Получение ледяной уксусной кислоты часть 1

______________

✅ ️Наши контакты (Telegram):✅ ️

>>>🔥🔥🔥(ЖМИ СЮДА)🔥🔥🔥<<<

✅ ️ ▲ ✅ ▲ ️✅ ▲ ️✅ ▲ ️✅ ▲ ✅ ️

______________

Получение ледяной уксусной кислоты часть 1

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЦЕТАТА ПАЛЛАДИЯ

Получение ледяной уксусной кислоты часть 1

Практические методики исследования растений

Получение ледяной уксусной кислоты часть 1

Мы описываем метод ВЭЖХ для определения N-ацетилнейраминовой кислоты и N-гликолиленураминовой кислоты в печени и молоке мыши. CMAH гидроксилаза цитидин-моно-фосфат-N-ацетилнейраминовой кислоты ответственна за окисление монофосфат-цитидин-N-ацетилнейраминовых кислот у млекопитающих. Однако люди не могут окислять монофосфат-N-ацетилнейраминовую кислоту цитидина до монофосфат-N-гликолинераминовой кислоты цитидина из-за первичной экзоновой делеции гена CMAH. Чтобы более подробно понять последствия и последствия отсутствия активности CMAH , модель нокаутов Cmah у мышей представляет большой интерес к фундаментальным и прикладным исследованиям. Метод анализа для определения фенотипа этой модели мыши подробно описан здесь и основан на обнаружении как N-ацетилнейраминовой кислоты, так и N-гликолиленураминовой кислоты в печени и молоке мышей с диким типом и Cmah. Эндогенные сиаловые кислоты высвобождаются и дериватизируются о-фенилендиамином для получения флуорогенных производных, которые затем могут быть проанализированы с помощью ВЭЖХ. Представленный протокол может бытьТакже применяется для анализа образцов молока и тканей из различных других источников и может быть полезен для исследования пищевых и медицинских эффектов N-гликолилнейраминовой кислоты. N-ацетилнейраминовая кислота Neu5Ac и N-гликолилнеураминовая кислота Neu5Gc являются наиболее распространенными сиаловыми кислотами у большинства млекопитающих 1. Однако пищевые продукты на основе животных могут быть диетическими источниками Neu5Gc 4 , 5 , 6 , что приводит к получению антител против Neu5Gc и, следовательно, вызывает иммунный ответ на Neu5Gc 7. Предполагается, что этот диетический эффект Neu5Gc способствует хроническому воспалению и различным другим заболеваниям 8 , 9 , Чтобы всесторонне понять эффекты Neu5Gc в hUmans, животная модель для систематического изучения эффектов сиаловых кислот пищевого происхождения весьма желательна. Хотя протоколы, основанные на полимеразной цепной реакции ПЦР для анализа выбитых мышей, хорошо известны и являются удобным способом генотипической оценки, функциональный анализ фенотипа на метаболическом уровне требует более конкретных методов анализа. Фенотип модели выкатной мыши Cmah можно оценить, выделив и проанализировав состав сиаловых кислот в образцах печени или молока. Ранее сообщалось о нескольких методах обнаружения сиаловых кислот в тканях животных: реакция сиаловых кислот с резорцинолом 11 или тиобарбитуровой кислотой 12 приводит к образованию хромофорного продукта и может быть просто проанализирована с использованием установки на основе плиттера, но только общая сиалическая Содержание кислоты может быть определено. Альтернативно, анализ сиаловых кислот также описывался с использованием газовой хроматографии 13 , масс-спектрометрия MALDI-TOF 14 или амперометрические методы Однако наиболее часто применяемые методы анализа сиаловой кислоты основаны на гидролитическом высвобождении с последующей дериватизацией флуоресценции и последующей высокоэффективной жидкостной хроматографией 16 , 17 , Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian. Процедуры, связанные с животными, были одобрены Этическим комитетом экспериментального животного центра Нанкинского сельскохозяйственного университета в соответствии с Национальными руководящими принципами по обеспечению благополучия животных Министерство науки и технологий, КНР, г. Схематический анализ описанного метода анализа показан на рисунке 1 и включает выделение сиаловых кислот из образцов молока и печени мутантных мышей дикого типа и Cmah , а также дериватизацию флуоресценции и анализ HPLC этих компонентов. На фиг. На рисунке 4 показаны полученные относительные количества N-гликолилнейраминовой кислоты Neu5Gc анализируемых образцов мыши, рассчитанных на участках пика ВЭЖХ. Нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка. Верхняя хроматограмма представляет собой смешанный стандарт сиаловой кислоты. Представленный здесь протокол позволяет фенотипическую оценку гомозиготных мышечных мышей Cmah , анализируя и количественно определяя относительные количества Neu5Gc образцов молока и печени. Анализ проводили с использованием стандартной установки ВЭЖХ с детектированием флуоресценции. Наиболее важным этапом этой процедуры является получение анионообменных колонок и проведение анионообменной хроматографии; Для правильной установки смолы и для сбора правильной фракции промывки и элюирования требуется немного практики. В качестве альтернативы используемый здесь дериватизирующий агент OPD может быть легко заменен более дорогим дериватизационным агентом DMB 1,2-диамино-4,5-метилендиоксибензол. Кроме того, анализ полученных производных сиаловой кислоты на стадии 6. Применяя шаги 7. Одно из ограничений этого метода заключается в том, что содержание Neu5Gc может быть количественно оценено по отношению к количеству Neu5Ac, но не в абсолютном порядке. Для этого на начальной стадии подготовки образца потребуется добавить отдельную и количественную сиаловую кислоту в качестве внутреннего стандарта. Другим недостатком является то, что только гомозиготные, но не гетерозиготные мышечные мыши Cmah могут быть однозначно идентифицированы, так как относительное количество гетерозиготных нокаутных мышей Neu5Gc может сильно варьироваться в зависимости от типа образца т. Ткани и возраста отдельных мышей. Будущие разработки этого метода могут включать добавление внутренних стандартов и абсолютную количественную оценку сиаловых кислот у мышей. Cao, C. To learn more about our GDPR policies click here. If you want more info regarding data storage, please contact gdpr jove. Your access has now expired. Provide feedback to your librarian. If you have any questions, please do not hesitate to reach out to our customer success team. Login processing JoVE Journal Biology. Log in or Start trial to access full content. После пересечения гетерозиготных F 1 -mice 5 особей , гомозиготные Cmah выбивание F 2 -mice может быть успешно получен 3 особей. Выполните генотипирование мышей с использованием геномной ДНК в соответствии с методом, показанным Zangala 21, с использованием коммерческого набора для очистки ДНК. Нужно наблюдать одиночную полосу 0,5 т. Сбор образцов Собирайте мышечное молоко с использованием протокола, описанного Willingham et al. Выделение сиаловых кислот из молока Подготовьте мл 2 М раствора уксусной кислоты, добавив 12 мл ледяной уксусной кислоты в 88 мл дистиллированного H 2 O. Передайте 50 мкл молока в 1,5 мл центрифужную пробирку и добавьте 1,2 мл полученного водного раствора уксусной кислоты. Перенесите верхние мкл надосадочной жидкости в свежую 1,5 мл центрифужную пробирку и запишитеРастворител центрифугированием при комнатной температуре до полного сухости в зависимости от подключенного вакуумного насоса это займет ч. Повторно растворите образец в мкл дистиллированного H 2 O. Подготовьте колонку обмена микроанионом. Эта стадия специально обогащает анионные соединения и удаляет катионные и нейтральные соединения из образцов молока и печени и, следовательно, повышает селективность флюорогенного меченого агента OPD для дериватизации сиаловой кислоты. Перенесите для каждого образца мг анионообменной смолы Dowex 1X8 в пустые 3-миллилитровые колонки с прикрепленным краном. Добавить 2 мл водного раствора уксусной кислоты, полученного на стадии 3. Закройте краном, как только растворитель достигнет вершины смолы. Аккуратно добавьте 2 мл дистиллированного H 2 O, откройте запорный кран и остановите поток, как только большая часть растворителя достигнетВерхняя часть смолы. Убедитесь, что смола всегда покрыта растворителем. Промойте колонку смолы еще два раза с помощью 2 мл дистиллированного H 2 O для удаления избытка ацетата. Перенесите полученные мкл растворителя образца из стадии 3. На колонну смолы и отказаться от сквозного потока. Аккуратно промыть смолу 2 мл дистиллированного H 2 O. Элюировать образцы анионов из смолы, используя 1 мл 50 мМ раствора ацетата аммония мг ацетата аммония, растворенного в мл дистиллированной H 2 O , в 1,5 мл Центрифужная трубка. Удалите растворитель центробежным выпариванием при комнатной температуре досуха. Выделение сиаловых кислот из ткани печени Аккуратно оттереть 20 - 50 мг печени мыши и перенести его в тканевую дробилку Dounce 1 мл или 2 мл объема. Добавить 1,2 мл водного раствора уксусной кислотыПолученного на стадии 3. Перенесите полученную суспензию в 1,5 мл центрифужную пробирку. Выполните шаги 3. Подготовка стандарта смешанной сиаловой кислоты Взвешивают между мг N-ацетилнейраминовой кислоты на аналитическом балансе в 1,5 мл центрифужную пробирку. Получают N-гликолилнейраминовую кислоту в меньших количествах по умеренной цене, например, в аликвотах по 1 мг. Добавьте мкл дистиллированного H 2 O непосредственно к соединению для получения 20 мМ исходного раствора Neu5Gc. ПередайтеРаствор в 1,5 мл центрифужную пробирку. Объедините 5 мкл из каждого исходного раствора с шага 5. Флюоресцентная дериватизация сиаловых кислот Подготовьте 10 мл OPD-раствора, состоящего из мг о-фенилендиамина и мг гидросульфита натрия в 10 мл дистиллированного H 2 O. Добавьте 20 мкл OPD-раствора в образцы сиаловой кислоты, полученные из мышиного молока стадия 3 , печень мыши стадия 4 или смешанный стандарт сиаловой кислоты этап 5. Оберните микропробирки в алюминиевой фольге. Передайте 80 мкл из супернатанта в мкл высокоэффективного ВЭЖХ-ампулы. Для анализа используйте колонку с обращенной фазой C18 с стандартными размерами мм и диаметром 4,6 мм. Отрегулируйте pH до 4,5 путем добавления по каплям раствора гидроксида аммония puriss. Это инициирует промывку колонки ВЭЖХ. В50 мкл образца в систему ВЭЖХ. Play Video. Cite this Article Cao, C. Before you can use the favorites feature you must sign in or create an account. Continue with Shibboleth or Forgot Password? Please enter your email address so we may send you a link to reset your password. Please enter your institutional email to check if you have access to this content. Please create an account to get access. Forgot Password? To receive a free trial, please fill out the form below. Not your institution? A JoVE representative will be in touch with you shortly. You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions jove. Thank You. Please enjoy a free hour trial. In order to begin, please login or create an account. Please click here to activate your free hour trial. If you do not wish to begin your trial now, you can log back into JoVE at any time to begin. Enable Javascript for audio controls. Get cutting-edge science videos from J o VE sent straight to your inbox every month. We use cookies to enhance your experience on our website. Continue Learn more Close.

Купить наркотики Саратовская область

Купить Кокаин в Кандалакше

Получение ледяной уксусной кислоты часть 1

Рязань купить закладку Кокаина

Марихуана Болгария

Умные таблетки Екатеринбург