Материалы и методы

Химикаты и реактивы

Мефедрон (Меф) ≥ 99%, мефедрон-d 3 (Меф-d 3 ) ≥ 98%, нор-мефедрон (нор-меф) ≥ 98%, 4 '-карбокси-мефедрон (СООН-меф) ≥ 95% , 1' -дигидро- мефедрон (дигидро-меф) ≥ 97% N- сукцинил-нор-мефедрон (сукц-нор-меф) ≥ 95% синтезированы в лаборатории по методическим рекомендациям для получения внутренних стандартов. Чистота подтверждена данными ЯМР. Использовались серотонин-d 5 , 3-метокси-тирамин-d 4 , ацетонитрил и ультрачистая вода Milli-Q производства Merck.

Приборы

Для хроматографического разделения использовали Acquity UPLC, оснащеную колонкой Acquity BEH C18 (100 мм, 2,1 мм внутр, 1,7 μ м), при 55 ° C с скоростью потока 300 μ л / мин. Объем инъекции составлял 10 мкл. В качестве подвижных фаз использовали воду (А) и метанол (В), как с муравьиной кислотой (0,01% об. / об. ), так и с формиатом аммония (1 мМ).

ЖХ-система соединена с тройным квадрупольным масс-спектрометром (Quattro Premier Wate rs), в качестве сушильного и распыляющего газа использовали азот. Программное обеспечение MassLynx V4.1, TargetLynx

Образцы человека

Плазма крови была получена из банка крови клинического госпиталя, а свободная от наркотиков моча была отобрана у здоровых добровольцев.

Образцы плазмы и мочи для исследования были получены от шести здоровых мужчин, которые участвовали в контролируемом двойном слепом рандомизированном исследовании в условиях стационара для получения экспериментальных данных о клинической фармакологии мефедрона. Субъекты принимали 150 мг мефедрона в контролируемой обстановке. Ранее, все они являлись рекреационными пользователями психостимуляторов, имели средний возраст 30 ± 4 года, средний вес 72 ± 4 кги индекс массы тела 21 ± 2. Образцы плазмы собирали через 1, 2, 4, 6 и 8 ч после введения препарата, а также собирали мочу в течение периодов времени: 0 - 4, 4 - 8, 8 - 12, 12 - 24 и 24 - 48 часов после введения мефедрона.

Образцы крыс

Мефедрон (30 мг / кг) растворенный в изотоническом растворе хлорида натрия вводили внутрибрюшинно двум группам из шести крыс, весом 175 – 210 г. Эвтаназию проводили спустя 1 час после введения лекарственного средства путем декапитации. Ткани коры головного мозга были немедленно извлечены и заморожены жидким азотом для последующего анализа.

Приготовление образцов

Внутренний стандарт

Исходный раствор 100 μ г / мл меф-D 3 в метаноле хранили при - 20 ° С в темном месте. Меф-d 3 разбавляли до 100 нг / мл рабочего раствора в сверхчистой воде Milli-Q и хранили при - 20 ° C до анализа.

Образцы мочи

Аликвоту 10 μL мочи, в 90 μL ультрачистой воды и 100 μл рабочего раствора внутреннего стандарта помещали в инъекционный виал. После интенсивного перемешивания в течение 1 мин в систему ЖХ-МС / МС вводили 10 мкл смеси.

Образцы плазмы

Аликвоту 50 мкл плазмы и 100 мкл внутреннего стандарта смешивали впробирке. Затем для осаждения белка добавляли 500 мкл ацетонитрила. После перемешивания и центрифугирования (5 мин, 12 000 об / мин, 4 ° С) супернатант переносили в чистую пробирку. Смесь выпаривали в потоке азота до тех пор, пока не осталось около 100 мкл. Концентрированную смесь переносили в инъекционный виал и 10 мкл вводили в систему ЖХ-МС / МС.

Гомогенаты коры ГМ крысы

Тканевый срез мозга мягко гомогенизировали в 400 мкл 0,1% муравьиной кислоты, затем осадили белок добавлением 800 мкл ацетонитрила. Смесь центрифугировали (5 мин, 12000 об / мин, 4 ° С) и супернатант хранили во льду до анализа. Затем 50 мкл смеси плюс 100 мкл внутреннего стандарта упаривали в потоке азота до тех пор, пока не осталось около 100 μL . Затем в систему ЖХ-МС / МС вводили 10 мкл образца.