Метамфетамин бесплатные пробы Хайдарабад

• • • • • • • • • • • • • • • • •

• • • • • • • • • • • • • • • • •

Гарантии ❗ Качество ❗ Отзывы покупателей ❗

• • • • • • • • • • • • • • • • •

👇 👇 👇 👇 👇 👇 👇 👇 👇 👇 👇 👇

Наши контакты:

▶️▶️▶️ (НАПИСАТЬ ОПЕРАТОРУ В ТЕЛЕГРАМ)️ ◀️◀️◀️

👆 👆 👆 👆 👆 👆 👆 👆 👆 👆 👆 👆

• • • • • • • • • • • • • • • • •

🚩 ИСПОЛЬЗУЙТЕ ВПН (VPN), ЕСЛИ ССЫЛКА НЕ ОТКРЫВАЕТСЯ!

🚩 В Телеграм переходить только по ссылке что выше! В поиске тг фейки!

• • • • • • • • • • • • • • • • •

Метамфетамин бесплатные пробы Хайдарабад

Диабетическая ретинопатия является одной из ведущих причин слепоты. Гистология, анализ разрушения барьера сетчатки крови и флуоресцентная ангиография являются ценными методами для понимания патофизиологии сетчатки, что может еще больше повысить эффективность скрининга лекарств против диабетической ретинопатии. Заболевание заднего сегмента глаз, такое как диабетическая ретинопатия, изменяет физиологию сетчатки. Диабетическая ретинопатия характеризуется отслоением сетчатки, нарушением гемато-ретинального барьера BRB и ангиогенезом сетчатки. Модель крысы in vivo является ценным экспериментальным инструментом для изучения изменений в структуре и функции сетчатки. Мы предлагаем три различных экспериментальных метода в модели крыс для выявления морфологических изменений клеток сетчатки, сосудистой системы сетчатки и скомпрометированного BRB. Гистология сетчатки используется для изучения морфологии различных клеток сетчатки. Кроме того, количественное измерение выполняется путем подсчета клеток сетчатки и измерения толщины различных слоев сетчатки. Анализ распада BRB используется для определения утечки экстраокулярных белков из плазмы в стекловидное тело из-за распада BRB. Флуоресцентная ангиография используется для изучения ангиогенеза и утечки кровеносных сосудов путем визуализации сосудистой системы сетчатки с использованием красителя FITC-декстран. Диабетическая ретинопатия ДР является одним из самых сложных вторичных осложнений сахарного диабета. Это также является основной причиной предотвратимой слепоты среди населения трудоспособного возраста во всем мире. Диабетическая ретинопатия диагностируется сосудистыми аномалиями в задних глазных тканях. Гипергликемия считается мощным регулятором ДР, поскольку она включает в себя несколько путей, участвующих в нейродегенерации4,5, воспалении6,7 и микроциркуляторном русле8 в сетчатке. Множественные метаболические осложнения, вызванные гипергликемией, включают накопление конечных продуктов гликирования AGE , полиольного пути, гексозаминового пути и пути протеинкиназы-С. Эти пути отвечают за пролиферацию клеток эндотелиальные клетки , миграцию перициты и апоптоз нервные клетки сетчатки, перициты и эндотелиальные клетки на основе различных стадий диабетической ретинопатии. Эти метаболические изменения могут привести к физиологическим изменениям, таким как отслоение сетчатки, потеря клеток сетчатки, разрушение гематоэнцефалического барьера BRB , аневризмы и ангиогенез9. Стрептозотоцин СТЗ , индуцированный диабетом 1 типа, является хорошо зарекомендовавшей себя и общепринятой практикой у крыс для оценки патогенеза диабета и его осложнений. В результате животные будут подвергаться дефициту инсулина, гипергликемии, полидипсии и полиурии, все из которых характерны для сахарного диабета 1 типа Чтобы понять физиологические изменения сетчатки из-за нейродегенерации, воспаления и ангиогенеза, различные методы должны быть оптимизированы на экспериментальных моделях животных. Структурные и функциональные изменения в клетках сетчатки и сосудах сетчатки могут быть изучены различными методами, такими как гистология, анализ распада BRB и флуоресцентная ангиография. Гистология предполагает изучение анатомии клеток, тканей и органов на микроскопическом уровне. Выполняется несколько этапов для визуализации и идентификации микроскопических изменений в структуре тканей, тем самым сравнивая здоровых и больных аналогов Следовательно, важно тщательно стандартизировать каждый шаг гистологии. Различные этапы, связанные с гистологией сетчатки, включают фиксацию образца, обрезку образца, обезвоживание, очистку, пропитку парафином, встраивание парафина, сечение и окрашивание окрашивание гематоксилином и эозином 13, В здоровой сетчатке транспорт молекул через сетчатку контролируется BRB, состоящим из эндотелиальных клеток и перицитов на внутренней стороне и пигментных эпителиальных клеток сетчатки на внешней стороне. Тем не менее, внутренние эндотелиальные клетки BRB и перициты начинают дегенерировать во время болезненного состояния, и BRB также скомпрометирован Из-за этого распада BRB многие низкомолекулярные молекулы просачиваются в стекловидное тело и ткань сетчатки По мере прогрессирования заболевания многие другие белковые молекулы с низкой и высокой молекулярной массой также просачиваются в стекловидное тело и ткань сетчатки из-за нарушения гомеостаза Это приводит к различным другим осложнениям и, в конечном счете, к макулярному отеку и слепоте. Следовательно, количественная оценка уровня белка в стекловидном теле и сравнение здоровых и диабетических состояний измеряет скомпрометированный BRB. Флуоресцентная ангиография — это методика, используемая для изучения кровообращения сетчатки и сосудистой оболочки с использованием флуоресцентного красителя. Он используется для визуализации сосудистой системы сетчатки и сосудистой оболочки путем введения флуоресцеинового красителя внутривенным путем или сердечной инъекцией Как только краситель вводится, он сначала достигает артерий сетчатки, а затем вен сетчатки. Эта циркуляция красителя обычно завершается в течение мин после инъекции красителя Это важный метод диагностики различных заболеваний заднего сегмента глаз, включая диабетическую ретинопатию и хориоидальную неоваскуляризацию Он помогает обнаружить большие и незначительные изменения сосудистой системы в нормальных и больных условиях. Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian. Этот протокол следует всем руководящим принципам ухода за животными, предоставленным Институциональным комитетом по этике животных, BITS-Pilani, кампус Хайдарабада. Таблица 1. Процедура окрашивания гематоксилина и эозина. Гистология сетчатки В диабетической сетчатке клетки сетчатки подвергаются дегенерации. Кроме того, толщина слоев сетчатки увеличивается из-за отеков Изображения, полученные после окрашивания гематоксилином и эозином, могут быть использованы для подсчета клеток и измерения толщины различных слоев, как показано на рисунке 2 с использованием ImageJ. Анализ разрушения барьера сетчатки крови Поскольку BRB скомпрометирован у крыс с диабетом, утечка становится заметной, что приводит к накоплению биомолекул из плазмы в сетчатку и стекловидное тело. У крыс с диабетом утечка белка из плазмы в стекловидное тело примерно в три раза выше по сравнению со здоровыми крысами рисунок 3. Белок может быть оценен с использованием любого метода набора, такого как метод Лоури, метод бицинхониновой кислоты BCA или метод Брэдфорда упомянутый в этой статье, раздел 2. Рекомендуется свежее рассечение глаза, так как задержка в обработке может привести к сильной спайке стекловидного тела со сетчаткой, что затруднит отделение. Неправильное отделение стекловидного тела от сетчатки может привести к ложноположительным результатам. Флуоресцентная ангиография Этот метод используется для визуализации утечки сетчатки и сосудистой системы, включая микро- и макро-сосудистую систему. Подбор размера FITC-декстрана основывается на его применении для различных исследований. Низкомолекулярный FITC-декстран, в пределах кДа, используется для визуализации утечки в сосудистой системе. Напротив, высокомолекулярные молекулы FITC-декстрана, в диапазоне от 70 кДа до 2 миллионов Da, используются для визуализации ангиогенеза. Успешная инъекция красителя приводит к визуализации всей сосудистой системы плоского крепления сетчатки, как показано на рисунке 4. Полученные изображения после конфокальной микроскопии могут быть использованы для определения площади сосудистой системы, занятой во всей сетчатке, с помощью программного обеспечения ImageJ для сравнения здоровых и больных групп. Рисунок 1. Подготовка к плоскому креплению сетчатки. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка. Рисунок 2. Гистологические изображения здоровой и диабетической сетчатки. Общая толщина сетчатки и каждого слоя увеличивается при диабетических состояниях С. Рисунок 3. Разрушение гемато-ретинального барьера у здоровых и диабетических крыс. График представляет соотношение белка стекловидной плазмы здоровых и диабетических крыс. Рисунок 4. Флуоресцентная ангиография сосудистой системы сетчатки. A и B представляют собой плоское крепление сетчатки, визуализированное сканированием плитки и сшиванием изображений под 10x. A представляет контрольную сетчатку, B представляет диабетическую сетчатку. Белая стрелка указывает на утечку. Все изображения были получены с помощью Z-стека толщина 5 мкм. Шкалы в A и B составляют 0,5 мм. Гистология Гистология сетчатки проводится для визуализации морфологических изменений клеток и слоев сетчатки. Необходимо оптимизировать различные этапы, включая выбор фиксирующего раствора, продолжительность фиксации, обезвоживание и пропитку парафином. Размер ткани не должен превышать 3 мм, так как фиксирующее проникновение становится медленным. Высокая осмолярность раствора приводит к сокращению объема и приводит к усадке тканей. Другим выбором фиксирующего раствора является уксусная кислота и этанол с формальдегидом. Кислотное состояние фиксирующего раствора может помочь в быстрой фиксации тканей, в то время как этанол улучшает проникновение фиксирующего раствора. Однако оптимизация соотношения этанола и уксусной кислоты имеет важное значение, поскольку избыточная концентрация может привести к усадке или отеку ткани, соответственно Параметры оценки для успешной фиксации тканей включают отслоение сетчатки, неповрежденные слои сетчатки и усадку тканей. Другим критическим фактором при выполнении фиксации является объем фиксирующего раствора, который должен быть как минимум в раз больше размера глаза для правильной фиксации Кроме того, важно закручивать глазное яблоко или ткань при переносе из одного раствора в другой, чтобы оно не прилипало к дну или стенкам контейнера. Неполная обработка тканей, включая обезвоживание и пропитку парафином, может сжиматься и сушить ткань, что можно визуализировать, когда депрессия возникает на поверхности блока. Кроме того, плохая обработка тканей также приведет к окрашиванию участков в белый цвет при воздействии воды Повторите шаги от 1,3 до 1,4, чтобы успешно подготовить парафиновые блоки. При приготовлении парафиновых блоков важно убедиться, что ткань со всех сторон окружена парафином и не видно пузырьков воздуха. Любая ошибка в приготовлении блока приведет к неудачному срезанию ткани. Иногда задняя чашечка складывается во время обработки; в этот момент его можно аккуратно раздвинуть с помощью щипцов в нагретом парафине , но не в той степени, в которой он повреждает ткань. Предположим, что ориентация ткани в стальной форме не такая желательная, пока парафин начинает затвердевать; в этом случае его можно поместить обратно в расплавленный парафин и ткань для повторной ориентации ткани для приготовления парафиновых блоков. Кроме того, при переносе ткани во встраиваемую форму убедитесь, что парафин вокруг ткани не затвердевает. Он создает разделение волосяного покрова между тканью и встраивающей средой парафином в блок Если это произойдет, расплавите парафин вокруг ткани, поместив его в горячий парафин и снова поместив в стальную форму. Во время разрезания лезвие должно быть достаточно острым, чтобы дать развернутые ленты ткани. Не используйте определенную часть лезвия более 30 раз. Если блок не срезается должным образом, предположим, что лезвие тупое и, следовательно, замените его или повторно заточите. Если секции не являются правильными, это также может быть связано с неправильной пропиткой парафина или использованием старого парафина для пропитки и приготовления блоков. Парафин в блоке можно расплавить, а свежий парафин можно использовать для приготовления блока. Чтобы избежать неровных участков, медленно вращайте колесо микротома с ровными поворотами, а не быстрыми, отрывистыми движениями. При выполнении окрашивания гематоксилином и эозином оптимизация времени окрашивания гематоксилина и эозина имеет решающее значение, поскольку это может привести к недостаточному или чрезмерному окрашиванию тканей. Неправильное расплавление парафина или регидратация ткани приведет к неравномерному окрашиванию. Его можно визуализировать как белые участки на слайде. Обезвоживают ткань и снова расплавляют парафин в печи с горячим воздухом, следуя шагам, указанным в таблице 1. Чрезмерное употребление алкоголя может привести к недостаточному окрашиванию цитоплазмы и включению тел, что может привести к плохо окрашенным участкам Использование монтажной среды следует делать сразу после удаления избытка ксилола и избегать высыхания ксилола, так как это может привести к искажению ткани. Кроме того, следует избегать монтирования на водной основе например, глицерина в PBS , поскольку ткань находится в обезвоженном состоянии. Монтажник на водной основе не проникает в ткани и приводит к туманным изображениям. После оптимизации всех шагов, упомянутых выше, исследователи смогут успешно выполнить гистологию. Требуется около трех попыток выбрать желаемое фиксирующее решение и оптимизировать другие параметры процесса. Разрушение гемато-ретинального барьера Самым деликатным шагом в этой технике является изоляция стекловидного тела от глаза. Лучше всего его выполнять на свежем глазу. Использование сухого льда рекомендуется для легкой изоляции стекловидного тела, особенно если стекловидное тело остается прикрепленным к сетчатке. Часто смесь хрусталика или сетчатки со стекловидным телом может быть идентифицирована по мутности стекловидного тела из-за сетчатки. Этих проблем обычно можно избежать, используя условия замерзания. Однако, если стекловидные метки находятся рядом с линзой, их можно разделить, разрезав на пересечении хрусталика и стекловидного тела с помощью микроножек. Если сетчатка вытягивается вместе со стекловидным телом, сетчатку можно удалить по частям с помощью микрощипцов. Использование фильтрующей центрифугации также предлагается для легкой изоляции стекловидного тела от хрусталика и сетчатки Поскольку стекловидное тело представляет собой гелеобразную структуру, оно нуждается в гомогенизации для однородной смеси белков. Обычно, как упоминалось на этапе 2. Если после центрифугирования наблюдается гелевая природа стекловидного тела, повторяют гомогенизацию этап 2. Флуоресцентная ангиография Этот метод направлен на визуализацию сосудистой сети сетчатки, и, следовательно, краситель должен равномерно достигать микрососудов сетчатки. Для обеспечения этого могут быть оптимизированы различные этапы, такие как место инъекции и время циркуляции. Краситель может быть введен с помощью инъекции в хвостовую вену или сердечной инъекции. Сердечная инъекция рискует ввести краситель в место, отличное от сердца, если оно плохо обучено; поэтому предпочтительна инъекция в хвостовую вену. Этанол помогает расширить кровеносные сосуды, что может помочь в доступе к расположению вены. Также важно, чтобы краситель вводился только в вену. Неспособность ввести краситель в хвостовую вену может ощущаться сопротивлением при инъекции красителя или выпуклости близлежащей области из-за подкожной инъекции. Игла может быть удалена и повторно вставлена в другой участок хвоста. Успешная инъекция хвостовой вены также может быть визуализирована принудительным мочеиспусканием крысы; цвет красителя виден в моче крыс в течение 30 - 40 с. Кроме того, время циркуляции имеет важное значение; обычно для успешного циркуляции красителя в сосудах сетчатки достаточно от 5 до 10 минут. Плоское крепление может быть приготовлено свежим глазом или фиксированным глазом. Подготовка плоского крепления на свежем глазу может быть сложной задачей, но после освоения техника является наиболее предпочтительной, так как во время фиксации краситель начинает просачиваться в фиксирующий раствор Поэтому фиксация не должна затягиваться более чем на 30 мин для всего глаза. Часто видно, что краситель просачивается из кровеносных сосудов в окружающие ткани, даже в здоровую сетчатку. Это может быть связано с избыточной фиксацией; следовательно, время, необходимое для фиксации, должно быть оптимизировано. Это только усиливает легкую изоляцию сетчатки и сохраняет структуру для будущего использования. Более того, повышенное время циркуляции красителя у животного также может привести к утечке красителя из сосудов сетчатки в окружающие ткани, что необходимо оптимизировать. Размер FITC-декстрана имеет важное значение, так как краситель с более высокой молекулярной массой не будет попадать в микро-сосуды. Напротив, краситель с более низкой молекулярной массой будет просачиваться из новых сосудов здоровой сетчатки Поэтому FITC-декстран с молекулярной массой 70 кД предпочтительнее для выполнения флуоресцентной ангиографии, для визуализации утечки и сосудистой системы в сетчатке. Однако существенным ограничением этого метода является продолжительность развития неоваскуляризации у крыс с диабетом и инвазивная процедура исследования, которая может быть заменена в будущем неинвазивными методами, такими как электроретинограмма, глазное дно и другие неинвазивные оптические инструменты. Мы также хотели бы поблагодарить Университетский грант Комиссии за предоставление младшей исследовательской стипендии Манише Малани и Центральному аналитическому лабораторному центру, BITS-Pilani, кампус Хайдарабада для предоставления инфраструктурного объекта. Malani, M. Retinal Pathophysiological Evaluation in a Rat Model. To learn more about our GDPR policies click here. If you want more info regarding data storage, please contact gdpr jove. You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions jove. Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login. You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free. To get started, a verification email has been sent to email institution. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your 'Spam' folder. Your access has now expired. Provide feedback to your librarian. If you have any questions, please do not hesitate to reach out to our customer success team. Login processing JoVE Journal Medicine. Отсутствие обнаруживаемого сердцебиения подтверждает смерть в течение мин. Энуклеат глаза, делая разрезы с помощью лезвия скальпеля на носовой и височной областях глаза. Затем разрезайте по краям с помощью щипцов и микроножек, чтобы удалить глаз из орбитальной лунки. Он также может вызвать рак, поскольку является мощным сенсибилизатором кожи. Наденьте перчатки и держите их под капотом Тщательно промойте глаза 10 мл фосфатно-буферного физиологического раствора PBS в чашке Петри для удаления крови. Удалите лишний жир, окружающий глаз, для легкого проникновения фиксирующего раствора. Сразу поместите глаз в 5 мл фиксирующего раствора с помощью щипцов, и убедитесь, что он не приклеен к стенкам стеклянных флаконов. Осторожно перемешайте в течение нескольких секунд и замените колпачок правильной маркировкой. Инкубировать глаз в фиксаторном растворе в течение 24 - 48 ч в темных условиях при комнатной температуре. Используя микрощипцы, удерживайте глаз зрительным нервом и сделайте кольцу на pars plana с помощью микроножек. Прорежьте весь край роговицы, чтобы отделить переднюю чашечку глаза. Используя щипцы, аккуратно подберите хрусталик, выбросьте его и перережьте зрительный нерв. С помощью изогнутых микроножек сделайте продольный участок задней глазницы, пройдя через оптический диск, разделив его на две половины. Поместите его в основание кассеты и плотно закройте крышку должным образом без какого-либо нарушения ткани. Пометьте кассеты именем и датой образца ткани. При переносе кассет из одной концентрации в другую обязательно нанесите их на чистую папиросную бумагу, чтобы свести к минимуму загрязнение. Общее время, затрачиваемое на этот этап, составляет примерно 4 часа. При обезвоживании переложите кассеты в 80 мл ксилола в течение 30 мин дважды , чтобы заменить этанол ксилолом. Он раздражает глаза и слизистую оболочку, а также может вызывать депрессии. Встраивание парафина Включите машину для встраивания парафина не менее чем за 1 ч до использования, чтобы расплавить парафин и чтобы станции достигли желаемых температур. Заполните стальную форму расплавленным парафиновым воском, поместив его на горячую поверхность, затем извлеките по одной кассете за раз из контейнера с парафином. В этот момент воск в форме начнет затвердевать. Прежде чем он полностью затвердеет, поместите ткань в воск с помощью щипцов и сориентируйте ткань так, чтобы часть диска зрительного нерва задней чашки была обращена к основанию формы. Если нет, поместите форму обратно на теплую рабочую поверхность до тех пор, пока весь парафин не разжижится, затем начните снова с шага 1. Как только воск в форме начнет затвердевать, немедленно поместите основание кассеты поверх формы. Пока он не затвердеет, повторите процесс с другими кассетами из шага 1. Как только все формы затвердеют, отделите стальную форму от кассеты. Если это трудно, подождите немного дольше и повторите попытку не удаляйте его с силой. Сепарация становится легче после полного затвердевания. Теперь кассета становится основанием парафинового блока, который будет удерживаться во время секционирования микротомом. На этом этапе процесс может быть остановлен и продолжен позже при необходимости. Секционирование Установите одноразовое микротомовое лезвие в держатель лезвия. Удалите лишний парафиновый воск вокруг кассет, чтобы верхняя и нижняя части блоков оставались параллельны ножу. Установите блок на держатель кассеты. Разблокируйте ручное колесо, чтобы продвинуть его до тех пор, пока поверхность блока не соприкоснется с лезвием ножа. Обрежьте избыток парафинового воска на блоке до тех пор, пока ткань не будет визуализирована на поверхности блока. Установите толщину сечения на 5 мкм и перережьте ленту из пяти-шести секций. Соберите секции на стеклянной горке, покрытой альбумином Майера, удерживая слайд под секцией. На этом этапе процесс может быть остановлен и продолжен позже. Сообщалось, что они являются канцерогенными. Процедура окрашивания гематоксилина и эозина 2. Подтвердите состояние анестетика с помощью рефлекса снятия педали защемление пальца ноги. Немедленно соберите 1 мл крови путем пункции сердца в трубку, покрытую этилендиаминтетрауксусной кислотой ЭДТА , чтобы отделить плазму от цельной крови. Энуклеарьте глаз и сразу же поместите его на сухой лед. Поместите глаз в чистую чашку Петри над сухим льдом рекомендуется и начните рассекать глаз, как указано в шаге 1. Снимите хрусталик, осторожно вытяните стекловидное тело из задней чашки с помощью микрощипцов и поместите его в гомогенизационную трубку, содержащую три-четыре стеклянных шарика мм. Подготовка образцов Гомогенизировать стекловидное тело в гомогенизаторе бисера на средней скорости в течение 10 с. Однако в случае неравномерной консистенции стекловидного тела повторить с этапа 2. Соберите супернатант из обоих образцов и разбавьте стекловидное тело и образцы плазмы в соотношении и соответственно с помощью PBS. Количественная оценка белка и соотношение белка стекловидного тела и плазмы Чтобы количественно оценить концентрацию белка в образцах стекловидного тела и плазмы, добавьте 5 мкл разбавленных образцов к мкл реагента Брэдфорда, хорошо перемешайте и прочитайте абсорбцию при нм в течение 40 мин. Нормализуйте уровень белка стекловидного тела до уровня белка плазмы у той же крысы и измерьте разницу в складках между здоровыми и диабетическими крысами. Найдите боковую вену хвоста и отметьте положение инъекции в нижней части хвоста. Тем не менее, рекомендуется вводить один раз, так как повторное покалывание может привести к развитию стресса у крысы, что может вызвать сужение сосудов. Энуклеат глаза, как указано в шаге 1. Подготовка плоского крепления Для подготовки плоских креплений держите инструменты для рассечения наготове вместе с направляющими и крышками. Поместите глаз в чашку Петри, наполненную охлажденным PBS, и начните рассекать глаз, как описано в шаге 1. Теперь поместите кончик заостренного щипца между склерой и сетчаткой. Осторожно переместите его по всему краю чашки, убедившись, что сетчатка не прикреплена к склере в любой точке. Если есть какие-либо препятствия, медленно отрежьте эту часть вдоль обода с помощью изогнутых микроножек. Как только подтвердится, что сетчатка не прикреплена к склере с какой-либо стороны, разрезают возле диска зрительного нерва, сделав небольшое отверстие таким, что сетчатка полностью отделяется от склеры. Медленно протолкните сетчатку в раствор PBS и поместите ее на чистый плоский слайд с помощью шпателя или щипцов. С помощью микроножек или лезвий скальпеля сделайте незначительные надрезы в ткани сетчатки, разделив ее на четыре квадранта. Убедитесь, что разрезы находятся на расстоянии не менее 2 мм от отверстия, оставленного оптическим диском в центре, как показано на рисунке 1. Удалите излишки PBS с боков ткани с помощью наконечников 0,2 мл, не нарушая плоское крепление. Поместите каплю антивядающей монтажной среды от 50 мкл до мкл на плоское крепление, накройте крышкой и визуализируйте сразу под конфокальным микроскопом. Визуализация плоского крепления Визуализируйте плоское крепление под кратным объективом конфокального микроскопа. Выполните сканирование плиток, чтобы захватить все плоское крепление в виде одного образа. Количество плиток зависит от размера плоского крепления сетчатки. Также выполняют Z-укладку для визуализации вен и артерий в разных очагах предпочтительный размер для Z-стека составляет 5 мкм, в зависимости от которого, количество шагов Z-стека варьируется. Выберите диапазон излучения от до нм для красителя FITC-dextran. Play Video. Cite this Article Malani, M. Before you can use the favorites feature you must sign in or create an account. Continue with Shibboleth or Forgot Password? Please enter your email address so we may send you a link to reset your password. You might already have access to this content! Please enter your Institution or Company email below to check. Please enter an institutional email address. Check access. Create Account. Forgot Password? Reset Password. Phone number. Request trial. Thank You! A JoVE representative will be in touch with you shortly. Waiting for verification email? Please click here to activate your free 2-hour trial. If you do not wish to begin your trial now, you can log back into JoVE at any time to begin. Enable Javascript for audio controls. Get cutting-edge science videos from J o VE sent straight to your inbox every month. We use cookies to enhance your experience on our website. Continue Learn more Close. To prepare albumin coated slides. Glycerol and egg albumin is mixed in ratio to coat on slides.

Мефедрон Омская область купить