Культуральные (бактериологические) методы исследования ТБ
АлиманПосев мокроты на питательных средах - золотой стандарт диагностики туберкулеза. Для получения культуры МБТ достаточно от 20 до 100 микробных клеток в 1 мл жидкого материала. Бактериологический метод дает возможность получить чистую культуру МБТ для ее последующей идентификации и тестирования на чувствительность к противотуберкулезным препаратам. Наиболее часто используют следующие питательные среды: Левенштейна-Йенсена (плотная питательная среда), BACTEC MGIT 960 (жидкая среда на автоматизированных системах). Для получения достоверного результата лабораторного исследования мокроту на посев необходимо сдать до начала лечения противотуберкулезными препаратами.
· Среда Левенштейна-Йенсена:
Перед посевом на питательные среды проводят обработку патологического материала для уничтожения сопутствующей флоры, разжижения, деконтаминации. В зависимости от материала, степени его гомогенности и загрязнённости для предпосевной обработки используют различные деконтаминанты. Для мокроты в основном используют 10 % раствор трёхзамещённого фосфорно-кислого натрия. После предварительной обработки материал центрифугируют, за счёт этого осаждают микобактерии, и повышают их содержание в осадке («обогащение осадка»). Полученный осадок подвергают нейтрализации, и засевают им (инокулируют) поверхность плотных питательных сред или пробирки с жидкими (полужидкими) средами. Из оставшейся части осадка готовят мазки для микроскопического исследования, так как микроскопическое и культуральное исследования нужно производить параллельно из одной и той же пробы диагностического материала. При использовании плотных сред инокулированные пробирки помещают в термостат при температуре 37°С на 2 суток в горизонтальном положении. Это обеспечивает более равномерное всасывание материала в питательную среду. Через 2 суток пробирки переводят в вертикальное положение, и герметично закрывают резиновыми или силиконовыми пробками во избежание подсыхания засеянных сред. Посевы выдерживают в термостате при 37°С в течение 10-12 недель при регулярном еженедельном просмотре.
Рост первых колоний на среде Левенштейна-Йенсена отмечают через 4-8 недель.
· BACTEC MGIT 960:
В основе методики лежит изобретение индикаторной пробирки MGIT (mycobacteria growth indicating tube). Содержимое пробирки MGIT – это питательный бульон, благодаря которому достигается более эффективное выделение микобактерий и их ускоренный рост. Пробирка содержит 7 мл стерильного питательного бульона Мидлбрук 7Н9, в которую перед использованием вносится обогатительная добавка для стимуляции роста МБТ. На дне пробирки содержится кислородзависимый флюорохромный краситель. Во время бактериального роста внутри пробирки происходит поглощение свободного кислорода и его замещение углекислым газом. По мере расходования свободного кислорода возникает флюоресценция. Флюоресценция становится видимой при облучении пробирки ультрафиолетовым светом и автоматически регистрируется фотодатчиками, встроенными в прибор BACTEC MGIT 960. Один раз в час флуоресцентный сенсор считывает результаты тестирования. Интенсивность свечения прямо пропорциональна уровню расходования кислорода и регистрируется в единицах роста (GU – growth units).
Появление роста МБТ отмечают на 10-14 дни. Прибор оценивает пробу как отрицательную при отсутствии роста в течение шести недель (42 дня).
Оценка результата бактериологического исследования:
· До 10 колоний на среде – скудное бактериовыделение (1+)
· От 10 до 50 колоний – умеренное (2+)
· Более 50 колоний – обильное (3+)
источники:
"Фтизиатрия" Г.Цогт, Т.Чубаков, А.Кадыров, 2017г.
Сборник КП по туберкулезу, 2014