Иордания бесплатные пробы Экстази, скорость

≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈

Гарантии! Качество! Отзывы!

Проверенный магазин!

≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈

▼▼ ▼▼ ▼▼ ▼▼ ▼▼ ▼▼ ▼▼ ▼▼ ▼▼

Наши контакты (Telegram):☎✍

>>>✅(НАПИСАТЬ ОПЕРАТОРУ В ТЕЛЕГРАМ)✅<<<

▲▲ ▲▲ ▲▲ ▲▲ ▲▲ ▲▲ ▲▲ ▲▲ ▲▲

≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡

⛔ ВНИМАНИЕ!

📍 ✅✅✅ Используйте ВПН, если ссылка не открваеться !!!

📍 В Телеграм переходить только по ССЫЛКЕ что ВЫШЕ! В поиске НАС НЕТ там только фейки!

📍 Гарантии и Отзывы!

📍 Работаем честно!

≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡

Иордания бесплатные пробы Экстази, скорость

We have noticed an unusual activity from your IP Please confirm that you are not a robot.

Иордания бесплатные пробы Экстази, скорость

Павлово цена на Меф, соль, ск, амф

Иордания бесплатные пробы Экстази, скорость

Ł₳ßℝℂ - Sekta Lab (открывается при помощи VPN)

Бошки, Кокаин Крит купить

Иордания бесплатные пробы Экстази, скорость

Гашиш, Бошки, Шишки Зугдиди купить

Индукция мезенхимных-эпителиальных переходы в клетках саркомы

Important: There has been an erratum issued for this article. Read more …. Мы представляем здесь способ культивирования клеток для индукции мезенхимальных-эпителиальные переходы MET в клетках саркомы на основе комбинированного эктопической экспрессии микроРНК членов семьи и grainyhead-типа 2 GRHL2. Этот метод подходит для лучшего понимания биологического воздействия фенотипической пластичности на агрессивности рака и лечении. Фенотипическая пластичность относится к явлению, в котором клетка транзиторна получить черты другого рода. Во время прогрессирования рака, фенотипическая пластичность дисков вторжения, распространение и метастазирование. В самом деле, в то время как большинство исследований фенотипической пластичности было в контексте эпителиальных полученных карцином, оказывается, саркомы, которые являются мезенхимальными по происхождению, также демонстрируют фенотипическую пластичность, с подмножеством сарком переживают феномен, который напоминает mesenchymal- эпителиальный переход МЕТЫ. We последовательно выразить GRHL2 и семейство микроРНК клеток с помощью трансдукции и трансфекции, соответственно, , чтобы лучше понять молекулярные основы этих фенотипических переходов в клетках саркомы. Дальнейшие исследования с использованием этих методов могут быть использовано, чтобы лучше понять последствия фенотипических из МЕТ-подобных процессов на клетки саркомы, такие как миграция, инвазия, метастатическая склонность и устойчивость к терапии. Фенотипическая пластичность относится к обратимому переходу между клеточными фенотипами, и обычно делится на два типа, эпителиально-к-мезенхимальный ЕМТ переходы и мезенхимальных-к-эпителиальные переходы Met. Это фенотипическая пластичность играет важную роль в нормальных процессах многоклеточных организмов, такие как развитие и заживление ран 1; Однако, эти же пути и программа экспрессии генов также могут привести к болезни, такие как фиброз обзор в 2, 3, 4 и карциноме метастазы обзор в ссылках 5, 6, 7, 8. Во время метастазирования, например, ЕМТ нарушает полярность клеток, межклеточные взаимодействия, а также способствует инвазии 9, Вместе EMT вкладs в фенотипическое состояние, что способствует распространению раковых клеток. Кроме того, ЕМТ также приводит к целому ряду других фенотипических изменений , которые ведут агрессивный фенотип, в то числе дерегуляции раковых клеток метаболизма 6, развития лекарственной устойчивости 11, 12, увеличенная способностью опухоли инициации 13, 14 и принимающей иммунное уклонение от Фенотипическая пластичность хорошо изучена в прогрессировании рака; Однако, саркомы также демонстрируют фенотипическую пластичность. Интересно, что кажется, как будто некоторые из тех же водителей фенотипической пластичности в карциномах также способствуют саркомам пластичности и агрессивности. Так , например, циркулирующие опухолевые клетки CTCs у пациентов с саркомой , как были показаны , чтобы выразить EpCAM, белок клеточной поверхности , которые , как правило , найденные на эпителиальные клетках Аддиционно, мягких тканей саркома образцы были классифицированы как эпителиальные-типа или мезенхимальные-как на основе экспрессии генов. Пациенты в эпителиального типа биомаркеров подписи имели лучший прогноз , чем у пациентов с мезенхимальной типа биомаркеров подписи Это согласуется со многими карцином, в которых пациенты с более эпителиальных карцином , как имеют лучшие результаты по сравнению с пациентами с более мезенхимальных подобных опухолей В то время как некоторые саркомы отображения биомаркеров и экспрессии генов пути в соответствии с MET, молекулярные подкрепления этой фенотипической пластичности остаются мало изучены. Семейство микроРНК также подавляется в сарком мягких тканей по сравнению с нормальной тканью Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian. Шприц фильтр вирусного носителя путем удаления плунжера из 3 мл шприца и прикрепить 0,45 мкм фильтра полиэфирсульфона к кончику. Добавьте вирусные носители, собранные на этапе 2. Удалить материал из RD клеток с помощью вакуумной аспирации и добавить отфильтрованный вирусный носитель для RD клеток. День 5. Примечание: Для детального мягкого агара протокола анализа, см Общий график для индукции МЕТ-подобных изменений в клетках саркомы показан на рисунке 1. Клетки переход от веретенообразной формы к более закругленным внешний вид с увеличением межклеточного контакта рис 1C. Индукция МЕТ-подобных изменений в клетках саркомы. MET индукции уменьшает образование колонии способность клеток саркомы. Положительная регуляция эпителиальных белков сопровождалось подавлением генов мезенхимальные Zeb1 и Notch1 рис 3A , которые известны мишени для микроРНК Это согласуется с предыдущими сообщениями , показывающих экспрессию GRHL2 индуцирует рост 22 якорной-независимыми. This фигура Тьюки была изменена с позиции Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры. This фигурой Тьюки был изменен из гправочник Видео были составлены из изображений RD клеток, трансфицированных пустым вектором и отрицательным микроРНК управления приобретенными через каждые два часа с использованием автоматического живых клеток томографа. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы просмотреть это видео. Щелкните правой кнопкой мыши для загрузки. Видео были составлены из изображений RD клетка, трансфицированного пустым вектором и miR микроРНКа приобретенных через каждые два часа с использованием автоматических живых клетками томографа. Саркомы являются редкими, но очень агрессивные раковые мезенхимной линии. Несмотря на их мезенхимальное происхождение, подмножество сарком, как представляется, пройти фенотипический переход к более эпителиальным подобным состояниям. Это МЕТ-подобный переключатель имеет прогностическое значение, так как пациенты с большим количеством эпителиальных опухолей, как менее агрессивны Несмотря на их клиническое значение, есть несколько исследований, касающихся молекулярных механизмы, движущие эти фенотипические переходы в саркомах. Этот метод быстро индуцирует клетку саркомы, чтобы стать более эпителиальным типом, как измерено с помощью изменений в морфологии и экспрессии генов. Используя этот протокол, чтобы вызвать MET в клетках саркомы облегчает изучение влияния этих переходов на фенотипы, которые управляют саркомы агрессии, такойкак миграция, инвазия, распространение и сопротивление смерти и как каждый из этих изменений в биологии может повлиять на наркотики сопротивления. В контексте эпителиальных карцином происхождения, экспрессия одного фактора мезенхимального часто бывает достаточно , чтобы вызвать ЕМТ Вполне возможно , что для некоторых типов клеток мезенхимы эпителиальные гены должны быть как де-репрессирован например , с помощью микроРНКs и активируется например , через GRHL2 для привода MET. ЕМТ рассматриваются как спектр на основе экспрессии эпителиальных и мезенхимальных-ассоциированные гены, которые могут иметь контекстно-зависимые изменения основаны на клеточной линии, типа рака, лечение и т. Таким образом, долгосрочные эксперименты могут стать дорогостоящими и сложными, когда несколько повторной трансфекция становится необходимой. Эту проблему можно решить с помощью плазмиды экспрессии микроРНК Другие исследования также свидетельствуют о MET в саркомах. Так, например, МЕТ наблюдалась в подгруппе leiomyosarcomas и был связан с лучшей выживаемостью пациентов. Механистически Янг и др. Кроме того, истощение еще один фактор мезенхимального, улитка, в мезенхимальных стволовых клеток снижает образование саркомы у мышей Таким образом, как видно из литературы, что существует множество путей к МЕТАМ-подобному фенотипу, который может варьироваться в зависимости от типа клеток. Хотя это не единственный способ, чтобы побудить МЕТЫ, мы использовали наш метод, чтобы вызвать MET в двух саркоме подтипов, в том числе рабдомиосаркомы RD клетка и остеосарком 14 клетки. В будущем, было бы интересно сравнить эти различные методы в широком диапазоне клеток саркомы. Например, у некоторых подтипы саркомы имеют основные генетические или эпигенетические изменения, которые делают их более или менее восприимчивы к МЕТАМ индукции? Определение влияния METна различных биологических выходов в клетках саркомы может обеспечить лучшее понимание того, почему у пациентов с более эпителиальных типа саркомы имеют улучшенный прогноз. Кроме того, понимание влияния лечения на вождение фенотипических переходов между состояниями бы углубить наше понимание биологического и сообщить при ответе на текущие терапии у пациентов с саркомой. Citeable Link. An author name was updated. Ware, K. To learn more about our GDPR policies click here. If you want more info regarding data storage, please contact gdpr jove. You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions jove. Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login. You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free. To get started, a verification email has been sent to email institution. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your 'Spam' folder. Your access has now expired. Provide feedback to your librarian. If you have any questions, please do not hesitate to reach out to our customer success team. Login processing Ресуспендируют лиофилизированные праймеры в нуклеазах без воды до конечной концентрации 10 мкМ. Дополнение с ингибитором протеаз перед использованием и сохранить буфер на льду при использовании. Количественно клетки с использованием автоматического счетчика клеток. В отдельную пробирку, разбавляют 4 мкл липидной основе трансфекции реагента в мкл сыворотки среды на трансфекцию 8 мкл в мкл для двух образцов. Добавьте мкл смеси реагентов трансфекции для каждой плазмиды раствора и инкубируют в течение 20 мин при комнатной температуре. Заменить PBS с мкл не содержащей сыворотки среде. Через 20 мин добавл ют мкл реагента для трансфекции: плазмидной смесь со стадии 2. Осторожно снимите трансфекции среды с помощью вакуумной аспирации и заменить 2 мл DMEM, дополненные. Вернуть клетки в инкубатор для ночной культуры. Примечание: HEKT клетка свободно присоединенная. Замена СМИ должна выполняться с осторожностью, чтобы ограничить удаление клеток из нижней части блюда или колбы. Культуры клеток в течение ночи. RD клетки представляют собой коммерчески доступная человеческая линию клеток рабдомиосаркомы. День 5 Повторные День 4. HEKT клетки могут быть отброшены после того, как вирусные средства массовой информации была собрана. Центрифуга клетки при мкг в течение 5 мин при комнатной температуре и аспирата средств массовой информации. Примечание: Используя более высокий процент FBS может вызвать засорение в процессе проточной цитометрии Фильтрующие элементы для проточной цитометрии. С помощью пипетки применять 1 мл суспензии клеток RD через фильтр 30 мкм в проточной цитометрии трубок и трубок место на льду. Клетки возможно, должны быть культивировали в течение 10 - 14 дней, прежде чем перейти к шагу 3. Добавить 6 мкл миРНК конкретного реагента для трансфекции до мкл сыворотки среды и разделить мкл этой смеси на две трубки, по одному для каждой из двух смесей MIR из шага 3. Смешайте мкл каждой смеси микроРНК со стадии 3. Инкубируют в течение 20 мин при комнатной Temperature. В луночный планшет, добавьте мкл на лунку микроРНК или смеси отрицательного контроля смеси со стадии 3. Сбор клеток через 2 дня для анализа с использованием соответствующего буфера см. Изображение в каждую лунку , каждые 2 ч с целью 10X с использованием автоматизированного формирования изображения живых клеток Количественная концентрации РНК. Оттепель и работать с РНК на льду. Для количественной оценки концентрации РНК, измерения УФ-поглощению при нм с помощью планшет-ридер спектрофотометра в соответствии с протоколом производителя. Развести все образцы к самой низкой концентрации с нуклеазы без воды. Запуск циклов RT в соответствии с протоколом изготовления. Развести 20 мкл реакции на мкл с 80 мкл нуклеазы без H 2 O. Выполнить КПЦР в соответствии с протоколом производителя для флуоресценции на основе мастер-микс. Примечание: Особые меры предосторожности следует соблюдать осторожность при работе с РНК, чтобы избежать контакта с РНКазами, например, с использованием РНКазы свободной пластики и реагентов. Номера одноразовое оборудование должно быть обработано перед использованием, чтобы удалить РНКазы. По вакуумной аспирации, удалить пермеабилизации буфер и промыть три раза PBS. Готовят разбавления первичного антитела. Удалить блокирующий буфер с помощью вакуумной аспирации и дозирования мкл разбавленного первичного антитела в каждую лунку. После инкубации, мыть клетки два раза PBS. Добавьте далеко красный краситель-конъюгированные вторичные антитела с использованием 1: разбавление. Удалить PBS и добавьте мкл смеси в каждую лунку. Инкубирую при комнатной температуре в течение 1 ч в темноте. Клетки изображения на X общее увеличение на перевернутой эпифлуоресцентной микроскопа с длиной волны возбуждения - нм. Вестерн блот Промыть клетки от 3,6 раза охлажденным льдом PBS. На льду, лизируют клетки с 50 мкл 1x RIPA буфера с добавлением 1x ингибиторов протеаз. Количественно общий белок с использованием анализа Брэдфорда и аликвота равного количества белка в новые 1,5 мл микроцентрифужных пробирок. Бринг образцов в равном объеме с использованием RIPA буфера и 3x Laemmli загрузки буфера с добавлением 2-меркаптоэтанола. Количество белка загружены диапазоны в зависимости от клеточной линии. В некоторых случаях, мкг общего белка необходимы для обнаружения E-кадгерина в мезенхимальных клеточных линиях. Перенос белков на нитроцеллюлозную мембрану в течение 2 ч при 50 V в 1x Трис-глицин буфере передачи. Инкубируйте мембраны в течение 1 ч при комнатной температуре с инфракрасным флуоресцентной связью secondarу антитела 1: разбавления в блокирующем буфере, как описано выше. Изображение мембрана с использованием стандартной ИК-обнаружения флуоресценции. Анализы роста Анкерного-независимой Примечание: Для детального мягкого агара протокола анализа, см Микроволновая печь дополнительно в течение 30 с в то время, по мере необходимости, или до тех пор, пока полностью расплавленным. Добавить смесь встороны хорошо, что гарантирует отсутствие пузырьков формы и дайте отстояться в течение 30 мин при комнатной температуре. В то время как нижний слой твердеть, готовит каждую группу RD клеток, трансфецированные на шаге 3 аспирации средства массовой информации и промываниях один раз 1 мл PBS. Нейтрализовать трипсина в 0,8 мл среды и растирают клеток с образованием одной клеточной суспензии. Передача клеточной суспензии в 15 мл коническую трубку. Граф клеток и рассчитать объем клеточной суспензии, необходимую для клеток на лунку. Хорошо перемешать растирание клеток несколько раз и добавьте смесь клеток в лунки, не обеспечивает никакой формы пузыри, и пусть затвердеваем в течение 20 мин при комнатной температуре. Добавляют 2 мл дополненных СМИ в каждую лунке и перемещать пластины инкубатора. Изменение средств массовой информации раз в неделю в течение недель или до многоклеточные колонии образуют. Будьте осторожны, чтобы не прикасаться агаром при удалении средств массовой информации с помощью вакуумной аспирации. В качестве альтернативы, использовать P, чтобы удалить верхний слой жидких сред. Изображение скважин на 40Х общее увеличение на инвертированный микроскоп. Провести анализ на ImageJ для зоны колонии и числа. MET индукции уменьшает образование колонии способность клеток саркомы Положительная регуляция эпителиальных белков сопровождалось подавлением генов мезенхимальные Zeb1 и Notch1 рис 3A , которые известны мишени для микроРНК Play Video. Cite this Article Ware, K. Before you can use the favorites feature you must sign in or create an account. Continue with Shibboleth or Forgot Password? Please enter your email address so we may send you a link to reset your password. You might already have access to this content! Please enter your Institution or Company email below to check. Please enter an institutional email address. Check access. Create Account. Forgot Password? Reset Password. Phone number. Request trial. Thank You! A JoVE representative will be in touch with you shortly. Waiting for verification email? Please click here to activate your free 2-hour trial. If you do not wish to begin your trial now, you can log back into JoVE at any time to begin. Enable Javascript for audio controls. Get cutting-edge science videos from J o VE sent straight to your inbox every month. We use cookies to enhance your experience on our website. Continue Learn more Close.

Гранада купить Бошки, Кокаин