Методы Исследования Биосинтеза Нуклеиновых Кислот Реферат

Методы Исследования Биосинтеза Нуклеиновых Кислот Реферат



➡➡➡ ПОДРОБНЕЕ ЖМИТЕ ЗДЕСЬ!






























Методы Исследования Биосинтеза Нуклеиновых Кислот Реферат

Вы можете узнать стоимость помощи в написании студенческой работы.


Помощь в написании работы, которую точно примут!

Похожие работы на - Нуклеиновые кислоты

Скачать Скачать документ
Информация о работе Информация о работе


Скачать Скачать документ
Информация о работе Информация о работе


Скачать Скачать документ
Информация о работе Информация о работе


Скачать Скачать документ
Информация о работе Информация о работе


Скачать Скачать документ
Информация о работе Информация о работе


Скачать Скачать документ
Информация о работе Информация о работе


Скачать Скачать документ
Информация о работе Информация о работе

Нужна качественная работа без плагиата?

Не нашел материал для своей работы?


Поможем написать качественную работу Без плагиата!

1. Общие сведения о нуклеиновых кислотах и история их открытия


2. Нахождение нуклеиновых кислот в природе


1.
Общие сведения о нуклеиновых кислотах и история их открытия




Нуклеиновые кислоты, биополимеры, состоящие из остатков
фосфорной кислоты, сахаров и азотистых оснований (пуринов и пиримидинов).


Нуклеиновые кислоты играют главную роль в передаче
наследственных признаков (генетической информации) и управлении процессом
биосинтеза белка.


Открытие нуклеиновых кислот связано с именем молодого врача
из города Базеля (Швейцария) Фридриха Мишера. После окончания медицинского
факультета Мишер был послан для усовершенствования и работы над диссертацией в
Тюбинген (Германия) в физиолого-химическую лабораторию, возглавляемую Ф.
Гоппе-Зейлером. Тюбингенская лаборатория в то время была известна ученому миру.
Пройдя практику по органической химии, Мишер приступил к работе в биохимической
лаборатории. Ему было поручено заняться изучением химического состава гноя.
Молодой ученый не возражал против предложенной темы, так как считал лейкоциты,
присутствующие в гное, одними из самых простых клеток.


Путём многочисленных опытов он получил из гнойных клеток
вещество ядерного происхождения. Мишер был уверен именно в ядерном его
источнике. Поэтому он начал более тщательное выделение ядер. В то время еще
никто в биохимических лабораториях не пытался выделить ядра или какие-либо
другие субклеточные компоненты, так что и здесь он был пионером.


Продолжив дальше очищать ядро от других клеточных фрагментов,
он получил странное вещество. Оно не разлагалось протеолитическими ферментами,
значит, не являлось белком. Отсутствие растворимости в горячем спирте указывало
на то, что это вещество не являлось и фосфолипидом. По-видимому, оно относилось
к новому классу биохимических соединений.


Но Мишер с большой горячностью настаивал на точности своих
результатов и добивался разрешения опубликовать их в печати. Тогда Гоппе-Зейлер
решил проверить данные Мишера лично. Он и два его ассистента (одним из них был
русский химик Любавин) в течение года шаг за шагом прошли все этапы
аналитической работы Мишера и полностью подтвердили его данные, выделив нуклеин
из клеток крови и из дрожжей.


В 1871 г. работа Мишера вместе с подтверждающими ее
контрольными работами Гоппе-Зейлера и его ассистентов увидела свет. Существование
нуклеина как специфического ядерного вещества стало научным фактом. Вскоре
методика Мишера была применена для выделения нуклеина из различных тканей.


В 1879 немецкий химик К.А. Коссель открыл в нуклеине
соединение желтого цвета, которое оказалось гуанином, ранее выделенным из
перуанского гуано - помета птиц, ценного азотного удобрения. Впоследствии он же
выделил тимин клеток вилочковой железы, или тимуса, быка (отсюда название),
цитозин (от греч. cytos - клетка) и аденин (от греч. aden - железа). Русский
химик Ф. Левен установил, что, кроме тетрады аденин, гуанин, тимин и цитозин,
нуклеин содержит еще и фосфорную кислоту и сахар дезоксирибозу. Термин
"нуклеиновые кислоты" был предложен в 1889: нуклеиновыми они были
названы потому, что впервые были открыты в ядрах клеток, а кислотами - из-за
наличия в их составе остатков фосфорной кислоты. Позже было показано, что
нуклеиновые кислоты построены из большого числа нуклеотидов (от нескольких
десятков до сотен миллионов). В состав каждого нуклеотида входит азотистое
основание, углевод (пентоза) и фосфорная кислота.


Сам же термин "нуклеиновые кислоты" был предложен в
1889 году: нуклеиновыми они были названы потому, что впервые были открыты в
ядрах клеток, а кислотами - из-за наличия в их составе остатков фосфорной
кислоты. Позже было показано, что нуклеиновые кислоты построены из большого
числа нуклеотидов (от нескольких десятков до сотен миллионов). В состав каждого
нуклеотида входит азотистое основание, углевод (пентоза) и фосфорная кислота.


Впоследствии было установлено, что существует два типа
нуклеиновых кислот: рибонуклеиновая (РНК) и дезоксирибонуклеиновая (ДНК),
однако их функции долго оставались неизвестными.


В 1928 английский бактериолог Ф. Гриффит обнаружил, что
убитые патогенные пневмококки могут изменять генетические свойства живых
непатогенных пневмококков, превращая последние в патогенные. В 1945 микробиолог
О. Эвери из Рокфеллеровского института в Нью-Йорке сделал важное открытие: он
показал, что способность к генетической трансформации обусловлена переносом ДНК
из одной клетки в другую, а следовательно, генетический материал представляет
собой ДНК. В 1940-1950 Дж. Бидл и Э. Тейтум из Станфордского университета (шт.
Калифорния) обнаружили, что синтез белков, в частности ферментов,
контролируется специфическими генами. В 1942 Т. Касперсон в Швеции и Ж. Браше в
Бельгии открыли, что нуклеиновых кислот особенно много в клетках, активно
синтезирующих белки. Все эти данные наводили на мысль, что носителем
генетического материала являются нуклеиновые кислоты и что они каким-то образом
участвуют в синтезе белков. Однако в то время многие полагали, что молекулы
нуклеиновых кислот, несмотря на их большую длину, имеют слишком простую
периодически повторяющуюся структуру, чтобы нести достаточно информации и служить
основой генетической информации. Но в конце 1940-х годов Э. Чаргафф в США и Дж.
Уайатт в Канаде, используя метод распределительной хроматографии на бумаге,
показали, что структура ДНК не столь проста и эта молекула может служить
носителем генетического материала.


Структура ДНК была установлена в 1953 М. Уилкинсом, Дж.
Уотсоном и Ф. Криком в Англии. Это фундаментальное открытие позволило понять,
как происходит удвоение (репликация) нуклеиновых кислот. Вскоре после этого
американские исследователи А. Даунс и Дж. Гамов предположили, что структура
белков каким-то образом закодирована в нуклеиновых кислотах, а к 1965 эта
гипотеза была подтверждена многими исследователями: Ф. Криком в Англии, М.
Ниренбергом и С. Очоа в США, Х. Кораной в Индии. Все эти открытия, результат
столетнего изучения нуклеиновых кислот, произвели подлинную революцию в
биологии. Они позволили объяснить феномен жизни в рамках взаимодействия между
атомами и молекулами.


нуклеиновая кислота нуклеотид структура





Нуклеиновые кислоты в природе встречаются во всех живых
клетках. Живые клетки, за исключением сперматозоидов, в норме содержат
значительно больше рибонуклеиновой, чем дезоксирибонуклеиновой кислоты. На
методы выделения дезоксирибонуклеиновых кислот оказало большое влияние то
обстоятельство, что, тогда как рибонуклеопротеиды и рибонуклеиновые кислоты
растворимы в разбавленном (0,15 М) растворе хлористого натрия,
дезоксирибонуклеопротеидные комплексы фактически в нем нерастворимы.


Поэтому гомогенизированный орган или организм тщательно
промывают разбавленным солевым раствором, из остатка с помощью крепкого
солевого раствора экстрагируют дезоксирибонуклеиновую кислоту, которую осаждают
затем добавлением этанола.


В клетках эукариот (например, животных или растений) ДНК
находится в ядре клетки в составе хромосом, а также в некоторых клеточных
органоидах (митохондриях и пластидах). В клетках прокариотических организмов
(бактерий и архей) кольцевая или линейная молекула ДНК, так называемый
нуклеотид, прикреплена изнутри к клеточной мембране. У них и у низших эукариот
(например, дрожжей) встречаются также небольшие автономные, преимущественно
кольцевые молекулы ДНК, называемые плазмидами. Кроме того, одно - или
двухцепочечные молекулы ДНК могут образовывать геном ДНК-содержащих вирусов.


Нуклеиновые кислоты представляют собой биополимеры. Их
макромолекулы состоят из не однократно повторяющихся звеньев, которые
представлены нуклеотидами. И их логично назвали полинуклеотидами. Одной из
главных характеристик нуклеиновых кислот является их нуклеотидный состав. В
состав нуклеотида (структурного звена нуклеиновых кислот) входят три составные
части:


) Азотистое основание (нуклеиновое основание). Так в химии НК
называют входящие в их состав гетероциклические соединения, среди которых
различают структуры пиримидинового и пуринового рядов. В нуклеиновых кислотах
содержатся основания 4-х разных видов: два из них относятся к классу пуринов и
два - к классу пиримидинов. Азот, содержащийся в кольцах, придает молекулам
основные свойства. В качестве заместителей в гетероциклическом ядре они
содержат либо оксо - (урацил, тимин), либо аминогруппу (аденин), либо
одновременно обе эти группы (цитозин, гуанин). Для них принято буквенное
обозначение, составленное из первых букв их латинских названий.




НК различаются входящими в них гетероциклическими
основаниями: урацил входит только в РНК, а тимин - в ДНК.




) Моносахарид - D-рибоза или 2-дезокси-D-рибоза. Сахар,
входящий в состав нуклеотида, содержит пять углеродных атомов, т.е.
представляет собой пентозу. В зависимости от вида пентозы, присутствующей в
нуклеотиде, различают два вида нуклеиновых кислот - рибонуклеиновые кислоты
(РНК), которые содержат рибозу, и дезоксирибонуклеиновые кислоты (ДНК),
содержащие дезоксирибозу.




) Остаток фосфорной кислоты. Нуклеиновые кислоты являются
кислотами потому, что в их состав входит остаток фосфорной кислоты.


Нуклеозиды - это гетероциклические соединения,
образованные N-гликозидной связью между азотистым основанием и моносахаридом
(рибозой или дезоксирибозой)




В зависимости от природы углеводного остатка различают
рибонуклеозиды и дезоксирибонуклеозиды. Более часто употребляются названия,
производимые от тривиального названия соответствующего нуклеинового основания с
суффиксами - идин у пиримидиновых и - озин у пуриновых
нуклеозидов.




Являясь N-гликозидами, нуклеозиды устойчивы к гидролизу в
слабощелочной среде, но легко расщепляются в кислой. Пуриновые нуклеозиды
гидролизуются легко, пиримидиновые - труднее.


В клетках в свободном состоянии содержатся некоторые
нуклеозиды, не являющиеся компонентами нуклеиновых кислот. Эти нуклеозиды
обладают антибиотической активностью и приобретают все большее значение при
лечении злокачественных новообразований. Известно несколько десятков таких
нуклеозидов, выделенных из микроорганизмов, а также из растительных и животных
тканей.


Нуклеозиды-антибиотики отличаются от обычных нуклеозидов
некоторыми деталями строения либо углеводной части, либо гетероциклического
основания. По-видимому, это позволяет им выступать в роли антиметаболитов.
Нуклеозидные антибиотики пиримидинового ряда часто подобны цитидину, пуринового
ряда - аденозину.


Нуклеоти́ды - фосфорные эфиры
нуклеозидов, нуклеозидфосфаты.




В природе наиболее распространены нуклеотиды, являющиеся β-N-гликозидами пуринов или пиримидинов и пентоз - D-рибозы или
D-2-дезоксирибозы. В зависимости от структуры пентозы различают рибонуклеотиды
и дезоксирибонуклеотиды, которые являются мономерами молекул сложных
биологических полимеров (полинуклеотидов) - соответственно РНК или ДНК.




Таким образом, структура нуклеотида образована двумя связями:
N-гликозидной связью между азотистым основанием и моносахаридом (рибоза или
дезоксирибоза) и сложноэфирной связью между моносахаридом и остатком фосфорной
кислоты.




Для нуклеотидов используют два вида названий. Одно включает
наименование нуклеозида с указанием положения в нем фосфатного остатка,
например, аденозин-3'-фосфат, уридин-5'-фосфат; другое строится с добавлением
сочетания - иловая кислота к названию остатка пиримидинового основания,
например, 5'-уридиловая кислота, или пуринового основания, например
3'-адениловая кислота.


Используя принятый для нуклеозидов однобуквенный код,
5'-фосфаты записывают с добавлением латинской буквы "р" перед
символом нуклеозида, 3'-фосфаты - после символа нуклеозида. Аденозин-5'-фосфат
обозначается рА, аденозин-3'-фосфат - Ар и т.п. Эти сокращенные обозначения
используют для записи последовательности нуклеотидных остатков в нуклеиновых
кислотах.


По отношению к свободным нуклеотидам в биохимической
литературе широко используют их названия как монофосфатов с отражением этого
признака в сокращенном коде, например АМР (или АМФ) для аденозин-5'-фосфата и
т.д.




В полинуклеотидных цепях нуклеотидные звенья связаны через
фосфатную группу. Фосфатная группа образует две сложноэфирные связи: с С-3'
предыдущего и с С-5' последующего нуклеотидных звеньев. Каркас цепи состоит из
чередующихся пентозных и фосфатных остатков, а гетероциклические основания
являются "боковыми" группами, присоединенными к пентозным остаткам.
Нуклеотид со свободной 5'-ОН группой называют 5'-концевым, а нуклеотид со
свободной З'-ОН группой - З'-концевым.


На рисунке приведено строение произвольного участка цепи ДНК,
включающего четыре нуклеиновых основания. Легко представить, какое множество
сочетаний можно получить путем варьирования последовательности четырех
нуклеотидных остатков. Принцип построения цепи РНК такой же, как и у ДНК, с
двумя исключениями: пентозным остатком в РНК служит D-рибоза, а в наборе
гетероциклических оснований используется не тимин, а урацил.




Первичная структура нуклеиновых кислот определяется
последовательностью нуклеотидных звеньев, связанных ковалентными связями в
непрерывную цепь полинуклеотида.


Для удобства записи первичной структуры существует несколько
способов сокращений. Один из них заключается в использовании ранее приведенных
сокращенных названий нуклеозидов. Например, показанный на рисунке фрагмент цепи
ДНК может быть записан как d (ApCpGpTp.) или d (A-C-G-T.). Часто букву d
опускают, если очевидно, что речь идет о ДНК.


Важной характеристикой нуклеиновых кислот служит нуклеотидный
состав, т.е. набор и количественное отношение нуклеотидных компонентов.
Нуклеотидный состав устанавливают, как правило, путем исследования продуктов
гидролитического расщепления нуклеиновых кислот.


ДНК и РНК различаются поведением в условиях щелочного и
кислотного гидролиза. ДНК устойчивы к гидролизу в щелочной среде. РНК легко
гидролизуются в мягких условиях в щелочной среде до нуклеотидов, которые, в
свою очередь, способны в щелочной среде отщеплять остаток фосфорной кислоты с
образованием нуклеозидов. Нуклеозиды в кислой среде гидролизуются до
гетероциклических оснований и углеводов.




Структура двойной спирали ДНК была предложена Френсисом
Криком и Джеймсом Уотсоном в 1953 году на основании рентгеноструктурных данных,
полученных Морисом Уилкинсом и Розалинд Франклин, и "правил Чаргаффа”,
согласно которым в каждой молекуле ДНК соблюдаются строгие соотношения,
связывающие между собой количество азотистых оснований разных типов. К 1953
году было известно, что ДНК состоит из 4 нуклеотидов, а каждый из них - из
одного азотистого основания, 5-углеродного сахара дезоксирибозы и остатка
фосфорной кислоты. Не было понятно, как эти части соединяются в молекулы ДНК.
Позже предложенная Уотсоном и Криком модель строения ДНК была
доказана, а их работа отмечена Нобелевской премией по физиологии и медицине
1962 г.


Таким образом, двойная спираль правозакрученная,
полинуклеотидные цепи в ней антипараллельны, т.е. если одна из них ориентирована
в направлении 3'→5', то вторая - в направлении 5'→3'. Поэтому на
каждом из концов молекулы ДНК расположены 5'-конец одной цепи и 3'-конец другой
цепи.




Все основания цепей ДНК расположены внутри двойной спирали, а
пентозофосфатный остов - снаружи. Полинуклеотидные цепи удерживаются
относительно друг друга за счёт водородных связей между комплементарными
пуриновыми и пиримидиновыми азотистыми основаниями А и Т (две связи) и между G
и С (три связи). При таком сочетании каждая пара содержит по три кольца,
поэтому общий размер этих пар оснований одинаков по всей длине молекулы.
Водородные связи при других сочетаниях оснований в паре возможны, но они
значительно слабее. Последовательность нуклеотидов одной цепи полностью
комплементарна последовательности нуклеотидов второй цепи. Поэтому, согласно
правилу Чаргаффа (Эрвин Чаргафф в 1951 г. установил закономерности в
соотношении пуриновых и пиримидиновых оснований в молекуле ДНК), число
пуриновых оснований (А + G) равно числу пиримидиновых оснований (Т + С).


Комплементарые основания уложены в стопку в сердцевине
спирали. Между основаниями двухцепочечной молекулы в стопке возникают
гидрофобные взаимодействия, стабилизирующие двойную спираль.


Такая структура исключает контакт азотистых остатков с водой,
но стопка оснований не может быть абсолютно вертикальной. Пары оснований слегка
смещены относительно друг друга. В образованной структуре различают две
бороздки - большую, шириной 2,2 нм, и малую, шириной 1,2 нм. Азотистые
основания в области большой и малой бороздок взаимодействуют со специфическими
белками, участвующими в организации структуры хроматина.


Т.е. под вторичной структурой понимают пространственную
организацию полинуклеотидной цепи. Согласно модели Уотсона-Крика молекула ДНК
состоит из двух полинуклеотидных цепей, правозакрученных вокруг общей оси с
образованием двойной спирали. Пуриновые и пиримидиновые основания направлены
внутрь спирали. Между пуриновым основанием одной цепи и пиримидиновым
основанием другой цепи возникают водородные связи. Эти основания составляют
комплементарные пары.


Водородные связи образуются между аминогруппой одного
основания и карбонильной группой другого - NH. O=C-, а также между амидным и
иминным атомами азота - NH. N - Например, как показано ниже, между аденином и
тимином образуются две водородные связи, и эти основания составляют
комплементарную пару, т.е. аденину в одной цепи будет соответствовать тимин в
другой цепи. Другую пару комплементарных оснований составляют гуанин и цитозин,
между которыми возникают три водородные связи.




Водородные связи между комплементарными основаниями - один из
видов взаимодействий, стабилизирующих двойную спираль. Две цепи ДНК, образующие
двойную спираль, не идентичны, но комплементарны между собой. Это означает, что
первичная структура, т.е. нуклеотидная последовательность, одной цепи
предопределяет первичную структуру второй цепи.




. Важнейшая биологическая функция ДНК - генетическая, т.е.
ДНК является носителем генетической информации.


. ДНК способна передавать генетическую информацию в ряду
поколений посредством и-РНК.


. Регулирует процессы биосинтеза белка,


В клетках эукариот ДНК располагается главным образом в ядре в
виде набора хромосом. Бактериальная (прокариоты) ДНК обычно представлена одной
кольцевой молекулой ДНК, расположенной в неправильной формы образовании в
цитоплазме, называемым нуклеотидом. Генетическая информация генома состоит из
генов. Ген - единица передачи наследственной информации и участок ДНК, который
влияет на определённую характеристику организма. Ген содержит открытую рамку
считывания, которая транскрибируется, а также регуляторные последовательности,
например, промотор и энхансер, которые контролируют экспрессию открытых рамок
считывания.


Функции хранения и передачи информации обеспечиваются
биосинтезом белка, посредством и-РНК и т-РНК.


Существуют три типа РНК, каждый из которых выполняет свою
особую роль в синтезе белка.


. Матричная РНК переносит генетический код из
ядра в цитоплазму, определяя таким образом синтез разнообразных белков.


. Транспортная РНК переносит активированные
аминокислоты к рибосомам для синтеза полипептидных молекул.


. Рибосомная РНК в комплексе примерно с 75
разными белками формирует рибосомы - клеточные органеллы, на которых происходит
сборка полипептидных молекул.




Матричная РНК (информационная) представляет собой
длинную одноцепочечную молекулу, присутствующую в цитоплазме. Эта молекула РНК
содержит от нескольких сотен до нескольких тысяч нуклеотидов РНК, образующих
кодоны, строго комплементарные триплетам ДНК. Она переносит генетическую
информацию через мембрану ядра к месту синтеза белка на рибосоме. Переписывание
(перекодирование) информации с ДНК на РНК происходит посредством транскрипции.




Еще один тип РНК, играющий важнейшую роль в синтезе белка,
называют транспортной РНК , поскольку он транспортирует
аминокислоты к строящейся молекуле белка. Каждая транспортная РНК специфически
связывается только с одной из 20 аминокислот, составляющих белковые молекулы.
Транспортные РНК действуют как переносчики специфических аминокислот, доставляя
их к рибосомам, на которых происходит сборка полипептидных молекул. Каждая
специфическая транспортная РНК распознает "свой" кодон матричной РНК,
прикрепившейся к рибосоме, и доставляет соответствующую аминокислоту на
соответствующую позицию в синтезируемой полипептидной цепи. Цепь транспортной
РНК гораздо короче матричной РНК, содержит всего около 80 нуклеотидов и
упакована в форме клеверного листа. На одном конце транспортной РНК всегда
находится аденозинмонофосфат (АМФ), к которому через гидроксильную группу рибозы
прикрепляется транспортируемая аминокислота. Транспортные РНК служат для
прикрепления специфических аминокислот к строящейся полипептидной молекуле,
поэтому необходимо, чтобы каждая транспортная РНК обладала специфичностью и в
отношении соответствующих кодонов матричной РНК. Код, посредством которого
транспортная РНК распознает соответствующий кодон на матричной РНК, также
является триплетом и его называют антикодоном. Антикодон располагается примерно
посередине молекулы транспортной РНК. Во время синтеза белка азотистые
основания антикодона транспортной РНК прикрепляются с помощью водородных связей
к азотистым основаниям кодона матричной РНК. Таким образом, на матричной РНК
выстраиваются в определенном порядке одна за другой различные аминокислоты, формируя
соответствующую аминокислотную последовательность синтезируемого белка.


Рибосомные РНК содержат 3000-5000
нуклеотидов; молекулярная масса - 1 000 000-1 500 000. На долю рРНК приходится
80-85% от общего содержания РНК в клетке. В комплексе с рибосомными белками
рРНК образует рибосомы - органоиды, осуществляющие синтез белка. В
эукариотических клетках синтез рРНК происходит в ядрышках.


) необходимый структурный компонент рибосом и, таким образом,
обеспечение функционирования рибосом;


) обеспечение взаимодействия рибосомы и тРНК;


) первоначальное связывание рибосомы и кодона-инициатора иРНК
и определение рамки считывания,


) формирование активного центра рибосомы.





1.
Ленинджер А. Основы биохимии: Учебник. - М.: Мир, 1985.


.
Тюкавкина Н.А., Бауков Ю.И. Биоорганическая химия: Учебник. - М.: Медицина,
1991.


.
Остерман Л.А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. - М.: Наука,
1981.


.
Шабарова 3.А., Богданов А.А., Химия нуклеиновых кислот и их компонентов, М.,
1978.


.
Зенгер В. Принципы структурной организации нуклеиновых кислот. М., 1987.


6. Сайт: http://ru.
wikipedia.org/wiki/%C2%F2%EE%F0%E8%F7%ED%E0%FF_%F1%F2%F0%F3%EA%F2%F3%F0%E0


. Сайт: http://slovari.
yandex.ru/нуклеиновые%20кислоты/БСЭ/Нуклеиновые%20кислоты/






Нуклеиновые кислоты . Реферат . Биология. 2014-11-26
Методы изучения нуклеиновых кислот
Реферат по химии на тему " Нуклеиновые кислоты "
Реферат : Нуклеиновые кислоты - BestReferat.ru
Биосинтез нуклеиновых кислот
А Маркуша Ненаписанное Сочинение Краткое Содержание
Книга Сочинение Примеры Из Литературы
Контрольная Работа По Стихотворениям М Ю Лермонтова
Внешние Функции Государства Курсовая Работа
Как Можно Закончить Итоговое Сочинение