Меф Ск бесплатные пробы Бангалор

• • • • • • • • • • • • • • • • •

• • • • • • • • • • • • • • • • •

Гарантии ❗ Качество ❗ Отзывы покупателей ❗

• • • • • • • • • • • • • • • • •

👇 👇 👇 👇 👇 👇 👇 👇 👇 👇 👇 👇

Наши контакты:

▶️▶️▶️ (НАПИСАТЬ ОПЕРАТОРУ В ТЕЛЕГРАМ)️ ◀️◀️◀️

👆 👆 👆 👆 👆 👆 👆 👆 👆 👆 👆 👆

• • • • • • • • • • • • • • • • •

🚩 ИСПОЛЬЗУЙТЕ ВПН (VPN), ЕСЛИ ССЫЛКА НЕ ОТКРЫВАЕТСЯ!

🚩 В Телеграм переходить только по ссылке что выше! В поиске тг фейки!

• • • • • • • • • • • • • • • • •

Меф Ск бесплатные пробы Бангалор

Данный протокол описывает использование флуоресцентно-активированной сортировки мезенхимальных стволовых клеток человека методом одноклеточной сортировки. Мезенхимальные стволовые клетки МСК организма обладают необычайной способностью дифференцироваться в несколько линий взрослых клеток в организме и известны своими иммуномодулирующими и противовоспалительными свойствами. Использование этих стволовых клеток является благом для области регенеративной биологии, но в то же время проклятием для регенеративной медицины и терапии из-за многочисленных клеточных двусмысленностей, связанных с ними. Эти неясности могут возникать из-за разнообразия в источнике этих стволовых клеток и условий их роста in vitro , что отражается на их функциональной гетерогенности. Это обуславливает необходимость разработки методик получения очищенных, однородных популяций МСК для терапевтического применения. Достижения в области проточной цитометрии позволили обнаружить популяции одиночных клеток с использованием многопараметрического подхода. В этом протоколе описывается способ идентификации и очистки стволовых клеток отслоившихся молочных зубов человека SHED с помощью флуоресцентной сортировки отдельных клеток. Тем не менее, наблюдалось значительное снижение процентного соотношения четырехкратных экспрессоров этих положительных маркеров, начиная с пассажа 7 и далее. Иммунофенотипированные субпопуляции сортировали с использованием режима одноклеточной сортировки, где только два положительных и один отрицательный маркер составляли критерии включения. Эта методология обеспечивала жизнеспособность клеток отсортированных популяций и поддерживала пролиферацию клеток после сортировки. Нисходящее приложение для такой сортировки может быть использовано для оценки линейно-специфической дифференциации для закрытых субпопуляций. Этот подход может быть применен к другим одноклеточным системам для улучшения условий изоляции и получения информации о множественных маркерах клеточной поверхности. Мезенхимальные стволовые клетки МСК можно рассматривать как масштабируемый источник клеток, пригодных для клеточной терапии, и можно считать золотым стандартом системы в регенеративной медицине. Эти клетки могут быть выделены из различных источников в организме с различным тканевым происхождением 1. В зависимости от исходной ткани каждый тип МСК демонстрирует неоднозначное поведение in vitro 2. Это хорошо видно по их морфологическим и функциональным свойствам 3. Многочисленные исследования показали внутриклональную изменчивость размеров, включая дифференцировку тканей взрослого человека, состояние генома, метаболическую и клеточную архитектуру МСК 2,4. Иммунофенотипирование клеток является распространенным применением проточной цитометрии для идентификации стволовых клеток, и это было использовано Международным обществом клеточной и генной терапии ISCT в году для назначения списка минимальных критериев для идентификации клеток как МСК. Несмотря на то, что МСК определялись набором биомаркеров в соответствии с минимальными критериями ISCT, их иммунные свойства не могли быть сопоставлены с этими биомаркерами, и возникла необходимость в большем, чем эти критерии, чтобы облегчить количественную оценку перекрестных сравнений и клональных вариаций. Несмотря на руководящие принципы, установленные ISCT, обширные исследования МСК показали, что в этой популяции существует гетерогенность, которая может возникнуть из-за множества факторов, в основном из-за повсеместного характера гетерогенности, возникающей между донорами МСК 6 , тканевыми источниками 7 , отдельными клетками в клональной популяции 8 и условиями культивирования 2,9. Характеристика и очистка этих первичных клеток из различных тканевых источников для обеспечения качества и судьбы клеток являются ключевыми этапами их производства. Необходимость понимания отображаемых вариаций среди генеральной совокупности требует эффективного метода разложения ее на субпопуляции, которые могут быть разделены и собраны по отдельности Анализ на уровне отдельных клеток помогает преодолеть проблемы, связанные с межклеточной изменчивостью, уменьшить биологический шум, возникающий в гетерогенной популяции, и дает возможность исследовать и характеризовать редкие клетки В зависимости от цели и выбранных параметров можно использовать несколько методов сортировки и обогащения выбранных популяций. Методы сортировки клеток могут включать в себя как массовую сортировку, так и сортировку отдельных клеток. В то время как массовая сортировка может обогатить целевые популяции с помощью магнитно-активированной сортировки клеток MACS 13, фракционирования 14 и элютриации 15, сортировка отдельных клеток может обогатить более однородные популяции с помощью флуоресцентно-активированной сортировки клеток FACS Сравнительный анализ каждого из этих методов со своим набором преимуществ и недостатков выделен в таблице 1. Таблица 1: Сравнительный анализ различных методов: MACS, фракционирование, элютриация и FACS, подчеркивающий различия в их принципе, а также преимущества и недостатки выбора одного метода по сравнению с другим. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать эту таблицу. С момента появления этого метода одноклеточная проточная цитометрия играла важную роль в перечислении 16 , обнаружении и характеристике специфической клеточной популяции в гетерогенной выборке В году Hewitt et al. Одноклеточная сортировка обогатила популяцию трансдуцированных GFP чЭСК, способствуя выделению генетически модифицированных клонов, что открыло новое измерение в клинических исследованиях. С развитием технологий коммерческие проточные цитометры и сортировщики клеток смогли помочь решить проблемы, которые были решены при асептической сортировке хрупких и редких клеточных популяций, особенно стволовых клеток различного происхождения. Одной из основных проблем, стоящих перед биологами стволовых клеток, является клональная изоляция плюрипотентных стволовых клеток человека в соответствии с протоколами трансфекции, требуемыми в исследованиях редактирования генов. Эта проблема была решена путем сортировки отдельных клеток по луночным планшетам, которые были покрыты мышиными эмбриональными фибробластами MEF вместе с добавками и коммерческими низкомолекулярными ингибиторами ROCK. Тем не менее, стратегии выделения клеток могут быть в значительной степени усовершенствованы с использованием индексной сортировки, функции алгоритма сортировки, которая идентифицирует иммунофенотип отдельных отсортированных клеток. Этот усовершенствованный метод сортировки отдельных клеток помог не только повысить эффективность сортировки стволовых клеток, особенно в отношении редких популяций гемопоэтических стволовых клеток, но и эффективно связать одноклеточные клоны с их последующими функциональными анализами Данная работа посвящена одноклеточной сортировке иммунофенотипированных стволовых клеток из отслоившихся молочных зубов человека SHEDs для обогащения субпопуляций с целью изучения их функциональной дифференцировочной способности. На основании иммунофенотипа субпопуляции были идентифицированы как чистые МСК, одиночные положительные и двойные отрицательные популяции. Они были отсортированы с использованием режима одноклеточной сортировки для получения чистых и обогащенных субпопуляций для дальнейших функциональных исследований, чтобы определить, является ли дифференциальная экспрессия маркеров артефактом условий культивирования in vitro или она также оказывает какое-либо влияние на функциональные свойства. Клетки, которые не были однородными экспрессорами «положительных маркеров МСК», были отсортированы для изучения их функциональных свойств. Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian. Этическое одобрение и согласие на участие: Образцы отслоившейся пульпы молочных зубов были получены после получения информированного согласия и полного этического одобрения Стоматологического колледжа и больницы Шри Раджива Ганди SRGCDS отделения полости рта и челюстно-лицевой области, Бангалор, в соответствии со стандартами, установленными Комитетом по этическому разрешению больниц, SRGCDS. Подробную информацию обо всех материалах и реагентах, используемых в этом протоколе, см. Таблица 2: Питательные среды для культивирования и анализа культур. Окрашивание клеточной поверхности для иммунофенотипирования. Таблица 4: Компенсационные контрольные выборки. Таблица 5: Контрольные образцы ФМО. Таблица 7: Одноклеточные реакционные пробирки для сортировки. SHED были охарактеризованы стандартными иммунофлуоресцентными анализами, показывающими экспрессию виментина красные, промежуточные нити III типа , актиновых филаментов фаллоидиновые зонды Alexa fluor и ядер, окрашенных DAPI рис. Для оценки их пролиферативной и колониеобразующей способности были проведены стандартные краткосрочные анализы роста клеток. На рисунке 1В показано увеличение скорости пролиферации в 14,3 раза со 2-го по 8-й день. Цитохимическое окрашивание Oil Red O использовалось для обнаружения капель масла в дифференцированных адипоцитах рис. Для характеристики иммунофенотипа SHEDs были установлены мультипараметрические анализы проточной цитометрии. Эксперименты проводились с использованием четырех типов экспериментального контроля: компенсационного контроля табл. Изотипы всех использованных антител к МСК и ГСК были добавлены вместе с пробирками FMO для различения положительных и отрицательных сигналов и высокой и тусклой экспрессии антигена. На рисунке 2А показано распределение контрольных показателей FMO и изотипов, используемых для каждого эксперимента. Аналогичным образом, с помощью наложений гистограмм рис. Положительная экспрессия маркеров CD90 и CD73 красные гистограммы и отрицательная экспрессия CD45 сопоставимы с таковой у их неокрашенных и контрольных ФМО синяя и черная гистограммы соответственно. Характеристика иммунофенотипов методом проточной цитометрии показала распределение маркеров из одного из ранних пассажей P6 SHED рис. Более пяти независимых экспериментов показали аналогичные результаты. Для одноклеточной сортировки высоких и тусклых экспрессоров были выбраны поздние SHED P12 , которые показали дифференциальную экспрессию положительных маркеров рис. В соответствии со стратегией стробирования рис. Было проведено три независимых этапа экспериментов. Мы сопоставили количество клеток, которые росли на одну скважину после сортировки, с количеством ячеек, отсортированных на скважину. Адгезивные и пролиферирующие постсортированные клетки дифференцировали в присутствии адипогенных факторов роста, а затем окрашивали после го дня Oil Red O, используя соответствующие постсортированные контрольные недифференцированные клетки рис. Рисунок 1 : Характеристика стволовых клеток отслоившихся молочных зубов человека. Микрофотография получена при оригинальном увеличении 20х. Ф-Х Ожидается, что МСК в соответствующих условиях in vitro подвергнутся дифференцировке на адипогенную, остеогенную и хондрогенную линии к му дню. Цитохимическое окрашивание показывает F масляно-красный O на врезке показано кратное изображение адипоцита с масляными каплями , G окрашивание по Коссе и H окрашивание алсийским синим для адипогенной, остеогенной и хондрогенной линий соответственно на й день. Микрофотографии получены при оригинальном увеличении 20х. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этого рисунка. Рисунок 2 : Отрицательный контроль, используемый в мультипараметрическом эксперименте. A Контрольные элементы флуоресценции минус один были отображены в табличной форме, где контрольные элементы FMO были заменены их специфическими изотипами. B Наложение гистограммы представляет собой сравнение трех типов образцов, черный цвет представляет FMO, синий — неокрашенные, а красный — полностью окрашенные образцы в соответствующих каналах. Зависимые популяции, показанные на рисунке F , были отсортированы с использованием режима сортировки одной ячейки. H Стробная иерархия. Дополнительный файл 1: скомпилированные отчеты о сортировке, созданные для каждого эксперимента. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать этот файл. В области тканевой инженерии и регенеративной медицины, среди постнатальных источников, МСК, полученные из пероральных тканей, вызвали глубокий интерес из-за их минимальных этических обязательств и значительного многолинейного дифференциального потенциала Стволовые клетки пульпы зуба DPSC из пораженного третьего моляра и SHED привлекли наибольшее внимание среди стоматологических МСК в связи с их терапевтическим потенциалом при нейродегенеративных и травматических заболеваниях Протокол, описанный в этой рукописи, помогает характеризовать SHED с помощью мультипараметрического подхода и далее сортировать интересующие популяции с помощью одноклеточного подхода. Однако применение этого протокола не ограничивается только пероральными МСК, но также может быть использовано для иммунофенотипирования и сортировки МСК из тканей других источников в организме человека Здесь необходимо обсудить несколько важнейших шагов в этом протоколе для его успешной реализации для решения рассматриваемой биологической проблемы. Ключом к каждому протоколу сортировки является проверка двух важных компонентов: его биологического контроля и экспериментального контроля. Во-первых, поддержание чистоты культуры гарантирует, что используемый образец не будет скомпрометирован во время сортировки. В этом исследовании, поскольку в качестве образцов использовались МСК приблизительного диаметра мкм, был выбран размер сопла мкм для их сортировки при давлении 20 фунтов на квадратный дюйм на BD FACSAria Fusion. Это позволило проводить сортировку клеток без ущерба для жизнеспособности клеток во время процесса при более низком давлении оболочки. Для получения подробной информации об условиях настройки сортировки рекомендуется обратиться к руководству по программному обеспечению BD FACSDiva Существенной предпосылкой для проведения многоцветных экспериментов в проточной цитометрии является необходимость соответствующего контроля; Здесь используются четыре основных типа контроля: автофлуоресценция, изотипы, FMO и компенсационные контроли. Матрица автокомпенсации позволяла проводить точную компенсацию, предотвращая спектральное просачивание в детекторах, и использовала для этого как компенсационные шарики, так и ячейки. Неокрашенный образец устанавливал порог автофлуоресценции МСК. Смешанные пробирки со всеми четырьмя антителами включают изотип и FMO каждого используемого антитела. Дополнительную таблицу S1. Это очень важно при планировании экспериментов по многопараметрической проточной цитометрии. Таблица 8: Многоцветная панель, предназначенная для характеризации и сортировки ДЭП методом проточной цитометрии. Выбор сортовой маски чистоты Учитывая непредсказуемость клеточной гетерогенности в МСК, массовая сортировка не обязательно может достичь уровня чистоты среди отсортированных популяций. В этом исследовании мы оптимизировали протокол сортировки отдельных клеток, чтобы идентифицировать одноклеточные клоны и отслеживать их функциональные свойства после сортировки с точки зрения эффективности. Шансы выбрать две целевые ячейки вместо одной в этом методе минимальны. Как правило, алгоритм выбирает режим сортировки одной ячейки, который может разрешить сортировку чистых популяций целевых клеток и определить, сколько капель будет отсортировано в выбранном устройстве сбора. Режим Точность в конечном итоге должен быть выбран таким образом, чтобы он мог комбинировать маски, доступные в алгоритмах сортировки, и создавать строгие условия сортировки для сортировки наиболее чистых интересующих популяций. Режим сортировки по одной ячейке не ставит под угрозу целевую ячейку, если она агрегируется в нецелевую ячейку во время сортировки, и это позволяет достичь уровня чистоты, которого мы ожидаем в этом подходе. Это был модуль, выбранный в этом протоколе, и отсортированные ячейки были собраны в луночных, луночных, луночных и 6-луночных планшетах. Как в протоколах характеризации, так и в протоколах сортировки наша стратегия стробирования как показано на рисунке 3 и рисунке 4 была основана на исключении стробирования из популяции CD45 - , чтобы получить негемопоэтическую популяцию поскольку они были проверены и охарактеризованы ранее с помощью маркеров, предписанных ISCT после идентификации синглетов. Здесь стоит отметить, что нет большой разницы в процентном соотношении сначала положительных экспрессоров маркеров ISCT, а затем отрицательных экспрессоров CD Однако, поскольку целью этой сортировки было выявление клеток, демонстрирующих измененную экспрессию известных маркеров МСК, мы завершили наш анализ графиками положительной экспрессии. В ходе характеристики этих клеток мы идентифицировали субпопуляции как тетрапозитивные МСК, трижды положительные и дважды отрицательные популяции. Эта дифференциальная экспрессия маркеров МСК расширяется с увеличением пассажей, и поэтому возникает необходимость изучения и корреляции этой разницы с их функциональными свойствами. Конечная цель сортировки МСК в нашем исследовании состоит в том, чтобы провести сравнительный анализ между идентифицированными субпопуляциями и определить, имеет ли дифференциальная экспрессия положительных маркеров функциональное значение. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов в связи с публикацией данной статьи. Мы благодарим Центр проточных ячеек в Центре передовых научных исследований им. Джавахарлала Неру Бангалор, Индия за использование основной установки проточной цитометрии. Криосекционирование гранульной культуры дифференцированных клеток проводили в референс-лаборатории Neuberg Anand, Бангалор, Индия. AG благодарит за поддержку стипендию доктора Т. Пая от MAHE. Gupta, A. To learn more about our GDPR policies click here. If you want more info regarding data storage, please contact gdpr jove. You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions jove. Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login. You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free. To get started, a verification email has been sent to email institution. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your 'Spam' folder. Your access has now expired. Provide feedback to your librarian. If you have any questions, please do not hesitate to reach out to our customer success team. Login processing JoVE Journal Biology. Нейтрализуют клетки после трипсинизации с помощью нейтрализующей среды. Центрифугируют клетки при г в течение 6 мин при комнатной температуре и ресуспендируют гранулы в 1 мл среды. Подсчитывают клетки с помощью гемоцитометра и определяют их жизнеспособность методом исключения трипанового синего. Через 14 дней промойте колонии ПБС, зафиксируйте их кристаллическим фиолетовым красителем в метаноле и снова промойте ПБС, чтобы удалить остаточное пятно. Подсчитывайте и изображайте колонии. Эффективность колониеобразования рассчитывается как количество колониеобразующих единиц. Удалите фильтрующий материал и ополосните посуду PBS один раз. После фиксации промыть лунки ПБСТ в течение 3 х 5 мин на коромысле. Держите его на коромысле в течение 15 минут при комнатной температуре. Промыть лунки ПБСТ в течение 3 х 5 мин на коромысле. На следующий день удалить первичные антитела и промыть лунки ПБСТ в течение 3 х 5 мин на коромысле. Добавьте фаллоидиновые зонды Alexa fluor мкл в 1 мкл PBS и инкубируйте при комнатной температуре в течение 60 минут на коромысле. Добавьте мкл монтанта DAPI и понаблюдайте за клетками под микроскопом. Дифференциация по линии Дифференциация в соответствии с культурой 2D Возьмите две луночные пластины и обозначьте их как остеогенную и адипогенную линии соответственно. В последних двух лунках, помеченных как «Тест», добавьте дифференцирующую среду любой из двух линий, адипогенной или остеогенной. Отметьте это как День 0. Аккуратно заменяйте фильтрующий материал каждые три дня, чтобы избежать отслаивания, и будьте осторожны, чтобы избежать загрязнения. Поддерживайте эти условия до двадцать первого дня; Затем обработайте для эксперимента по окрашиванию. Дифференциация в соответствии с 3D-культурой Возьмите две пробирки по 15 мл для проведения хондрогенной дифференцировки с помощью 3D пеллетной культуры. Аккуратно поместите пробирки в инкубатор, неплотно закрутив крышки. Поддерживайте эти условия до двадцати первого дня, а затем обработайте клетки для дальнейших экспериментов. Цитохимическое окрашивание по линии Для 2D-культур используйте дифференцированные тестовые и недифференцированные МСК контрольные планшеты из шага 3. Выполните окрашивание для каждой линии следующим образом. Для получения линии адипоцитов добавьте раствор пермеабилизации из набора и инкубируйте планшет в течение 5 минут при комнатной температуре. Приготовьте и добавьте 1 мл рабочего раствора Oil red O и выдержите 10 минут. Удалите пятно и дайте пять стирок дистиллированной воде. Удалите пятно, дважды промойте дистиллированной водой и осмотрите окрашенные клетки под микроскопом. Для 3D-культур собирают гранулу после окончания периода дифференцировки с шага 3. Дайте предметным стеклам высохнуть на воздухе и нагреться до комнатной температуры, прежде чем приступать к окрашиванию. Для хондроцитарной линии следуйте указаниям набора для окрашивания, чтобы добавить достаточное количество промывочного раствора, удалить его, добавить фиксирующий раствор и инкубировать в течение 30 минут. Промыть дистиллированной водой, добавить красящий раствор и выдержать 30 мин. Трижды промыть 0,1 Н соляной кислотой; Добавьте дистиллированную воду, чтобы нейтрализовать кислотность. Понаблюдайте за окрашенными клетками под светлопольным микроскопом. Ресуспендируйте гранулу в 1 мл среды и определите количество жизнеспособных клеток с помощью гемоцитометра по методу исключения трипанового синего. После подсчета снова центрифугируют клеточную суспензию и дают грануле еще две промывки 1 мл окрашивающего буфера. Выбросьте надосадочную жидкость и, наконец, повторно суспендируйте гранулу в соответствующем объеме буфера для окрашивания в зависимости от протокола см. Ресуспендируйте готовую гранулу в буфере для окрашивания см. Подготовьте одноокрашенные трубки к компенсации, как описано в таблице 4. После подготовки аккуратно встряхните каждую пробирку и инкубируйте в темноте в течение 30 минут. После инкубации проводят две промывки, добавляя в каждую пробирку по 1 мл окрашивающего буфера, после чего проводят кратковременное вихрирование и центрифугирование при г в течение 10 мин при комнатной температуре. Выбросьте надосадочную жидкость, повторно суспендируйте гранулу в мкл окрашивающего буфера и отложите ее в сторону до получения. Добавьте 5 мкл DAPI в суспензию и держите ее в темноте до получения результата. Подготовка контроля флуоресценции минус один FMO Суспендант готовой гранулы помещают в буфер для окрашивания см. Приготовьте суспензию клеток и антител в соответствии с таблицей 5. Осторожно вкрутите пробирки и инкубируйте их в течение 30 минут при комнатной температуре в темноте. После инкубации проводят две промывки с добавлением 1 мл окрашивающего буфера в каждую пробирку с последующим кратковременным вихрянием и центрифугированием при г в течение 10 мин при комнатной температуре. Выбросьте надосадочную жидкость, повторно суспендируйте гранулу в мкл окрашивающего буфера и отложите ее до получения. Подготовка образцов к анализу Ресуспендант готовой гранулы в буфере для окрашивания см. Готовят клеточную и антителовую суспензию в соответствии с таблицей 6. Выбросьте надосадочную жидкость, повторно суспендируйте гранулу в мкл окрашивающего буфера и отложите до получения. Выдерживают его в течение ч, одновременно обрабатывая образец для окрашивания. Обозначьте эти пробирки как Смешанные трубки 1 и 2. Ресуспендант готовой гранулы в буфере для окрашивания см. Готовят суспензию клеток и антител в смешанных пробирках 1 и 2 в соответствии с таблицей 7. Выбросьте надосадочную жидкость, повторно суспендируйте гранулу в мкл буфера для окрашивания и отложите в сторону. Добавьте 5 мкл DAPI за 15 минут до сортировки. Одноячеечная сортировка Подготовка клеточного сортировщика Установите в сортировщик сопло мкм. Жидкость оболочки, которая будет использоваться для сортировки, должна быть определена в зависимости от типа образца и чувствительности эксперимента; Для этого эксперимента была использована запатентованная жидкость для оболочки. Выполняйте ежедневную проверку качества прибора QC и настраивайте сортировщик для эксперимента. Обратитесь к руководству по прибору для получения подробного руководства по настройке прибора. Настройка матрицы компенсаций Установите компенсационную матрицу с помощью компенсационных трубок с одним пятном, как показано в шаге 4. В проприетарном программном обеспечении выберите «Эксперимент» на панели инструментов и нажмите « Настройка компенсации ». Откройте Создание элементов управления компенсациями. Проверьте маркеры и подтвердите. Добавляется новый образец с именем «Компенсация», при котором программное обеспечение автоматически добавляет новые пробирки, называемые маркерными элементами управления. Выберите трубку Unstained и запустите ее, чтобы записать 5 событий. Перетащите гейт на заполнение ячеек и примените его ко всем элементам управления компенсацией. Это необходимо для установки напряжений и отрицательного затвора для каждого флуоресцентного параметра. Точно так же загрузите трубки для компенсации одиночных пятен отдельно, а также запишите и сохраните данные. Выберите ворота, разграничивающие интересующую совокупность, и примените их ко всем элементам управления компенсациями. Это необходимо для установки положительных вентилей для каждого флуоресцентного параметра. Выберите «Эксперимент » на панели инструментов и нажмите «Рассчитать значения компенсации ссылка и сохранить ». Сбор данных Запишите 10 клеток в каждую пробирку, начиная с шага 4. Подготовка устройств для сбора В зависимости от назначения отсортированных клеточных популяций можно выбрать 6-луночные, луночные, луночные или луночные планшеты. Смажьте лунки мкл FBS и держите планшеты нетронутыми в течение 2 ч. Сортировка ячеек в режиме сортировки по одной ячейке Запустите смешанную трубку 1 начиная с шага 4. Загрузите сборную пластину и установите целевые номера ячеек в диапазоне от 2 до 5 ячеек на лунку и выберите маску чистоты сортировки одной ячейки. Соберите отсортированные популяции в устройство сбора и держите их на льду до конца эксперимента по сортировке. Play Video. Cite this Article Gupta, A. Before you can use the favorites feature you must sign in or create an account. Continue with Shibboleth or Forgot Password? Please enter your email address so we may send you a link to reset your password. You might already have access to this content! Please enter your Institution or Company email below to check. Please enter an institutional email address. Check access. Create Account. Forgot Password? Reset Password. Phone number. Request trial. Thank You! A JoVE representative will be in touch with you shortly. Waiting for verification email? Please click here to activate your free 2-hour trial. If you do not wish to begin your trial now, you can log back into JoVE at any time to begin. Enable Javascript for audio controls. Get cutting-edge science videos from J o VE sent straight to your inbox every month. We use cookies to enhance your experience on our website. Continue Learn more Close.

Салерно Италия купить Трамадол закладки