Грац бесплатные пробы кокаин

__________________________________

Гарантии! Качество! Отзывы!

__________________________________

✅ ️Наши контакты (Telegram):✅ ️

>>>🔥🔥🔥(ЖМИ СЮДА)🔥🔥🔥<<<

✅ ️ ▲ ✅ ▲ ️✅ ▲ ️✅ ▲ ️✅ ▲ ✅ ️

__________________________________

⛔ ВНИМАНИЕ!

📍 ✅ Используйте ВПН (VPN), если ссылка не открваеться!

Грац бесплатные пробы кокаин

📍 В Телеграм переходить только по ссылке что выше! В поиске тг фейки!

__________________________________

Грац бесплатные пробы кокаин

Смотреть комментарии. Правительство Германии после продолжительных дискуссий одобрило проект закона о легализации выращивания и потребления каннабиса конопли. Пока трудно сказать, будет ли он принят парламентом, но очевидно, что политика в отношении легких наркотиков в ФРГ меняется: есть большие подвижки в сторону легализации наркотических средств и помощи наркозависимым. Почему — и к чему это может привести? Потребление наркотиков как таковое в ФРГ никогда не было под полным запретом. Уголовному преследованию подвергалось лишь обладание запрещенными наркотическими средствами, например кокаином, героином или марихуаной. При этом медикаменты на основе конопли применяются для обезболивания и лечения многих психических недугов, так что для использования в медицинских целях каннабис был легализован в ФРГ несколько лет назад. Теперь же закон предусматривает свободное обладание сортами каннабиса в объеме до 25 граммов. Кроме того, разрешено то, что многие берлинцы и так уже давно практикуют на своих балконах, — выращивание частными лицами до трех кустов конопли. Еще одна любопытная новинка: объединения граждан численностью до человек могут организованно выращивать коноплю для частного потребления. Однако для членов таких организаций предусмотрены определенные нормы: 25 граммов марихуаны в день и до 50 граммов в месяц. Потребление марихуаны не разрешено на территории этих объединений и в радиусе метров от них, а также от детских учреждений и школ. Теплицы для выращивания конопли должны быть из непрозрачного материала, пакеты с марихуаной тоже. Кроме того, запрещена реклама каннабиса. Поскольку Германия организована по федеральному принципу, за соблюдением закона должны следить правоохранительные органы 16 земель ФРГ. Ожидается также дополнение закона о дорожном движении: министерство транспорта должно определить максимально допустимое количество потребления наркотика для водителей. Принятие закона о легализации каннабиса — дело не само собой разумеющееся. Предполагается, что парламент бундестаг и представительство федеральных земель бундесрат проголосуют за него до конца текущего года. Аргументы противников закона касаются того, не приведет ли легализация марихуаны к росту потребления этого наркотика. Защитники нововведения считают, что если статистика потребления с началом будущего года и подскочит, то только из-за открытого признания уже и так существующих случаев — тайное станет явным. Каннабис — наиболее часто потребляемый в стране нелегальный наркотик. Консервативные политики указывают на то, что легализация облегчит доступ детей и подростков к легким наркотическим средствам, а потребление марихуаны станет первой ступенью к образованию наркозависимости. Между тем куда более популярен среди молодежи легальный наркотик — алкоголь. Сторонники легализации марихуаны доказывают, что, несмотря на возможные негативные последствия ее потребления, она в целом безопаснее, чем алкоголь. Защищают проект закона и многие юристы, подчеркивая, что в нем содержатся строгие ограничения потребления каннабиса несовершеннолетними. В дебатах упоминается также финансовая выгода. За счет того, что меньше случаев будут подвергаться уголовному преследованию, правоохранительные органы получат значительное облегчение. Предполагается, что экономия от этого составит около миллиарда евро в год. Уполномоченный правительства ФРГ по наркотическим средствам Буркхард Блинерт , хоть и с оговорками, выступает за легализацию марихуаны. По его словам, начинать надо со школы. Одновременно политик призвал покончить с 'ментальностью запрета'. Он признал, что 'школа без наркотиков — это, откровенно говоря, нереализуемая мечта и иллюзия, а не реальность'. Однако в дискуссии упоминается и опыт других стран, где легализация марихуаны привела к росту ее потребления. Глава управления по внутренним делам правительства Гамбурга Энди Гроте в интервью телеканалу NDR высказал опасения, что низкие цены на каннабис вкупе с высокой степенью воздействия этого наркотика 'приведут к смешению легального и черного рынка'. Гроте считает, что борьба против черного рынка и одновременный контроль за легальным выращиванием и потреблением марихуаны приведут к возникновению дополнительной бюрократии. Дискуссия в обществе не утихает. Вот что думают о легализации каннабиса берлинцы, с которыми поговорило Радио Свобода. Программист Маркус Дам родом из западной части Берлина. Он рассказал, что помнит с детства места, где можно было купить любой вид наркотиков, а в парках и на концертах запах марихуаны был неистребим. То, что сейчас тайное становится явным, по его мнению, не ухудшит ситуацию. По словам Маркуса, он больше боится низкого порога доступности алкоголя. Легализация марихуаны, по его мнению, снимет с нее ауру запретного плода, который перестанет быть особенно сладок для малолетних. Учитель латинского и английского языков Свен Лоренц рассказал, что в годы студенчества сам хранил дома коробочку с марихуаной. Тогда Западный Берлин был меккой западных рокеров. В конце х тут жил Ник Кейв, еще раньше — Дэвид Боуи. Свен сам писал о рок-музыке в различных журналах, часто посещал концерты. Ни для кого не было секретом, что там многие курили марихуану. Его друзья выращивали ее на своей террасе. Берлинский адвокат Торстен Хиппе признаётся, что раньше был за легализацию каннабиса, потому что аргументы насчет 'первой ступени на пути к тяжелым наркотикам' не казались ему убедительными. В конце концов, большинство тех, кто начинает курить марихуану, раньше уже потребляли алкоголь и табак, так что именно эти субстанции можно считать 'первоначальными наркотиками'. Аргумент об особой опасности каннабиса ему также не казался убедительным: алкоголь и табак тоже вредят здоровью. Но позже у Торстена возникли сомнения. Субстанции, содержащиеся в марихуане, меняют психику подзащитных, убедился адвокат по уголовным делам за долгие годы работы. Теперь он скорее выступает против легализации. Председатель Немецкого общества по наркологии Ульрих Пройс также отмечает, что около десяти процентов регулярных потребителей каннабиса страдают психическими расстройствами. Эксперты университета города Ульм выяснили, что с по годы в Германии количество психозов, связанных с потреблением этого наркотика, увеличилось в 8 раз. Пройс указывает на опасность долговременных расстройств нервной системы у молодых людей, постоянно курящих марихуану, — снижения интеллектуальных способностей и потери концентрации. Он также предупреждает, что сравнение алкоголя, табака и каннабиса неприемлемо, поскольку у них разные модели воздействия на психику. Глава отделения патологической токсикологии университетской клиники Фрайбурга профессор Фолькер Аувертер , в свою очередь, указывает на риски при потреблении нечистого каннабиса. Синтетические добавки могут быть намного опаснее, говорит он, поэтому путем легализации и установленных в законе стандартов качества можно снизить влияние ядовитых веществ. Но не марихуаной единой. Давно отказавшись от подхода 'держать и не пущать', до сих пор популярного в более консервативных странах, в том числе в России, Германия, особенно федеральная земля Берлин, довольно далеко ушла по пути предупреждения отравлений тяжелыми наркотиками. В июне после продолжительных дебатов управление по здравоохранению столичного сената завело легальную 'проверку наркотиков' Drugchecking. Поводом стала смерть летней девочки от таблетки с наркотической субстанцией. В трех пунктах в Берлине сотрудники Института по судебной и социальной медицине начнут проводить бесплатные, анонимные и легальные анализы качества таких наркотиков, как каннабис, кокаин, экстази, Speed или LSD. Результат теста можно будет узнать в течение трех дней также анонимно по телефону. Проект по анализу наркотиков должен снизить риск их потребления, в том числе передозировку. Фармакологический директор проекта Тибор Харрах полон оптимизма: 'Мы сможем избежать чрезмерного ущерба для здоровья и достучаться до наркозависимых, которые иначе не смогли бы обезопасить себя'. В Германии давно практикуется заместительная медицинская терапия для зависимых от героина и других тяжелых наркотиков. Автор нашумевшей книги о наркозависимых подростках конца х годов 'Мы, дети с вокзала Цоо' Кристиане Фельчеринов рассказала Радио Свобода, что именно заместительная терапия помогла ей встать на ноги и возвратиться к нормальной жизни, в том числе вернуть родительские права на сына. Жизнь в Берлине стала быстрее, жестче и агрессивнее, говорит Кристиане, сидя на лавочке в одном из самых известных очагов наркодилерства в центре города — Герлитцер-парк. По наблюдению НКО, помогающих наркозависимым, потребление наркотиков все чаще происходит в парках и на станциях метро. Это вредит имиджу города и создает большие неудобства для жителей. В качестве реакции на это эксперты требуют вместо 'облав на наркоманов' открывать пункты, в которых наркотики могут потребляться без свидетелей. Мальте Дау из организации Fixpunkt в районе Нойкелльн рассказывает, что уже 20 лет члены его НКО раздают потребителям наркотиков чистые шприцы, фольгу и ложки. Цель проекта — 'освободить наркозависимых от негативных последствий и сопутствующих явлений'. В последнее время фракция 'Зеленых' в берлинском парламенте предлагает легализовать не только каннабис, но и кокаин, экстази и амфетамины. Ее председатель Вернер Граф заявил в день так называемого 'Конопляного парада': 'Право на эйфорию в таком городе свободы, как Берлин, должно быть само собой разумеющимся'. По его словам, уголовная ответственность — 'неправильный ответ безобидным любителям марихуаны', а криминализация наркотиков — реликт прошлого века. При этом никто не отрицает необходимости разъяснительной работы, которая позволяла бы людям понять весь ужас наркозависимости и глубину проблем, которые она приносит. Несмотря на шаги к частичной легализации каннабиса, сопротивление подобным планам в немецком обществе велико. Но вместе с тем укоренено убеждение, что наркозависимым людям надо помогать, вместо того чтобы уравнивать их с преступниками. Еще в конце х мало кому могло прийти в голову, что когда-нибудь марихуана станет легальной. Быть может, еще через тридцать лет жители Германии будут так же естественно относиться и к легализации некоторых других наркотиков. Это, однако, возможно при одном условии: когда свобода подразумевает ответственность. Ссылки для упрощенного доступа Вернуться к основному содержанию Вернутся к главной навигации Вернутся к поиску. Проекты Кино. Реалии Север. Реалии Фактограф. Социальные сети. Предыдущий Следующий. Проект Европа. Право на эйфорию. Германия на пути к частичной легализации наркотиков. Анна Розэ. Смотреть комментарии Распечатать. Легальная конопля — на балконе и в теплице Потребление наркотиков как таковое в ФРГ никогда не было под полным запретом. Смотри также Здравомыслие и предрассудки. Легализуют ли марихуану в Украине? Школа без наркотиков — это, откровенно говоря, нереализуемая мечта и иллюзия, а не реальность. Смотри также Почти Нидерланды. В Грузии разрешили курить марихуану. Как было, так и будет, только народ перестанет прятаться по кустам, а полиция прекратит заниматься ерундой. Право на эйфорию в таком городе свободы, как Берлин, должно быть само собой разумеющимся. Установите Мобильное приложение Радио Свобода. Читайте Свободу в Телеграме. Подпишитесь на Свободу в Google новостях. Орбан объяснил, почему снял вето на помощь Киеву. ЦИК сообщит о недостатках в подписях Надеждину и Малинковичу. Выбор Свободы. Украина Кто проживает на дне океана. Атака на ракетный катер 'Ивановец'. Атлас Мира 'Актив' Путина. Создаст ли еще Москве проблемы война в Сирии. Культура политики Евгений Федоров: 'Наши песни — о том, как зреет вулкан'. Украина Европа против Орбана. Евросоюз договорился о помощи Украине. Экономика Золото в бегах. Можно ли вывести бизнес из России, не потеряв деньги? Популярное 1 'Я выбираю действие'. Путина требуют снять с выборов 2 Китай Европе не замена. Который 'не вечен' 6 Дьявол в деталях. Елена Фанайлова — о фильме 'Мастер и Маргарита'. Студия подкастов Свободы. Newsletter Subscription. Видеоновости Свободы: Что происходит?

Грац бесплатные пробы кокаин

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

Ривьера-Майа цена на Героин, Метадон

Грац бесплатные пробы кокаин

Право на эйфорию. Германия на пути к частичной легализации наркотиков

Закладки Лирика капсулы 300 мг купить Ча-Ам

Грац бесплатные пробы кокаин

Купить Соль, альфа pvp закладку Лыткарино

Право на эйфорию. Германия на пути к частичной легализации наркотиков

Паразита-спасательных и преобразование анализа с THP1 клеток, инфицированных 2. Поддержание и субкультуры Leishmania donovani Promastigotes культуры. Посев и дифференциации клеток THP1 в луночных микропланшетов и камеры стекло культуры слайдов. Примечание: THP1 клеток, которые обычно растут в подвеске, которые дифференцированы в приверженца макрофагов. Окрашивание палаты слайдов, флуоресцентный микроскоп изображений и анализа изображения для количественного определения инфекции и эффект лечения наркотической. Паразит-Rescue-Преобразование-анализа: контролируемая лизис L. Количественный анализ был сделан для цифрового анализа изображений-Директ-Счетчик анализа и паразитов-Rescue-Преобразование-анализа для 24, 48, 72 и 96 ч после лечения наркозависимости. В прямой метод подсчета, инфекции L. Infection была рассчитана с цифровыми изображениями зараженных THP1 клетки, обработанные различными стандартными препаратами в различных разведениях для различных временных интервалах рис. Анализ alamarBlue обычно используется для Leishmania promastigotes анти-leishmanial наркотиков отбора. Анализ изначально был стандартизирован и оптимизирован для контролируемого лизис Leishmania-инфицированных THP1 клеток. Цель состояла в том, чтобы оптимизировать условия для моющих средств Treтерпимостью и лечением, которые дают почти полный лизис THP1 клетки с минимальным влиянием на жизнеспособность спас amastigotes. Неповрежденном THP1 клеток, инфицированных amastigotes Leishmania можно увидеть на рисунке 1а. Рост этих превращается promastigotes может быть количественно контролировать с добавлением alamarBlue и измерения флуоресценции от планшетного. Лечение NP рис. Лечение с помощью Tween 20 рис. Процедура лечения SDS является одинаковым для одной или несколькими плитами. В нескольких пластин, SDS лечения была реализована по столбцам с многоканальной пипетки. Во время начальной стандартизация анализа, пластины были проверены под микроскопом для не-внутреннее promastigotes. Не менее пяти стирок были необходимы для удаления паразитов до шага 5 лечению инфицированных клеток макрофагов со стандартными соединениями и трех стирок было необходимо перед пунктом 7 лечения SDS. Таким образом, клетки промывали 8 раз и не видно, не внутреннее promastigotes осталось до контроля лизис инфицированных клеток THP1. Оба ядер макрофагов и внутриклеточный ядер Leishmania с характерным ДНК kinetoplast наблюдались при освещении лампами дневного фильтра рис. Когда оба изображения были объединены, контуры THP1 клеток с внутриклеточными amastigotes было видно более четко рис. Программное обеспечение ImageJ была использована для анализа этих изображений. ImageJ была разработана с открытой архитектурой, которая обеспечивает расширяемость с помощью плагинов Java и запись макросов. Пользовательские сбора, анализа и обработки плагины могут быть разработаны с использованием встроенного редактора ImageJ и компилятора Java. Сотовые счетчик был найден в Анализировать вариант в плагине программного обеспечения. Образ был инициализирован и клеточных счетчиков типа 1 был выбран для THP1 сядрами локоть и клеточных типа счетчика 2 был выбран для паразита ядер рис. Дифференциальный подсчет был сделан, по крайней мере, THP1 ядрах клеток и внутриклеточных amastigotes присутствует в этих THP1 клеточных ядер. Сравнение паразита-спасательных анализа и метод анализа изображений было сделано для оценки инфекционность THP1 клеток с разными макрофагов. Promastigotes отношения Рисунок 4 Рисунок 5 представляет собой дифференциальный инфекционность в THP1 клеток при различных макрофагов: промастиготы отношения. Оба метода показали сопоставимые результаты и макрофагов: промастиготы соотношении дали оптимальную и воспроизводимые инфекционности. Leishmania-инфицированных THP1 клетки обрабатывали различными концентрациями стандартныхNTI-leishmanial наркотики именно амфотерицин B, Пентамидин и милтефозина для разных интервалов времени в диапазоне от 24 до 96 часов. IC 50 препаратов были вычислены ExcelFit и представлены в таблице 1. Digital-анализа изображений-Директ-Счетчик анализа и паразитов-Rescue-Преобразование-анализа показали сопоставимые результаты. Digital-анализа изображений-Директ-Счетчик анализа была менее оптимальным в первые моменты времени 24 и 48 ч т наркотиковreatments, в то время как паразитов-Rescue-Преобразование-анализа показали результаты более соответствует сообщил значения во всех точках времени, в течение ч после медикаментозного лечения. Эта разница в результатах с Digital-анализа изображений-Директ-Счетчик анализа и паразитов-Rescue-Преобразование-анализа может быть связано с наличием нежизнеспособных amastigotes во время раннего периода лечения наркомании в Digital-анализа изображений-Директ-счетной -анализа. Рисунок 1. Микроскопического зрения Leishmania donovani amastigotes спасению и преобразованию в promastigotes. Рисунок 2. Оптимизация контролируемых лизис инфицированных клеток THP1 для достижения максимальной спасения живых Leishmania amastigotes donovani и превращение их в promastigotes. Каждая панель представляет собой среднее дубликатов наблюдений. Нажмите, чтобы увеличить показатель. Рисунок 3. Флуоресцентные цифровое изображение дифференцированные клетки THP1 инфицированных в пробирке с Leishmani donovani amastigotes. Характерной kDNA также можно увидеть с каждого ядра паразита. Ядро макрофагов мН 1 и паразит ядер пН 2 может быть дифференциально отмечены и дифференцированно подсчитываются ImageJ анализ программного обеспечения для количественной оценки инфекции. Рисунок 4. Сравнение цифрового анализа изображений-Директ-Счетчик анализа нижняя панель и паразитов-Rescue-Преобразование-анализа верхняя панель. Макрофагов: промастиготы соотношении дали оптимальную инфекции. Как показали сопоставимые результаты. Паразит-спасательных анализ показал некоторые фоновые значения. Каждая полоска показывает среднее повторяющиеся значения. Промастиготы отношение. Рисунок 6. Рисунок 7. Сравнение цифрового анализа изображений-Директ-Счетчик анализа и паразитов-Rescue-Преобразование-анализа на анти-leishmanial скрининга лекарственных средств Amophotericin B. Инфицированных макрофагов обрабатывают различными концентрациями стандартный анти-leishmanial препарата для разных периодов. Рисунок 8. Сравнение цифрового анализа изображений-Директ-Счетчик анализа и паразитов-Rescue-Преобразование-анализа дляNTI-leishmanial скрининга лекарственных средств Пентамидин. Рисунок 9. Сравнение цифрового анализа изображений-Директ-Счетчик анализа и паразитов-Rescue-Преобразование-анализа на анти-leishmanial скрининга лекарственных средств Mitefosine. Инфицированных макрофагов обрабатывают различными концентрациями стандартный анти-leishmanial препарата для различных периодов времени. Таблица 1. Сравнение цифрового анализа изображений-Директ-Счетчик анализа и паразитов-Rescue-Преобразование-анализа на анти-leishmanial наркотиков отбора. Есть несколько методов, доступных для анти-leishmanial скрининга препаратов на основе макрофагов амастигота моделей. Анализы можно сделать с макрофагами, полученная от животных-хозяев именно перитонеального экссудата клетках PEC , моноцитов периферической крови клеток МПК 6 или костного мозга макрофаги БММ или в моноцитарного клеточных линий, таких как мышь J и RAW Анализы, которые используют деление клеток-хозяев, должны гарантировать, что смешанное воздействие препарата деятельности на обоих паразитов и количество клеток-хозяев считаются. Дифференцированной первичной макрофаги, собранных из различных источников, таких как мыши и крысы не являются деления в природе, но эти клеточные препараты могут не иметь однородную клеточных популяций. Моноцитарного клеток-производных клеточных линий являются однородными по своему характеру и лучшие модели для макрофагов амастигота скрининг. Из различных клеточных линиях моноцитов, Diffrentiated THP1 клеток моноцитов человека острую линию клеток лейкемии могут образовываться без деления монослоя и предлагают привлекательную альтернативу первичной изолированной макрофагов. Макрофагов амастигота скрининг можно сделать несколькими способами. Классическая микроскопической оценки основаны на прямом клеток и паразитов подсчета 9 является трудоемким. Отсутствие автоматизации ограничивает полезность этого анализа. Подсчет клеток занимает много времени и может дать неточные определения IC 50 значений, так как определение жизнеспособности паразитов через процедуру окрашивания трудно. Многие флуоресцентных красителей и моноклональные антитела могут быть использованы для проточной цитометрии анализа 10, 11, но эти анализы также ограничены из-за меньшей чувствительности и ограничение интервал времени с наркотиками лечение только один день. Есть несколько ген-репортер анализов доступны для количественного роста внутриклеточных amastigotes 12,13, Автоматред скрининга возможно с помощью репортер гены, но эти методы также имеют определенные недостатки. Во-первых, большинство из этих анализов требует выбор препарата для поддержания эписомные выражение репортер генов, которые не могут быть идеально подходит для экспериментов скрининг наркотиков. Путь, по которому репортер ген вводят также может влиять на физиологические свойства паразита и оказывать влияние на обследование. Если репортер ген является частью эписомные плазмиды, относительно выхода репортер может зависеть от числа копий плазмиды трансфицированных которая варьирует от клетки к клетке , а не на активность препарата Некоторые репортер паразитов, которые трансформируются паразиты не нужно селективного давления для поддержания ген-репортер, однако, не может быть биологические последствия либо, нарушая геномной архитектуры или просто присутствие чужеродных белков Репортер В некоторых ген-репортер на основе анализов, естьвопросы чувствительности и фоновой активности Самое главное, многие из корреспонденту экспрессии генов анализов, особенно один с GFP репортер gene15, не могут различать живые и мертвые внутриклеточных amastigotes. Анализы на основе гена люциферазы репортера и различать живые и мертвые внутриклеточных amastigotes, но подложкой и буфером для лизиса клеток для этих анализов дороги для крупномасштабного скрининга Чтобы преодолеть эти недостатки и ограничения предыдущих макрофагов амастигота на основе скрининга, мы разработали и оптимизировать этот паразит-спасательных и преобразование анализа. Этот анализ основан на THP1 клетки, которые имеют хорошую однородность и без деления в природе, как клетки-хозяина. Паразит-Rescue-Преобразование-анализа анализа, описанного здесь сравнимы с анализом на основе цифрового анализа изображений-Директ-счетной внутриклеточных amastigotes. Флуоресцентные и DIC микроскопии, цифровых мнимойэлектронной анализов ImageJ для дифференциального подсчета ядер макрофагов и ядер паразитов были доработаны микроскопический анализ счета. Захват изображений с люминесцентным светофильтров и дифференциального интерференционного контраста DIC фильтры улучшить качество цифрового изображения для более точного подсчета внутриклеточные паразиты. Оба люминесцентных и DIC изображения могут быть объединены для получения цифровых изображений с четкими контурами макрофагов клетки и внутриклеточные флуоресцентные ядер. Ядрах макрофагов и ядер паразит может быть дифференциально признаны ImageJ. Таким образом, оба Digital-анализа изображений-Директ-Счетчик анализа и паразитов-Rescue-Преобразование-анализа имеют потенциал для автоматизации и применения к крупномасштабной проверки. Важные шаги в паразита-Rescue-преобразования-анализа являются: а многократных стирок из THP1 клеточных культур после воздействия Leishmania promastigotes, чтобы обеспечить практически полное удаление не-стажеробобщенные promastigotes и б контролируемое лизис инфицированных клеток с THP1 SDS. Обе меры могут также управляться с помощью автоматизации и не должны идти на компромисс с пропускной способностью анализа. Паразит-Rescue-Преобразование-анализа дает значительные преимущества по сравнению с существующими микроскопические, ген-репортер и анализы анализа изображений. Анализ простой, надежной и воспроизводимой, может быть автоматизирован для крупномасштабного скрининга и, следовательно, должны иметь важные приложения в скрининг больших библиотек соединений для новых анти-leishmanial лекарственных препаратов. Кроме того, анализ может быть применен и для оценки инфекционной клинической, а также, лабораторных штаммов Leishmania в пробирке. Jain, S. To learn more about our GDPR policies click here. If you want more info regarding data storage, please contact gdpr jove. You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions jove. Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login. You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free. To get started, a verification email has been sent to email institution. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your 'Spam' folder. Your access has now expired. Provide feedback to your librarian. If you have any questions, please do not hesitate to reach out to our customer success team. Login processing Это важно для поддержания их трансформации способности. Поддержание и субкультуры Leishmania donovani Promastigotes культуры Поддерживать L. Субкультура L. Caution: все средства массовой информации и решения должны быть доведены до комнатной температуры перед использованием. Подготовка разбавленный THP1 культуре клеток из 2. Подготовлено 20 мл культуры для каждого луночный планшет и 4 мл культуры для каждого а камера слайд. Для сравнения цифрового анализа изображений-Директ-Счетчик анализа и паразитов-Rescue-Преобразование-анализа, созданная анализов одновременно в ясный, с плоским дном, луночный планшет и камерой, стекла, микроскопические слайды культуры. Подготовка разбавленной культуры L. С шагом 3,5 после ночного дифференциации THP1 культуре клеток вынуть пластины и камеры слайдов, удалить средних и мыть клеточных культурах один раз бессывороточной RPMI Установить контроль скважин THP1 клетки без паразитов и паразитов без THP1 клеток в каждой пластины и а слайды камеры. Тестирование каждого лекарственного соединения в 6 концентрациях. Вымойте культуре тарелки и камеры слайды инфицированных L. Нескольких стирок, необходимые для обеспечения полного удаления не-внутреннее promastigotes. Добавить мкл среды из серийно разбавленных стандартных анти-leishmanial наркотики или исследуемых соединений в каждую лунку или камеры. Окрашивание палаты слайдов, флуоресцентный микроскоп изображений и анализа изображения для количественного определения инфекции и эффект лечения наркотической После 48 ч инкубации, мыть камеру слайд 3 раза бессывороточной RPMI Снимите пластиковые камеры с горками и зафиксировать клетки путем погружения слайды в метаноле в течение 30 сек. Оставьте слайды в био-капот под поток воздуха для сушки. Пятно слайды в условиях низкой освещенности с разбавленным Зеленый SYBR я пятно раствор в течение 15 мин при комнатной температуре, промывают один раз водой и оставить слайдов под поток воздуха для сушки. Захват цифровых изображений THP1 клетки: без инфекции пробел , с инфекцией контроль , инфицированные клетки, обработанные различными стандартными препаратами или тестируемых соединений в различных разведениях рис. Граф ядер макрофагов большой и паразит ядер с небольшим kinetoplast с использованием ImageJ рис. Выразите данные, как количество amastigotes на преобразован THP1 клеток. Добавить 10 мкл alamarBlue в каждую лунку а ррует. После инкубации в течение ночи, читать пластины для стандартных флуоресценции на Fluostar Galaxy флуориметра BMG Лаборатория технологий в нм возбуждения нм излучения. Подготовка дозы кривые отклика рост процентов по сравнению с концентрацией соединения наркотиков или тест с ExcelFit рис. Стандартизация THP1 клетки отношение паразитов, следуя протоколу, описанному выше для THP1 клеток посева и Leishmania промастиготы инфекции раздел 3 и 4 , за исключением использования разн. Настройка эксперимента, как в камерой слайд для анализа изображений и луночный планшет для паразита-спасательных анализ форматов для сравнения паразита спасательных и анализы анализа изображений. THP1 клетки соотношение составляет паразитов и других аналогичных условиях, как указано выше разделах Количественный анализ был сделан для цифрового анализа изображений-Директ-Счетчик анализа и паразитов-Rescue-Преобразование-анализа для 24, 48, 72 и 96 ч после лечения наркозависимости В прямой метод подсчета, инфекции L. Play Video. Cite this Article Jain, S. Before you can use the favorites feature you must sign in or create an account. Continue with Shibboleth or Forgot Password? Please enter your email address so we may send you a link to reset your password. You might already have access to this content! Please enter your Institution or Company email below to check. Please enter an institutional email address. Check access. Create Account. Forgot Password? Reset Password. Phone number. Request trial. Thank You! A JoVE representative will be in touch with you shortly. Waiting for verification email? Please click here to activate your free 2-hour trial. If you do not wish to begin your trial now, you can log back into JoVE at any time to begin. Enable Javascript for audio controls. Get cutting-edge science videos from J o VE sent straight to your inbox every month. We use cookies to enhance your experience on our website. Continue Learn more Close.

Купить Мефедрон, меф Римини телеграм бот