Экстази Рагуза Италия
Экстази Рагуза ИталияЭкстази Рагуза Италия
• • • • • • • • • • • • • • • • •
Экстази Рагуза Италия
• • • • • • • • • • • • • • • • •
Гарантии ❗ Качество ❗ Отзывы покупателей ❗
• • • • • • • • • • • • • • • • •
👇 👇 👇 👇 👇 👇 👇 👇 👇 👇 👇 👇
Наши контакты:
▶️▶️▶️ (НАПИСАТЬ ОПЕРАТОРУ В ТЕЛЕГРАМ)️ ◀️◀️◀️
👆 👆 👆 👆 👆 👆 👆 👆 👆 👆 👆 👆
• • • • • • • • • • • • • • • • •
🚩 ИСПОЛЬЗУЙТЕ ВПН (VPN), ЕСЛИ ССЫЛКА НЕ ОТКРЫВАЕТСЯ!
🚩 В Телеграм переходить только по ссылке что выше! В поиске тг фейки!
• • • • • • • • • • • • • • • • •
Экстази Рагуза Италия
Сегодня утром финансисты провинциального командования Катании изъяли в городе 67 килограммов наркотиков, в том числе кокаин и гашиш. По версии следователей, наркоторговля стартовала из Испании, затем приземлилась в Северной Италии, а затем на Сицилии. Их арестовали за торговлю и хранение с целью сбыта наркотиков. В рамках первого вмешательства в Турине летнего мужчину остановили в его машине с мадридским номером. Финансисты Катании в сотрудничестве с Туринским желтым пламенем обнаружили в пассажирском салоне 13 килограммов кокаина. Во время второго вмешательства удалось изъять 1,07 килограмма кокаина в машине летнего субъекта, спрятанного в рюкзаке. К Комизо Рагуза в третьем блиц-рейде Gdf Катании с помощью кинологических подразделений по борьбе с наркотиками Финансовой полиции Сиракузы обнаружил 53 кг гашиша в фальш-дне автомобиля, припаркованного в частном гараже колумбийской женщины. Постановление об аресте троих субъектов было утверждено следственным судьей. Все права защищены Ежедневное информационное агентство. Регистрация в суде Рима n. Редакция Via Parigi 11, Рим. Электронная почта: commerciale agenzianova. Среда, 7 февраля г. О нас Контакты Abbonamenti Area Clienti. Забыли пароль? Получить помощь. Юридическая политика, политика конфиденциальности и использования файлов cookie. Восстановление пароля. Ваш электронный адрес. Nova Agency. Июль 29 Последние новости. Intesa Sanpaolo: чистая прибыль 7,7 млрд в году. Чили: разбился вертолет, погиб бывший президент Себастьян Пинера. Пинера, 74 года, по всей вероятности, был водителем автомобиля. Тим: стол в министерстве остается открытым, профсоюзы просят гарантий по трудоустройству в SerCo. Участвующие министерства подтвердили «желание продолжить обсуждение с системной точки зрения в пользу такого стратегического сектора страны, как телекоммуникации». Тракторы у ворот Рима готовы к параду, но в префектуре нет согласия. Тракторный протест продолжается в Италии. Постоянный гарнизон расположен на окраине Рима, на Номентане. В Торре есть и другие места встречи Великобритания: Трасс создает партию «Народные консерваторы» с целью «восстановить демократическую подотчетность». Бывший премьер-министр Великобритании Лиз Трасс сегодня основала новое политическое движение Народных консерваторов, направленное на восстановление «ответственности Другие новости. Вот основные меры, присутствующие в одобренном Палатой законопроекте о капитале. Положение, инициатива правительства, состоит из 27 статей и касается нормативных аспектов регулирования коммерческих компаний с мерами, направленными на поощрение капитализации итальянских компаний. Германия: евангелическая церковь подтверждает «принятие на себя ответственности» за случаи злоупотреблений. Евангелическая церковь Германии объявила, что берет на себя ответственность за сексуальное насилие, совершенное в ее рядах. Это то, что Мелони: «Италия и Япония — две дружественные страны, которые хотят сотрудничать». Все права защищены.
Баксан купить закладку Лирику 300
Закладки Экстази Рагуза Италия
Экстази Рагуза Италия
Экстази Рагуза Италия
Стоковые фотографии по запросу Спящий бродяга
Экстази Рагуза Италия
Скорость соль кристаллы бесплатные пробы Шумерля
Системная Инъекция стволовых нервных / клеток-предшественников у мышей с хроническим ЕАЕ
Системная доставка НПС превратился в эффективный, низкий инвазивными, и терапевтически очень действенным протокола для доставки стволовых клеток в головном и спинном мозге грызунов и приматов, пострадавших от экспериментального хронического воспалительного повреждения центральной нервной системы. Эта директива возникла из обширного доказательства того, что ремонт мозг достигается после очаговой или системного трансплантации NPC в нескольких доклинических моделях неврологических заболеваний. Эти экспериментальные данные выявили маршрут доставки клеток в качестве одного из основных препятствий восстановительного лечения стволовых клеток при заболеваниях головного мозга, что требует срочного оценку. Интрапаренхимальные прививки стволовых клеток представляет собой логический подход к решению этих патологий, характеризующихся изолированных и доступных поражений головного мозга, таких как травмы спинного мозга и болезни Паркинсона. К сожалению, этот принцип плохо применима для состояний, характеризующихся мультифокальным, воспалительного и распространяемой как во времени и пространстве природы, в том числе рассеянного склероза РС. Как ориентации, такие, мозг по систэмический доставка NPC стала низкой инвазивные и терапевтически эффективный протокол для доставки клеток в головном и спинном мозге грызунов и приматов, пострадавших от экспериментального хронического воспалительного повреждения центральной нервной системы ЦНС. Или интрацеребровентрикулярное ICV инъекции; III накапливать на уровне множественной периваскулярной сайт ы воспалительного головного и спинного мозга повреждение; и IV оказывают замечательную ткани трофические и иммунные регуляторные эффекты на различных хост клеток-мишеней в естественных условиях. Здесь мы опишем методы, которые мы разработали для IV. Тем не менее, ряд вопросов, связанных с доставкой стволовых клеток в организм хозяина требуют тщательного рассмотрения, прежде чем эти экспериментальные результаты могут быть переведены в клинической практике. Особенно существенным препятствием на пути развития nonhematopoietic восстановительного лечения стволовыми клетками для мультифокальными, хронических воспалительных заболеваний головного мозга является выявление идеального маршрута впрыска NPC. Фирма понимание патофизиологии целевой болезни фокусное или мультифокальной; первичный воспалительный или первичный дегенеративный , и осторожной анализа технико-экономических и риска проблем, связанных с методами доставки в определении оптимального протокола для доставки стволовых клеток. В то время как фокусное например, болезнь Паркинсона и болезнь Хантингтона, головного и спинного мозга травматические повреждения, и инсульт , тот же самый подход может оказаться быть практически не представляется возможным в условиях, таких как MS, где мультифокальный, хронический, и пространственно распространены поражение ЦНС накапливается с течением времени. В этом последнем случае, ориентации координационные инъекции клеток в отдельных поражений также препятствует ограниченных возможностей пересаженных НПС мигрировать на большие расстояния в пределах паренхимы ЦНС, тем самым побуждая идентификацию альтернативных, более подходящих способов ЦНС ориентации с менее инвазивных трансплантации NPC. Большие перспективы появились из наблюдений, что НПС нацелены внутричерепной опухоли например,. Глиомы у мышей при введении внутривенно вне CNS9. После этого семенной в естественных условиях доказательства стволовых клеток pathotrophism 10, обширные данные были накоплены, относящиеся к целесообразности и терапевтической эффективностью системного трансплантации НПС на лабораторных животных с экспериментальным аутоиммунным энцефаломиелит ЕАЕ , в качестве модели воспалительного повреждения ЦНС, либо через внутривенное IV или интрацеребровентрикулярное ICV. NPC впрыска 1,2,5,6, Мы сначала показали, что это зависит от возможностей пересаженных НПС, чтобы цели и введите воспаленную ЦНС, и впоследствии участвовать несколько межклеточный Коммуникационные программы в конкретных микросреды в естественных условиях Для того, чтобы особый акцент сделан на ЦНС, NPC доставляются непосредственно в спинномозговую жидкость ликвор циркуляции путем инъекции ICV, или в кровоток через внутривенной инъекции. Примерами таких САМ включают рецептор для гиалуроната, CD44, и межклеточной адгезии ICAM -1 лиганд очень поздно антигена VLA -4 5,15,16 что, в лейкоцитах, несут ответственность взаимодействия с активированным эпендимных и эндотелиальные клетки , и в гораздо меньшей степени лимфоцитов функции ассоциированный антиген МАФ -1 и P-селектина гликопротеина лиганда PSGL И наоборот, НПС вводят системно в здоровых мышей не входят в ЦНС через сосудистой или спинномозговой жидкости космических маршрутов 2. Таким образом, успешная нападения на ЦНС с системной терапии NPC зависит от идентификации конкретного окна заболевания возможностей Ву , в котором головного и спинного среда шнур способствует накоплению и трансэндотелиальной миграции NPC. Такие условия обычно возникают в контексте острым и подострым воспалением Это было описано, быть зависимым от минимальной замены клеток 2 и замечательной секреции иммунных регуляторных и нейропротективных факторов паракринных пределах периваскулярной ЦНС 2,5,6,18 против не-ЦНС воспаленные участки 19,20 например, лимфатические узлы в ответ на сигнализации воспалительных клеток, вызванное проникновения иммунных клеток 5. Здесь мы опишем основные методологические аспекты системного введения соматических НПС в мышиной модели хронического ЕАЕ. Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian. Полный список всех материалов и реагентов приведены в таблице 2. Через несколько дней культивирования в CGM, свободно плавающие нейросферы начать формирование 1А и 1В. Первичные сферы собраны и механически пассировать каждые DIV. После пассирования, количество живых и мертвых клеток установлено и совокупные количества клеток нанесены для генерации кривой роста рис. Это дает представление о скорости распространения, обеспечивая тем самым косвенно параметр для оценки глобальной стабильности препарата NPC. Когда покрытием при соответствующих условиях дифференцировки, NPC выражать маркеры, характерные для трех линий нервных, фиг. Для облегчения идентификации трансплантированных клеток в живом организме, НПС трансдуцируют с лентивирусы инженерных стабильно экспресс гены-репортеры, такие как GFP. Чтобы проверить эффективность трансдукции, выражение GFP анализировали с помощью проточной цитометрии, начиная уже в проходах 3 после трансдукции клеток то есть позволяет достаточно времени, чтобы иметь надежную экспрессию введенного трансгена на уровне белка. После внутривенного NPC инъекции, значительное число введенных НПС находятся на уровне не-CNS органов, таких как печень, кишечник, селезенка, легкие и почки, но не сердце, а уже в 10 диоптрий рис. Рисунок 1. B, Нейросферы в пробирке. C , НПС культивировали как нейросферы пассируют каждые дней. Номера живых и мертвых клеток собирают и совокупные количества клеток нанесены для генерации кривой роста. Бар масштаб в B составляет мкм. НПС характеристика. Шкала бар в CE являются 50 мкм. F, проточной цитометрии экспрессии основных клеточных поверхностных молекул адгезии, регулирующих leukocyТе экстравазация в нейросферы мыши. Рисунок 2F воспроизводится от Pluchino др.. Рисунок 3. Проточной цитометрии из НПС в А. Бар масштаб вА и В составляет мкм. Рисунок 4. Функциональная характеристика хронической EAE. Рисунок 5. Е, Х-гал окрашивание в представительном спинного разделе шнура от мнимого обращению EAE мыши. Или внутривенно. Впрыском НПС синие клетки достичь практически все органы. Например легких, печени, селезенки, сердца, кишечника, почек остроумиегин 10 диоптрий F , но будут очищены от тех же органов на 30 диоптрий G. В D, зеленые клетки в это олигодендроциты, темно-синие клетки аксоны, светло-голубой клетки пересаживают НПС, оранжевые клетки астроциты, и красные клетки эндотелиальные клетки. Та BLE 1. Пять этап масштаб клинических признаков и восходящего паралича у мышей EAE. Терапии соматических стволовых клеток, основанные становятся одним из наиболее перспективных стратегий для лечения хронических воспалительных заболеваний ЦНС, таких как MS2 Хотя механизмы поддерживающие их терапевтический эффект все еще должны быть полностью выяснены, значительное влияние трансплантации NPC в различных экспериментальных моделях нейродегенеративных заболеваний привело к несколько провокационной убеждение, что стволовые клетки могут вскоре стать в исследованиях на людях. Тем не менее, прежде чем предусматривать любые потенциальные человека применения таких инновационных методов лечения, которые мы должны столкнуться с некоторыми ключевые вопросы и решения некоторых без ответов вопросы, такие как выявление идеального источника стволовых клеток для трансплантации аутологичных против аллогенной плюрипотентные против мультипотентных и лучший маршрут администрации. Нейродегенеративные заболевания различаются по своим pathophysiologies, причем некоторые из них пространственно ограничены например,. Спинного мозга вЖюри, инсульт , а другие из которых характеризуется пространственной временной распространения например MS. Оно происходит, что фокусное инъекция стволовых клеток может быть подходящим средством для лечения бывший, хотя это может быть недостаточным или просто невозможным для последнего, где присутствие нескольких сайтах повреждения мозга представляет собой дополнительную проблему, которая будет преодолена. В соответствии данные показали, что внутривенное доставки может представлять допустимый и низкую инвазивными протокол для управления клеток, поддерживаемых внутренней способности стволовых клеток к чувству окружающей среды и, в частности дом в направлении сайт ы повреждения. Тем не менее, перевод системных NPC терапии в клиниках по-прежнему препятствуют несколько ограничений, таких как возможного накопления трансплантированных клеток в периферических органах, не ЦНС например, легких, селезенки, лимфатических узлов и почек , которые могут или не могут быть сайты местных воспалительных реакций в естественных условиях. Хотя это неспецифическая асситавляет инжектированных НПС из целевой ЦНС быстро очищается у мышей с хроническим EAE2, есть свидетельства долгосрочного NPC настойчивости или в некоторых случаях исключительной таргетинга на уровне вторичных лимфоидных органах например. Интересно, что системно вводили НПС являются терапевтически эффективными например, через иммунных регулирующих действий даже тогда, когда накапливается исключительно из ЦНС 19, И общие терапевтические эффекты вводили НПС, направленные на ЦНС только 5 или лимфатические узлы только 19 сопоставимы. Это может отчасти из-за внутренней пластичности клеток, которые по-разному реагируют молекулярных компонентов surroundinг микросреда. Примечательно, что, если, с одной стороны пересаженные НПС может чувствовать присутствие воспалительных цитокинов и оказывают свое терапевтическое действие через иммунных механизмов модуляторных 16, с другой стороны, они могут вступать в контакт с враждебными микросреды, в конечном счете, приводящих к образованию опухолей 25, Таким образом, интратекальное через поясничного или полостной маршрута по-прежнему наиболее принимаются потенциальный путь введения в клинических испытаниях. Тем не менее, мультифокальность и патологическая неоднородность MS поражений может ограничить эффективность такого подхода. Несмотря на то, относительно прост и понятен, эти протоколы представить некоторые важные шаги, которые должны быть приняты во внимание. Сначала, он является обязательным для получения стабильно расширяемой и здоровый клеточный препарат. Как описано во всем протокола, стабильность клеток может быть косвенно сделать вывод, смотря на их скорости роста. Кроме того, нейросферы должны представить компактный и обычный круглую форму в микроскоп. Инфекция с лентивирусы может влиять на выживание и стабильности клеток. В самом деле, в то время как, с одной стороны низкое количество вируса приведет к небольшой процент инфицированных клеток, с другой стороны, использование большого количества Woulд вероятно, приведет к эффекту токсичности сильно зависит от гена, которые будут инфицированы. НПС могут быть заражены несколько раз с интегрирующих вирусов, следует исход первого трансдукции приводят к низким процентом трансгенных положительных жизнеспособных клеток. Это всегда хорошая практика, чтобы иметь внутрирегиональной экспериментальную сравнение устойчивость и жизнеспособность параметров с дикого типа, nontransduced, контролирует NPC. Как описано, изделия из стекла и льда должна быть использование в любое время. Приготовление эмульсии занимает минут, и его можно рассматривать готов быть введен только тогда, когда он не рассеивать при падении на воде. Если эмульсия рассеивает в воде, это означает, что еще не готов и требует дальнейшего смешивание. Высокая точность во время процедуры внутривенной инъекции во время введения клеток является критической. Во-первых, это чрезвычайно важно иметь какИнгл суспензию клеток, как инъекции агрегированных клеток может помешать вены введенного мыши и привести к его немедленной смерти. Для обеспечения правильного положения иглы в вену, это хорошая практика для аспирации с шприцев несколько мкл крови. В случае отсутствия крови, поступающей в шприце, оператор должен медленно двигаться иглу вперед или назад, пока правильное расположение не найдено. Только в этот момент может клеточную суспензию медленно вводили. Важно отметить, что оператор должен, как правило, не требуется применять никакого давления на шприц, так как жидкость должна легко поступать в вены. Ненадлежащее инъекции неизбежно приведет к подкожной набухания, соответствующей в месте инъекции. Таким образом, в то время как некоторые ограничения, связанные с системной доставки НПС существуют, как IV. Авторы благодарят Джейден Смит для критически рассмотрения и редактирования доказательство рукопись. To learn more about our GDPR policies click here. If you want more info regarding data storage, please contact gdpr jove. You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions jove. Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login. You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free. To get started, a verification email has been sent to email institution. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your 'Spam' folder. Your access has now expired. Provide feedback to your librarian. If you have any questions, please do not hesitate to reach out to our customer success team. Login processing Автоклав одну прямую резкое ножницы, одну маленькую хирургическую ножницами и два маленьких изогнутых зубчатые щипцы. Мозг рассечение NB: удаление височных костей может легко повредить ткани из-за их резкости. Чтобы избежать этого, надежно прикрепить кости с пинцетом и вытащить, пока весь кость была удалена. Используя щипцы, сложить два пятна на коже, чтобы выставкахе череп. Продолжать, потянув временные кости. С той же ножницами выполнить разрез вдоль всей черепа, начиная от основания, чтобы луковицы, не повреждая поверхность мозга. Кроме того, выполнить разрез между лобных костей и глаз, чтобы облегчить удаление из теменных костей. С двумя щипцы начать удаление череп, потянув каждый из теменных костей наружу. Хотя потянув, обратите внимание на мозговые оболочки, которые могут повредить мозг, когда кости удаляются. После того, как череп был удален, скользить щипцы между мозгом и черепом, чтобы полностью отделить мозговых оболочек оставили. Осторожно поднимите мозг от черепа. Обрежьте зрительные нервы, чтобы освободить мозг и, наконец, собирают мозг в трубку с холодным фосфатным буферным раствором PBS. Держите трубку на льду апг повторите эту же процедуру для всех мышей. При рассмотрении коэффициент разбавления, как один сделано с CGM и с витальной окраски, должны быть приняты во внимание. Замочите в стакане две пары щипцов, одну пару микро ножницы и хирургического лезвия. Поместите весь мозг на мозг-среза матрицы. Использование двух лезвий выполнить корональной секционирования 2 мм от переднего полюса мозга, за исключением оптических путей, и 3 мм кзади от предыдущего разреза; и поместите ткань на чистую чашку Петри. Под микроскопом рассекает изолировать СВЗ ткани и нарезать 1 мм 3 части, используя иридэктомия ножницы. Повторите эти действия для всех мозгов. Хорошо перемешать два решения раздел 1. Каждые 15 мин осторожно встряхните трубки х. Центрифуга при мкг в течение 10 мин. Удалить супернатант и не ресуспендируют осадок в мкл с помощью пипетки ПГС первого с P, а затем с P пипетки кратным каждый , до получения суспензии отдельных клеток. Возьмите подвеску до 5 мл с CGM и перенести в T25 см 2 колбы. Через дней в пробирке DIV нейросферы сформируют. Сбор суспензии в 15 мл трубки и центрифуги 10 мин при х г. Удалить супернатант и ресуспендируют осадок в мкл CGM. Развести клеточной суспензии, например 10 мкл клеточной суспензии в 40 мкл CGM, чтобы получить разведение , и хорошо перемешать. Смешайте 10 мкл разбавлятьэ клеточной суспензии с 10 мкл витальной окраски и хорошо перемешать. Заполните подсчета гемоцитометр камеру с 10 мкл клеточной суспензии: жизненно решений пятно. Отдельно подсчитать количество живых белые и мертвых синий клеток в угловых квадратов 4. Держите числа клеток и повторите процедуру каждые DIV. Чтобы создать непрерывную кривую роста, выполните следующие действия: Примечание: Для того, чтобы иметь хорошую подготовку клеток, после DIV сферы должны достигли диаметр мкм. Чтобы иметь хорошую оценку тон клеток плотность, важно найти оптимальный коэффициент разбавления, чтобы иметь хорошо распределены, непересекающиеся клеток по всему гематоцитометр. В идеале, должна быть в пределах общего числа клеток. При подсчете, только клетки, состоящие на площади, не касаясь границ должны быть рассмотрены. Кроме того, жизнеспособность клеток является решающим фактором, чтобы иметь здоровую подготовку. Линейная кривая роста является еще одним показателем здорового клеточного препарата. Подсчитайте количество живых и мертвых клеток например, 1,3 х 10 6. Пожаловаться на среднее7; стандартное отклонение построить линейного тренда. С течением 6, механической диссоциации заменяется ферментативной диссоциации. Ресуспендируют x с P, чтобы получить суспензии отдельных клеток и добавить мкл ПГС. Граф клеток как живых и мертвых и установить их жизнеспособность. Ресуспендируйте 2 х 10 5 клеток в 5 мл CGM и перевода к T25 см 2 колбы. Вирусный трансдукция НПС для отслеживания клеток в естественных условиях Примечание: Чтобы проверить эффективность вирусной трансдукции, построить параллельную кривой роста с трансдуцированные и nontransduced NPC. Кроме того, клональной эффективность, то есть абсолютное количество клеток, образующих нейросфер присутствуют в клеточной подготовТион или анализ клеточного цикла по содержанию ДНК с пропидийиодидом, PI , могут быть использованы в качестве дополнительных признаков состояния клеток. Если процент инфицированных клеток не должно быть хорошо, протокол вирусной трансдукции можно повторить во второй раз с тем же популяции клеток. Урожай нейросферы и получить суспензии отдельных клеток. Пластина клеток при высокой плотности 1,5 х 10 6 клеток в T75 см 2 колбы в 10 мл CGM. После3 места в пробирке проверки эффективности инфекции. Проверьте еще раз, эффективность инфекции после еще 3 проходов расширения для проверки поддержание экспрессии маркеров. Нейросфера замерзания Урожай нейросферы от T25 см 2 колбу, центрифуге при х г в течение 10 мин, и отбросить супернатант. Быстро разморозить флакон на водяной бане, пока почти все суспензию клеток не размораживают и только небольшой кусок ледяной суспензии остается. Ресуспендируют клеточной суспензии с 5 мл свежей предварительно нагретой ПГС. Удалить супернатант, ресуспендируют осторожно 5 мл свежего CGM и пластины клеточной суспензии в чистой, необработанной T25 см 2 колбы. Примечание: Для того, чтобы окрасить для внутриклеточных маркеров добавить permeabilizing агента ФБР в блокирующем растворе. Если источником первичного антитела является коза, бычий сывороточный Albumiн БСА или сыворотке кроме козы должны быть использованы. Примечание: Для того, чтобы окрасить для внутриклеточных маркеров использовать permeabilizing агента в растворе первичного антитела. Поместите 13 мм стекла coverslide в нижней части луночный планшет. Добавить мкл покрытия раствора на верхней части каждой coverslide создать небольшую каплю. Урожай нейросферы и отделить, чтобы получить суспензии отдельных клеток. Удалить избыток раствора для покрытия от coverslide осторожным стремления, и пластины с 35 мкл клеточной суспензии. Быстро проверить на контраст фазовом микроскопе если клетки начали придерживаться. Подготовьте дифференциации среду путем смешивания базальной среды мыши с соответствующими добавками см. После 3 DIV, изменение половина среды со свежим дифференциации среды. Инкубировать в течение 5 мин при комнатной температуре RT. После инкубации промыть 2x с PBS. Инкубировать 60 мин при комнатной температуре. Промыть два раза с PBS и один раз дистиллированной водой. Поместите каплю монтажной среды на стекло ткани горкой и щипцами смонтировать coverslide с клетками, стоящих монтажную среду. Аккуратно нажмите на coverslide выжать избыток монтажной среды. Примечание: При расчете общего объема эмульсии необходимо, считают в два раза больше объема, как количество мышей иммунизировать. Стеклянная посуда должна быть предпочтительно Пластик, чтобы минимизировать отходы часть эмульсии. С стеклянный шприц держит 19 G иглы смесь в течение 30 мин, всегда сохраняя эмульсии на льду. Чтобы проверить, является ли эмульсия готова, падение небольшое количество эмульсии на воде. Эмульсию готов быть введен только тогда, когда перепад остается как есть, и не расходиться. Иммунизируйте контрольную группу мышей с только CFA. Передача 19 G иглу на 1 мл пластиковую шприцй аспирации эмульсии. Избегайте пузырей, изменить иглу с 25 г и оставить шприц на льду. Шприцы, наполненные эмульсии готовы использовать ее следует хранить на льду в течение нескольких часов. Иммунизация Поместите мышей недель старые, женщины в потепления поле и ждать около 10 минут, чтобы позволить хвостовую вену, чтобы расширить. Трансфер одну мышь из коробки потепления к фиксатор мыши. Закройте фиксатор, чтобы избежать движение мыши. Медленно введите решение в хвостовую вену. Удалите иглу и нажмите на несколько секунд с лист бумаги, чтобы включить кровотечение. Наведите мышь обратно в клетку и повторить ту же процедуру для всех мышей. Медленно удалите шприц, избегая утечку эмульсии. Отметить мышь с уха панчер, поместите мышей в клетке, а регистрация до полного выздоровления. Повторите эти действия для всех мышей. Через 48 ч 2 дня после иммунизации, точек на дюйм повторите раздел 2. Поведенческий анализ мышей EAE Начиная с 5 руб, взвесить мышей ежедневно и контролировать их опорно-двигательного аппарата выступления с помощью масштабного систему подсчета очков, описанный в таблице 1. Удалить супернатант и добавить мкл клеточной совокупного раствора диссоциации. Хранить клеточной суспензии на льду до использования. На пике заболевания точек на дюйм , вес и набрать мышей. Распределить мышей в соответствии с их счетом, чтобы иметь однородные группы. Поместите мышей в условиях потепления поле и ждать около 10 минут, чтобы позволить хвостовую вену, чтобы расширить. Заполните 1 мл инсулиновый шприц с мкл клеточной суспензии и не забудьте удалить все пузырьки. Медленно вводить раствор в хвостовую вену. Удалите иглу и нажмите на несколько секунд с лист бумаги, чтобы подключить кровотечения 6А и 6B. Наведите мышь в клетке, а регистрация до выздоровления. Повторите ту же процедуру для всех мышей. Закрепите голову мыши с уха баров. Тогда регулировать как рот и нос штук. Убедитесь, что глава мыши является плоской и закреплена. Тампон голову мыши с повидон-йода ПВП-я и сделать надрез, чтобы сократить кожу в задней части головки выставить череп. Использование микроманипулятора, вставьте кончик мклИТЭР шприц в щель между затылком и атлас позвонка через неповрежденную мышц и связок в средней линии на задней части шеи. Изогнутая часть иглы удерживается в плотном контакте с внутренней поверхностью затылка по всей длине, как описано Медленно вставьте иглу и подождите несколько секунд. Оператор подразумевается научиться распознавать чувство игла быть 'на крючок' к черепу мыши, предварительного начать инъекционных подготовку клеток. Медленно введите объем клеток в пределах мин. Оставьте иглу на месте для дополнительных нескольких секунд после инъекции и снимите медленно шприц. Стежка до кожи и не разместить мышь в клетке восстановления до полного выздоровления. Используйте микротома сократить тканей в толстыми ломтиками мкм. С другой стороны, вставлять свежий ткани в агарозы и сократить ткани, используя толстые ломтики Vibratome мкм. Действуйте, как описано в разделах 1. Для нескольких окрашивания обязательно используйте вторичные антитела, конъюгированные с разными флуорофорами. Для тканях, содержащих GFP помечены клетки продолжить, как описано в шагах 5. Добавить несколько капель монтажной среды к слайдам и накройте ткани покровное. Для срезах, окрашенных биотин сопряженные антитела приготовить раствор авидин биотин комплекса раствор ABC, см. Промыть два раза с PBS. Инкубировать с ABC раствор в течение 1 часа при комнатной температуре. Мониторинг реакции ипдер микроскопа и промывают PBS, как только кусок начинают получать коричневый обычно около мин. Мыть два раза с PBS и действуйте, как описано в шаге 5. Счет Опорно-двигательного аппарата Ответы 0 Нормальная мышь. Нет явных признаков болезни 1 Limp хвост: полное вялость хвоста, и отсутствие скручивания на кончике хвоста, когда мышь взял 1. Мышь тащит себя только на его передних конечностей, которые остаются в силе. Мыши на этом этапе даются еду на пол клетки, длинные Sipper труб, а также ежедневной подкожной инъекции увлажняющих растворов для предотвращения обезвоживания. Если мышей развивается язвы или повреждения кожи, которые не восстановить с лечением, они будут убиты гуманно 3. Play Video. Before you can use the favorites feature you must sign in or create an account. Continue with Shibboleth or Forgot Password? Please enter your email address so we may send you a link to reset your password. You might already have access to this content! Please enter your Institution or Company email below to check. Please enter an institutional email address. Check access. Create Account. Forgot Password? Reset Password. Phone number. Request trial. Thank You! A JoVE representative will be in touch with you shortly. Waiting for verification email? Please click here to activate your free 2-hour trial. If you do not wish to begin your trial now, you can log back into JoVE at any time to begin. Enable Javascript for audio controls. Get cutting-edge science videos from J o VE sent straight to your inbox every month. We use cookies to enhance your experience on our website. Continue Learn more Close. Hind слабость конечностей: мышь показывает случайные и краткие отключений при ходьбе на переваливаясь походка. Limp хвост и задних конечностей слабость: когда его кладут на спину, мышь не может повернуть в нормальное положение. Частичное паралич задних конечностей: мышь больше не может использовать задние конечности для поддержания крупу позу или ходить, но все еще может двигаться один или оба задних конечностей, в некоторой степени, передние конечности остаются в силе. Полный паралич задних конечностей: полная потеря движения в задних конечностей. Если мышей развивается язвы или повреждения кожи, которые не восстановить с лечением, они будут убиты гуманно. Передних конечностей слабость: когда место на вертикальной сетке, а мышь не находится в состоянии подняться и медленно падает.
Экстази Рагуза Италия
Экстази Рагуза Италия
Зарплата оперуполномоченного уголовного розыска в году
Наркоторговля между Италией и Испанией: изъято 67 кг кокаина и гашиша
Экстази Рагуза Италия