Перенос чужеродной ДНК в протопласты - Биология и естествознание реферат

Главная

Биология и естествознание
Перенос чужеродной ДНК в протопласты

Фитобиотехнология как составная часть биотехнологии, предмет и методы ее изучения, общие сведения и история развития. Характеристика и получение протопластов. Проблема создания векторов для введения чужеродной ДНК в протопласты растений, пути ее решения.


посмотреть текст работы


скачать работу можно здесь


полная информация о работе


весь список подобных работ


Нужна помощь с учёбой? Наши эксперты готовы помочь!
Нажимая на кнопку, вы соглашаетесь с
политикой обработки персональных данных

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
" Перенос чужеродной ДНК в протопласты. Повышение стабильн о сти прот о пластов "
Фитобиотехнология - составная часть биотехнологии, объектами которой являются клетки и ткани растений - фотоавтотрофных эукариот, а также биоактивные молекулы растительного происхождения (ферменты, нуклеиновые кислоты, стероиды и некоторые другие сложные органические вещества).
Название фитобиотехнология слагается из четырех слов греческого происхождения: phyton - растение, bios - жизнь, teken - искусство, logos - наука, слово. Следовательно, это наука об использовании растительных объектов в технике и промышленном производстве.
На первый взгляд выращивание растений (злаковых, лекарственных, декоративных и т.д.) в полевых условиях подпадает под рубрику «фитобиотехнология», однако, как и с животными, здесь отсутствуют специфические методы промышленного культивирования цельных растений в биореакторах.
Таким образом, к фитобиотехнологическим процессам относят те из них, которые базируются на клеточном уровне, если даже клетки несут генетическую информацию, воспринятую ими в результате генно-инженерного эксперимента.
Клетки и ткани высших растений, выращиваемые на питательных средах in vitro в строго контролируемых условиях, все шире используют в фитобиотехнологии.
Общирное царство растений - потенциально неограниченный источник клеток и тканей, которые могут быть введены в культуру и, как следствие, существуют неограниченные возможности для создания новых фитобиотехнологических процессов, в которых нуждается человечество.
В настоящее время царство растений на земном шаре включает порядка 300 000 видов. От рационального и бережного отношения к растениям зависит благополучное выживание человечества на планете Земля.
Хотя растительные клетки и ткани принадлежат к более дифференцированным организмам в сравнении, например, с бактериями, тем не менее, они способны культивироваться в форме неорганизованной клеточной массы - каллуса.
Каллусную ткань можно «заставить» формировать зародышеподобные структуры, почки, побеги, а на их основе - растения-регенераты. Все это происходит благодаря тотипотентности растительных клеток (от лат. totus - все, целый, potentia - сила, потенция). Понятие «тотипотентность» является клеточной характеристикой; в нем отражен потенциал клетки воспроизводить все типы клеток, присущих взрослому организму. Другими словами клетка обладает способностью воспроизводить целый организм.
Если в качестве биообъекта применяют изолированный зародыш, меристему верхушечных или пазушных почек, то есть интегрированную систему, то все получаемые растения-регенеранты будут полностью соответствовать исходному растению, из которого была взята какая-либо интегрированная система из числа вышеназванных. Этим добиваются клонирования интересующих настоящих растений. [2]
В случаях применения изолированных клеток и протопластов удается получать измененные варианты исходной формы, которые передают полученные новые признаки потомству. Этим добиваются возможностей искусственного создания новых форм растений, пригодных для выборки, или селекции (см. рисунок ниже).
В течение последних лет биотехнологам удалось массовое размножение культивируемых растений с уникальными характеристиками, а выращивание растительных клеток стало основой для получения многих природных веществ, образуемых различными растениями в качестве продуктов вторичного обмена (гликозиды, алкалоиды и другие вещества).
Таким образом, клеточная и молекулярная биология растений составляет основу фитобиотохнологии, а главными направлениями стали создание новых форм полезных растений для сельского и лесного хозяйства, а также разработка промышленного производства химических веществ из растений.
Растения - как многоклеточные организмы с огромной емкостью геномов, с половым путем размножения и многоступенчатыми программами развития - являются более сложными объектами для генноинженерных экспериментов, чем, например, вирусы, бактерии и дрожжи.
Тем не менее, уже теперь достигнуты определенные успехи с растительными объектами и по прогнозам ученых США к 2010 году ожидается прирост урожайности сельскохозяйственных культур примерно на 60-70% по сравнению с началом 80-х годов текущего столетия в основном на основе использования методов генетической инженерии, когда стал возможным перенос отдельных генов от одного растения другому (в противоположность естественному половому процессу, при котором происходит замена целых блоков сцепленных генов).
Протопласты (от греч. protos - первый, plastos - вылепленный, образованный) - это клетки, лишенные клеточных стенок, способные сохраняться и метаболизировать, равно как и реконструировать клеточную стенку в подходящих условиях.
Протопласты можно получать с помощью механических и биохимических (энзиматических) методов. В первых случаях добиваются плазмолиза растительных тканей, например, с помощью 0,1% раствора сахарозы с последующим разрезанием эпидермиса и освобождением протопластов в окружающую питательную среду.
Энзиматические методы по-разному эффективны в получении протопластов. Здесь необходимо подбирать ферменты для каждого вида растений, однако наиболее часто используют целлюлазы, пектиназы, гемицеллюлазы как индивидуально, так и в комбинациях. Например, для получения протопластов из листьев Nicotiana tabacum листовую ткань без эпидермиса погружают в смесь ферментов, включающую 0,5% пектиназы и 2% целлюлазы в 0,7 М растворе маннита или сорбита; для получения протопластов из листьев клевера и люцерны используют 2-5% смесь гликаназ с пептидазами, и т.д. [5]
В сравнительном плане более подходящим является энзиматический метод получения протопластов как более щадящий. Однако при любом способе важен подбор осмотического стабилизатора, без которого может наступить быстрый плазмоптиз протопластов (по лат. plasma - плазма, option - альтернатива). В качестве таких стабилизаторов могут быть применены растворы неорганических солей (СаСl 2 , КСl, NaHPO 4 ), органических гликолей (маннита, сорбита), моно- и дисахаридов (глюкозы, ксилозы, сахарозы) в ориентировочных концентрациях 0,3-0,8 М/л. Однако применительно к виду растения, из которого получают протопласты, необходимо подбирать индивидуальные условия для «протопластирования» (осмотический стабилизатор, рН среды). Эти требования сохраняются и в случаях получения протопластов из каллусных культур и клеточных суспензий.
В жизнеспособности выделенных протопластов большую роль играет физиологическая полноценность исходного растительного материала. Суспензионные культуры наиболее приемлемы для этих целей, будучи в конце логарифмической фазы роста (размножения).
Полученные тем или иным путем протопласты либо используют для регенерации растения, либо их можно подвергнуть слиянию с образованием гетерокариотических гибридов.
Из растений, относительно легко регенерирующих из протопластов, можно назвать картофель, люцерну, маниок, рапс, табак. Для получения растений - регенерантов, высаженных в грунт, требуется, как минимум, 16-18 недель.
Растения, полученные из протопластов, могут отличаться достаточно выраженной изменчивостью по ряду интересующих нас признаков: урожайности, величине (размеру), морфологии отдельных частей, фотопериодичности и др. Как правило, это связывают с изменением числа и перестройками хромосом. Поэтому протопласты растений представляют собой интересные объекты и для изучения процессов мутагенеза.
Гибридизация протопластов удается не только в тех случаях, когда исходные растения (источники клеток для протопластирования) способны гибридизоваться половым путем, но и тогда, когда заведомо известно, что клетки, подлежащие слиянию, относятся к организмам с половой несовместимостью. Тем не менее, во всех случаях соматической гибридизации один из партнеров должен нести какой-либо маркерный признак (биохимический или другой), по которому возможно подтвердить достоверность получения гибрида. В этом смысле удобны ауксотрофные мутанты.
Гетерокариотические соматические гибриды выделяют либо вручную с помощью микроманипулятора, капиллярной пипетки и шприца, либо автоматически на основе применения флуоресцентных систем.
Для биотехнологии также важна цибридизация, когда возникают гетерозиготы по внеядерным (цитоплазматическим) генам, определяющим, например, устойчивость к гербицидам или признак цитоплазматической мужской стерильности (рисунок).
К настоящему времени из ряда растительных протопластов получены их безъядерные фрагменты - микропласты, окруженные тонопластной мембраной и включающие часть внеядерного генетического материала. Используя приемы соматической гибридизации, микропласты можно сливать с реципиентными протопластами. [1]
Таким образом, микропласты являются резервным материалом для расширения возможностей клеточной инженерии в фитобиотехнологии. Более того, теперь удается гибридизация растительных протопластов с протопластами микроорганизмов и животными клетками.
Применительно к хромосомной инженерии удалось доказать проникновение изолированных метафазных хромосом в обработанные полиэтиленгликолем реципиентные протопласты таких однодольных растений, как пшеница и кукуруза.
Также открываются пути привнесения дополнительной генетической информации по желанию экспериментатора в целях создания трансгенных растений. Прямой перенос чужеродной ДНК в протопласты возможен также с помощью микроинъекции, трансформации, упаковки в липосомы с последующим их эндоцитозом растительными протопластами, и электропорации (высоковольтных электрических импульсов).
Проблема создания векторов для введения чужеродной ДНК в протопласты растений является наиболее сложной. Здесь наметились следующие подходы:
1) использование плазмид бактерий, заражающих растения в естественных условиях; при этом часть плазмиды встраивается в ядерный геном растения-хозяина и функционирует в составе его генома;
2) использование бактериальных плазмид, «сшитых» с фрагментами ДНК хлоропластов или митохондрий растений, для создания челночных векторов, способных к репликации в клетках прокариот и экспрессии в эукариотических клетках;
3) использование ДНК-содержащих вирусов растений; в такой системе ДНК функционирует автономно от генома растения-хозяина.
Для переноса чужеродной ДНК в растения наиболее широко используется агробактериальная трансформация с помощью бинарных плазмидных векторов.
Практикуются также методы переноса генов в растения путем электропорации, трансформации растительных протопластов чужеродной ДНК в присутствии полиэтиленгликоля, микроинъекцией ДНК, биологической бомбардировкой золотыми или вольфрамовыми частицами, покрытыми молекулами ДНК, введением плазмидной ДНК с помощью игольчатых кристаллов карбида или нитрида кремния и др.
Но все эти способы получения трансгенных растений так или иначе основаны на использовании селективных маркерных генов, которыми обычно служат бактериальные гены устойчивости к антибиотикам или гербицидам.
Иными словами, тот фрагмент ДНК, который исследователь вводит в геном трансформируемого растения, помимо нужного гена, содержит и маркерный ген.
Эти селективные маркерные гены нужны для того, чтобы в лаборатории в процессе регенерации отделить единичные трансформированные клетки от нетрансформированных (которых большинство) и дать первым преимущество при делении.
В результате трансгенное растение, полученное из таких трансформированных клеток, становится устойчивым к определенному антибиотику (чаще всего к канамицину) или к какому-нибудь гербициду вроде глифосата. При последующем выращивании трансгенных растений в полевых условиях появляется теоретическая возможность перемещения генов резистентности к гербициду в родственные сорняки или генов резистентности к антибиотику назад в бактерии почвы. Именно здесь и заключается определенная экологическая опасность ввиду вероятности появления, в частности, так называемых суперсорняков.
Однако в целом ряде работ было показано, что такое событие крайне маловероятно. Более того, выращивание так называемых транспластомных растений (на которых остановимся чуть ниже) сводит часть этих опасений к нулю, ввиду того, что пыльца у таких растений остается не трансгенной. [8]
К тому же процессы переноса генов, хотя и с чрезвычайно низкой частотой, но происходят в самой природе с помощью бактерии Agrobacterium tumefaciens , которую даже называют «природным генным инженером», и поэтому такие измененные самой Природой растения нас уже давно окружают.
Клеточная инженерия как совокупность методов, используемых для конструирования новых клеток, история ее развития. Методы выделения протопластов. Описание способов культивирования протопластов: метод жидких капель и платирования. Соматическая гибридизация. презентация [661,9 K], добавлен 28.02.2014
История развития Биотехнологии. Генетическая инженерия как важная составная часть биотехнологии. Осуществление манипуляций с генами и введение их в другие организмы. Основные задачи генной инженерии. Генная инженерия человека. Искусственная экспрессия. презентация [604,9 K], добавлен 19.04.2011
Понятие и сущность биотехнологии, история ее возникновения. Основные направления и методы биотехнологии. Генная и клеточная инженерия. "Три волны" в создании генно-модифицированных растений. Трансгенные животные. Методы иммобилизации ферментов и клеток. реферат [25,0 K], добавлен 11.01.2013
Влияние ферментов на возможность и скорость проведения различных манипуляций с ДНК. Общие свойства нуклеаз, их классификация и отличительные черты. Эндонуклеазы рестрикции, их роль в различении собственной ДНК от чужеродной. РНК-зависимые ДНК-полимеразы. контрольная работа [24,2 K], добавлен 27.07.2009
Выделение растительных протопластов Дж. Клеркером при изучении плазмолиза в клетках водного телореза (Stratiotes aloides) при механическом повреждении ткани. Общая процедура получения растительных протопластов. Культивирование растительных протопластов. презентация [529,5 K], добавлен 07.11.2016
Расщепление цепей ДНК эндонуклеазами рестрикции. Осуществление молекулярного клонирования ферментами ДНК-лигазы. Встраивание фрагмента ДНК в плазмидный вектор. Метод получения рекомбинантных плазмид. Основные этапы клонирования фрагментов чужеродной ДНК. презентация [242,3 K], добавлен 24.01.2016
Полиплоидия и отдаленная гибридизация растений, методы работы И.В. Мичурина. Общие принципы селекции животных и растений, типы скрещивания и методы разведения в животноводстве. Примеры создания высокопродуктивных пород домашних животных, гетерозис. реферат [20,6 K], добавлен 13.10.2009
Работы в архивах красиво оформлены согласно требованиям ВУЗов и содержат рисунки, диаграммы, формулы и т.д. PPT, PPTX и PDF-файлы представлены только в архивах. Рекомендуем скачать работу .

© 2000 — 2021



Перенос чужеродной ДНК в протопласты реферат. Биология и естествознание.
Диссертации О Методической Работе В Образовательных Учреждениях
Контрольная Работа 2 Класс Spotlight
Реферат: Приключения Чипполино
Эссе Чита
Реферат: Кодирование речи. Скачать бесплатно и без регистрации
Доклады На Тему Медицинская Сестра И Пациент
Адаптация На Рабочем Месте Реферат
Реферат по теме Фильтрация газов(баротермический эффект)
Реферат: Формирование имиджа марки
Контрольная Работа По Геометрии 11 Класс Решение
Как Писать Эссе По Философии Шаблон
Хорошие Дети Эссе
Доклад: Десять интересных фактов из истории Киево-Печерской Лавры
План Написания Итогового Сочинения По Русскому
Реферат: Минирование и подрывные работы. Скачать бесплатно и без регистрации
Доклад: Каббала
Доклад по теме Магнетроны и гиротроны
Реферат: Концепция человека в философии Сократа
Сочинение по теме Мастерство изображения мира человеческих чувств в одном из произведений русской литературы XIX века.
Курсовая работа по теме Транспортная система города Чикаго
Общие понятия об обмене веществ - Биология и естествознание презентация
Влияние биологически активных факторов окружающей среды на наследственные системы организма человека - Биология и естествознание курсовая работа
Многообразие видов на Земле. Функции живого вещества планеты - Биология и естествознание реферат