤0,25)
208(31),
192(24), 104(22), 92(100), 91(62)
206(40),
205(100), 121(12), 89(23), 75(51), 57(21)
141(100),
119(32), 115(20), 83(48), 77(22)
270(66),
256(100), 221(36), 165(29), 110(13), 77(45)
7-хлор-2,3-дигидро-1-метил-5-фенил-1Н-1,4-бензодиазепин-2-он
(диазепам)
270(66), 241(96),
235(100), 208(70), 103(39), 75(74)
5-(2-хлорфенил)-1,3-дигидро-2Н-1,4
-бензодиазепин-2-он
348(38), 321(65),
282(30), 102(63), 89(76), 75(100)
Как видно из приведенных данных, в препарате
диазепама было зарегистрировано только три примеси на уровне 10-3 - 10-2 %, из
них идентифицированы две примеси, а в препарате феназепама - 7 примесей на
уровне 10 -3 - 10 -5 %, из них идентифицированных - 3.
Результаты обработки данных по определению сконцентрированных
примесей в таблетках диазепама и феназепама методом двухступенчатой off-line
КГХ представлены соответственно в табл. 3 и 4.
Таблица - Примеси, определенные в препарате
диазепама двухступенчатой КГХ/МС в варианте off-line,
и оценка их содержания в одной таблетке (n
= 6; Р = 0,95; Sr
≤0,25)
134(22),
119(14), 106(16), 105(100), 91(12), 77(19)
132(39),
117(17), 104(100), 91(35), 77(23), 65(11)
136(35),
64(58), 61(32), 60(100), 59(33), 55(29)
132(100),
163(8), 155(5), 88(45), 73(8)
154(100),
153(41), 152(25), 151(18), 76(25), 63(13)
191(75),
168(100), 167(75), 152(19), 73(41)
168(100),
167(53), 152(20), 148(15), 56(13)
194(21),
163(100), 135(29), 120(9), 103(17), 76(28)
Диметиловый
эфир 1,3-бензолдикарбоновой кислоты
154(22),
153(100), 126(16), 98(28), 57(60)
156(84),
155(48), 128(100), 127(98), 126(34), 63(18)
170(100),
155(97), 119(70), 71(27), 57(43)
196(23),
181(20), 153(100), 74(9), 73(43)
185(32),
183(100), 154(33), 92(98), 73(28)
170(22),
166(73), 165(100), 163(31), 155(25)
181(97),
138(96), 110(95), 75(100), 74(73)
169(100),
168(28), 167(30), 115(10), 73(27), 51(30)
206(52),
205(100), 151(14), 121(18), 76(29), 57(15)
303(100),
110(17), 97(15), 57(58), 54(17)
241(40),
239(93), 205(100), 75(53), 69(17)
255(39),
254(60), 253(100), 219(95), 110(37)
245(78),
228(36), 193(33), 168(17), 105(36), 77(100)
284(21),
243(26), 94(100), 69(20), 55(39)
286(32),
285(47), 284(31), 283(40), 205(100)
259(27),
257(80), 230(26), 228(50), 222(100)
250(64),
249(85), 222(100), 221(42), 91(27), 77(37)
1,3-дигидро-
1-метил-5-фенил-2Н-1,4-бензодиазепин-2-он
316(8),
284(57), 241(100), 228(75), 222(82), 209(39)
7-хлор-2,3-дигидро-2-гидрокси-1-метил-2-метокси-5-фенил-1Н-1,4-
бензодиазепин
270(71),
242(100), 214(18), 178(14), 151(21), 103(40)
7-хлор-1,3-дигидро-5-фенил-2Н-1,4-бензодиазепин-2-он
284(100),
268(13), 248(11), 206(18), 151(8), 124(14)
7-хлор-2-метокси-5-фенил-ЗН-1,4-бензодиазепин
Таблица - Примеси, определенные в препарате
феназепама двухступенчатой КГХ/МС в варианте off-line,
и оценка их содержания в одной таблетке (n
= 6; Р = 0,95; Sr
≤0,25)
137(100),
110(4), 102(46), 83(17), 75(34), 58(56)
156(80),
128(100), 127(25), 126(65), 102(13)
196(31),
181(32), 154(46), 153(100), 57(85)
184(7),
169(100), 168(54), 167(27), 115(11), 51(19)
246(13),
243(9), 92(100), 91(70), 78(8), 60(11)
110(10),
82(61), 68(43), 57(100), 55(81)
206(44),
205(100), 177(10), 151(15), 76(28), 60(37)
129(18),
97(21), 85(19), 57(100), 55(80)
270(23),
73(99), 71(45), 60(100), 57(99), 55(87)
241(45),
239(87), 205(100), 110(22), 75(40)
275(53),
195(28), 105(48), 91(25), 77(100), 51(44)
285(47),
205(100), 177(13), 103(16), 75(29)
276(16),
150(16), 141(100), 115(12), 55(15)
311(100),
276(93), 195(64), 139(75), 75(60)
133(10),
100(17), 87(100), 77(34), 72(15)
236(77),
235(91), 208(100), 207(89), 180(31), 77(57),
1,3-дигидро-5-фенил-1Н-1,4-бензодиазепин-2-он
284(60),
256(100), 221(30), 165(22), 110(20), 103(17)
7-хлор-2,3-дигидро-1-метил-5-
фенил-1Н-1,4-бензодиазепин-2-он (диазепам)
270(73),
241(88), 235(100), 207(32), 178(21), 103(45)
5-(2-хлорфенил)-1,3-дигидро-2Н-
1,4-бензодиазепин-2-он
308(100),
306(72), 227(8), 192(32), 164(17), 63(33)
2-[n-бромфенил]-5-хлорбензими-
дазол
335(100),
333(75), 254(28), 219(27), 75(60)
323(100),
321(78), 294(48), 258(50), 242(48)
307(100),
305(73), 211(42), 209(50), 163(23)
304(90),
275(100), 269(80), 241(33), 138(25), 120(30)
7-хлор-5-(2-хлорфенил)-1,3-дигидро-2Н-1,4-бензодиазепин-2-он
348(40),
321(50), 313(28), 102(60), 89(80), 75(100)
314(67),
286(100), 207(30), 179(26), 151(22), 103(74)
7-бром-2,3-дигидро-5-фенил-1Н-
1,4-бензодиазепин-2-он
392(18),
365(47), 313(69), 103(80), 89(79), 75(100)
7-бром-5-(3-бромфенил)-2,3-дигидро-1Н-1,4-бензодиазепин-2-он
В диазепаме определено 28 примесей на уровне
10-4 - 10-2 %, оценка суммарного содержания которых составила около 0,2 %. В
феназепаме определено 26 примесей на уровне 10-4 - 10-1 %, и оценка их
суммарного содержания составила около 0,5 %. Таким образом, с использованием
предложенного метода двухступенчатой КГХ в режиме off-line
можно определять значительно большее число примесей и на более низком уровне по
сравнению с прямым ГХ/МС определением.
В Фармакопее США регламентированы следующие
примеси в диазепаме: 5-хлор-2-(метиламин)бензофенон (не более 0,01 %), 3-амино-6-хлор-1-метил-4-фе-
нилкарбостирил (не более 0,1 %) и
7-хлор-1,3-дигидро-5-фенил-2Н-1,4-бензодиазепин-2-он (не более 0,3 %). Как
видно из данных, представленных в табл. 1 и 3, ни одна из регламентированных
примесей не была определена при прямом вводе в ГХ/МС и две из
регламентированных примесей были определены двухступенчатой off-line
КГХ/МС на уровне 0,03 % и 0,004 %.
Можно предположить, что часть определенных
примесей, не относящихся к классу бензодиазепинов, возможно, связана с наличием
наполнителей в таблетках или является продуктами деструкции в процессе
концентрирования и термодесорбции с картриджа. Известно, что, в качестве
вспомогательных веществ в таблетках диазепама и феназепама могут быть
использованы такие вещества, как глюкоза, сахар, крахмал, лактоза, стеариновая
кислота, метилцеллюлоза, карбоксицеллюлоза, аэросил, тальк, полиэтилоксид и
другие вещества. По-видимому, идентифицированные примеси, приведенные в табл. 1
- 4, не характерны как для самих перечисленных наполнителей (большая часть которых
удаляется в процессе пробоподготовки), так и продуктов их возможной деструкции.
Часть неидентифицированных примесей может относиться к наполнителям таблеток.
Доказательством отсутствия деструкции примесей и основных веществ в процессе
концентрирования и термодесорбции с картриджа является наличие четких
хроматографических пиков, соответствующих этим веществам, на хроматограммах,
зарегистрированных как для растворов этих веществ при прямом вводе в ГХ/МС, так
и для десорбированного содержимого картриджа. Кроме того, об отсутствии
термодеструкции примесей при термодесорбции свидетельствует примерно одинаковое
содержание одних и тех же примесей в препарате, зарегистрированных до и после
концентрирования. Отдельно следует отметить следующий факт: среди примесей,
определенных методом двухступенчатой КГХ/МС, есть ряд веществ, содержание
которых оценено на относительно высоком уровне (10-3-10-2 %), но в то же время,
эти примеси не определены при прямом вводе в хроматомасс-спектрометр. Это может
быть, во-первых, обусловлено различной чувствительностью
масс-спектрометрического детектора (МСД) к разным веществам, а также разной
формой хроматографических пиков при содержании примеси на уровне 10-4-10-3% (до
концентрирования) и на уровне 10-3-10-2% (после концентрирования). В первом
случае пик может быть более размытым и иметь меньшую высоту и, следовательно,
не быть различимым МСД, а после концентрирования он становится более четким и
легко различимым.
Таким образом, с использованием метода,
основанного на двухступенчатой КГХ в режиме off-line
в сочетании с масс-спектрометрическим детектированием, определены примеси в
таблетированной форме фармацевтических препаратов, активными веществами которых
являлись диазепам и феназепам. В препарате диазепама зарегистрировано 28
примесей на уровне 10-4-10-2% (из них идентифицировано 13), в то время как при
прямом вводе пробы в инжектор хроматомасс-спектрометра обнаружено только 3
примеси на уровне 10-3- 10-2%. В препарате феназепама зарегистрировано 26
примесей на уровне 10-4 - 10 -1 % (из них идентифицировано 14), а при прямом
вводе пробы обнаружено 7 примесей на уровне 10-3-10-1%. Оценка суммарного
содержания всех зарегистрированных примесей в случае диазепама составила около
0,2 %, в случае феназепама - около 0,5 %.
Похожие работы на - Практические работы по физиологии Реферат. Биология.
Лечебное Дело Рефераты
Курсовая Работа На Тему Договір Найму Приміщень
Реферат по теме Матка
Развитие Языков Реферат
Реферат по теме Владимир Афанасьевич Обручев
Практическая Работа Ряды
Характеристика Руководителем Практики От Предприятия
Реферат: Физико-химические изменения молока при его хранении и обработке
Курсовая работа по теме Льготы и пособия для малоимущих семей
Оздоровительные Методики Реферат
Реферат: Точечные и интервальные оценки
Дипломная работа: Управление трудовыми ресурсами на предприятии. Скачать бесплатно и без регистрации
Курсовая работа: Технические средства в обучении технологии. Скачать бесплатно и без регистрации
Реферат: Финансовая структура капитала и финансовый риск
Дипломная работа по теме Понятие, стороны, содержание коллективного договора на примере одного предприятия
Реферат: Date Rape Essay Research Paper EDUCATING KIDS
Отчет По Практике Депо
Сочинение Голубой Звон 5 Класс
Реферат по теме Система Ермолова 1816-1826
Контрольная Работа На Тему Показатели, Позволяющие Оценить Эффективность Экономической Деятельности Предприятия
Реферат: Захват заложников
Похожие работы на - Влияние Древней Римской Империи на Западную и Восточную Европу. Социально-политическое наследие античных обществ в средневековой Руси
Реферат: Основные категории товарооборота и статистика РТО