Cocaine Chang
Cocaine Chang______________
Наши контакты (Telegram):
>>>НАПИСАТЬ ОПЕРАТОРУ В ТЕЛЕГРАМ (ЖМИ СЮДА)<<<
_______________
ВНИМАНИЕ !!! ВАЖНО !!!
В Телеграм переходить только по ССЫЛКЕ что ВЫШЕ, в поиске НАС НЕТ там только фейки !!!
Чтобы телеграм открылся он у вас должен быть установлен!
_______________
Самет Таиланд купить закладку Cocaine, Марки (ЛСД 25), Экстази (МДМА), Каннабис, Марихуана
Процедуры, связанные с животными предметы были одобрены уходу и использованию комитета Институциональные животных IACUC на Университета Содружества Вирджинии в общем и придерживаться Руководства NIH по уходу и использованию лабораторных животных. Рисунок 1. Представитель Пример программирования 1. Рисунок 2. Представитель Пример программирования 2. Здесь государство вышла на одно из двух критериев. По расписанию Completион, государство выходит в состояние 3 S3. Обратите внимание, что этот критерий не имеет R, что позволяет график, чтобы перейти, а не начала снова при каждом входе в атмосферу в этом состоянии. Это заданное пороговое истечении которого сеанс не завершится, если не отвечает происходит в течение этого окна. Это объясняется далее в дискуссии. Наконец, порог тайм-аута Сессия сбрасывается на каждом выпуске operandum. Таким образом, '\\\\\\\\\[1\\\\\\\\\]' указывает, выпуск operandum '1'. Здесь мы иллюстрируют примеры результатов, которые можно получить с описанной выше процедуре. На первых типичный область, которая трансфецируют вирусных векторов Рисунок 3. Объем трансфицированных области может быть определена количественно между серийных срезов с использованием метода Кавальери 32 Важно отметить, что объем трансфицировали зависит от многих факторов, таких как тип ткани быть трансфицированных. Кроме того, инжекционной как правило, около рН 8. Далее, мы показываем, что мотивация может манипулировать либо экспрессии трансгена рис 4 или фармакологической микроинъекции реагента фиг. MCitrine обеспечивает удобный визуализации трансфицированных клеток. Через 3 недели воздержания, мотивация к самостоятельной Admi Нистер этанола измеряли останова. Рисунок 3. Представитель вентральной полосатой область трансфецируют микроинъекции вирус. Это изображение иллюстрирует область прилежащего ядра астроциты, которые были трансфицированных следуя выше метод. Данные перепечатана из Bull и др. Подробности можно найти в этой публикации и сопутствующего дополнительного материала. Рисунок 4. Мотивация крыс самовведению этанола уменьшить, включив трансген, который был сверхэкспрессируется в прилежащем ядре основные астроциты. Вирус был микроинъекции и мотивация измеряется с помощью точки останова после учета одной недели вирус выразить. Рисунок 5. Микроинъекция щелевых блокаторов увеличили мотивацию крыс самовведению этанола после воздержания Два блокаторы щелевых оценивали по их влиянию на мотивацию измеряется с помощью точки останова крыс самовведению этанол:. Мефлокин и альфа-кислоты глицирретиновая а. Подробности можно найти в этой публикации исопровождающий дополнительный материал. Процедура, представленная здесь является эффективным средством для производства микроинъекции канюли и микроинъекторы, которые помогут в выяснении молекулярных субстратов мотивированного поведения. Этот метод имеет ряд преимуществ. Во-первых, производство собственных имплантатов и микроинъекторы, новые экспериментальные параметры могут быть быстро оптимизированы, то есть, никто не нужно ждать на заказ компонентов, чтобы прибыть. Во-вторых, из-за малого диаметра канюли, более канюли могут быть одновременно имплантированные. Это сокращает требуемое время хирургического, что может улучшить выживаемость, а также позволяет использовать несколько имплантатов на одно животное. В-третьих, программное обеспечение, используемое для управления рабочих камерах легко вмещает прогрессивные графики соотношение так фиксированное соотношение парадигма может быть быстро превращается в прогрессивный соотношение парадигмы простым применением список событий перехода параметр, который содержит нужную подкрепления. Бытьшироко полезным, общий порядок микроинъекции был представлен, который должен быть широко применимы для микроинъекции почти любой реагента в настоящее время. Следовательно, мы ожидаем, что эта техника будет по-прежнему подобного высокой полезности в будущем с небольшой модификацией. Изменяя только несколько переменных, этот подход может быть применен к широкому ряду реагентов. Параметры, которые наиболее часто манипулировать включают длину, что microinjector выступает из канюли, объем инъекции, и скорость инъекции. Например, может быть желательным инжектор, чтобы выступать дальше от наконечником канюли, чтобы избежать глиальных шрам, который, как правило, формируется вокруг хронических имплантатов. Кроме того, можно пожелать, чтобы придать больший объем. Для полосатого тела вируса микроинъекций, объем 1 мкл обычно используется и этот объем обычно впрыскивают в течение более длительного периода времени часто 7 - 10 мин, плюс 3 - 10 мин дополнительного времени диффузии по сравнению с использованиемд фармакологических реагентов обычно 0,3 - 0,5 мкл в течение 2 - 3 мин плюс 1 - 3 мин время дополнительного диффузионного. Несмотря на это, успех этой процедуры является критически зависит от 4 переменных: 1 длины канюли, 2 длины microinjector, 3 качество рисунка microinjector распыления и 4 целостность системы перед инъекцией. Потому что микроинъекции расположение зависит от глубины, что microinjector выступает из канюли, крайне важно, чтобы обе канюли Шаг 1. Кроме того, место впрыска может быть предсказано, только если оно происходит непосредственно под направляющей канюли. Таким образом, любой microinjector, что ланьы не распыляйте длинный, тонкий поток на тестирование Шаги 2. Инъекция качество также связано с целостности системы перед инъекцией. Если после выдачи всю воду из форсунки перед заполнением с реагентом множество точек наблюдаются на лабораторном стереть, а затем утечка должна быть устранена Примечание на Шаге 2. Кроме того, если пузырь Шаг 2. Это может засорить либо предотвратить, либо отвлечь инъекции. Это тоже может быть легко исправлено Обратите внимание на этапе 2. Если один желает microinject в то время как животное в стереотаксической рамы имеются три альтернативы. Во-первых, можно было бы увеличить длину microinjector воротника таким образом, что он может быть прочно удерживается стереотаксической манипулятора, а также продлить достаточно далеко, чтобы позволить соединение с PE20 трубок. Во-вторых, нае могли временно внедрить канюлю и использовать стандартный microinjector представленные здесь. В-третьих, можно использовать обращается и полированные стеклянные пипетки. Существенным недостатком процедуры, представленной здесь является то, что лучше всего проводить в хорошо обработанных крыс, которые знакомы с процедурой. Крысы, используемые для данных, описанных в разделе результатов не требуется никаких специальных процедур обработки, потому что тот же следователь обрабатываются крыс ежедневно в течение 2 месяцев. Это включало ежедневное наблюдение и манипуляции с хирургической имплантации в течение по меньшей мере 2 недель. Тем не менее, крысы, могут быть быстро привыкли рядом методов, которые используются для до предварительно импульса анализа ингибирования, которая может зависеть от напряжения. Эти специальные методы привыкания были хорошо описаны ранее. Во время этих фиктивных инъекций, важно, что microinjector не выступают в ткани для того, чтобы ограничить повреждение тканей. В не Иными словами, microinjector должны быть согнуты не более 14 мм. Таким образом, тщательное привыкание требуется для оптимальной реализации этого метода можно рассматривать как ограничение. В то время как несколько поведенческих парадигм существуют, чтобы измерить мотивацию, прогрессивный коэффициент обычно используется для количественной оценки усилий, что субъект готов оказать получить подкрепления. Прогрессивная отношение парадигма производит измерение, известное как точки останова, которая часто определяется как максимальное количество рычагов прессов в последний завершенный отношение;. Е, максимальная отвечать, что породил подкрепления 21 Прогрессивная отношение чувствительны к подкрепления величину. Например, выше, кокаин или сахарозы дозы вызывают более высокий останова и нижнюю кокаин или сахарозы дозы дают более низкую breakpoint. Конечные длины сессия может поставить ложный крышку останова значений, и это может быть усилено предварительной обработки, что аномально уменьшить скорость самоуправления или иного увеличение после армирования паузы. Это тупик можно преодолеть любое количество подходов;.. Например, сессий, что прекратить, когда животное удерживается отвечать некоторым кратного среднего интервала между инфузии 44 Более широко применяется вариант этого подхода заключается в прекращении сессий раз отвечая имеет был удержан некоторой эмпирически определенной величины, которая проводится постоянная по предметам. Мы предоставили метод применять этот подход в шаге 4. Poland, R. To learn more about our GDPR policies click here. If you want more info regarding data storage, please contact gdpr jove. Your access has now expired. Provide feedback to your librarian. If you have any questions, please do not hesitate to reach out to our customer success team. Login processing JoVE Journal Behavior. Примечание: Обеспечение ротационный инструмент в пипетки коробке, используя ремни или ленты является полезным, поскольку он поднимает инструмент. Ношение защиты глаз имеет важное значение для предотвращения травм при использовании роторного инструмента. Приложите кусокиз лаборатории или в автоклаве ленты на скамейке. Подготовка канюли: Примечание: По крайней мере, два канюли требуется на крысу для двустороннего инъекции. Один дополнительный канюли будет использоваться на более позднем этапе. Приобретение раздел канюли трубы достаточной длины, чтобы избежать изгиба в процессе маркировки, резки. Нарисуйте 15 мм опорной линии на ленте с шага 1. Это будет служить в качестве руководства для маркировки последовательных 15 мм секций на трубки, используя острый постоянный маркер. Сенсорный трубки канюли, в отмеченных точках, с медленным спиннинг отрезным диском вращающегося инструмента для того, чтобы засечь трубки. Не прорезать трубы полностью, потому что это может привести к окклюзии. Удержание каждого среза конец канюли перпендикулярно отсечкидиск между большим и указательным пальцами. Поверните трубку канюли, касаясь кончиком к большому передней поверхности светотеневой диска т. Это создаст притупляются наконечника. Примечание: Не сгибайте катетер, для этого может дать инъекцию пределы участка. Реам оба конца канюли с 26 г скошенный иглы коричневый концентратор , чтобы убедиться, что все заусенцы были удалены, и, что канюля препятствий. Возьмите каждый по отдельности, используя канюли unclamped кровоостанавливающих и измерить каждый заполненный канюли с линейкой для того, чтобы именно 14 мм в длину. Подготовка обтураторами: Зажмите один канюли примерно половина длины со средней массой, прямых кровоостанавливающих. Положите запертую кровоостанавливающего на скамейке. Канюля должна быть перпендикулярна к скамейке. Примечание: Эта канюлиНе следует использовать в операции после того, как проводится заблокированных кровоостанавливающих, поскольку вероятно согнуты. Поток один конец провода в запирательного канюли, пока он не достиг скамейки. Отказов провод в канюлю чтобы гарантировать, что бор не давая ему достичь скамейки;. Правильное длина обтуратор будет предотвратить засорение и дополнительные ткани рубцов. Убедитесь, что угол изгиба такой, что он лежит на одном уровне с головкой, и избыток обращен вперед, что делает его более трудным для крысы, чтобы удалить. Примечание: По крайней мере два обтураторы потребуется на крысу для двусторонней инъекции, так как каждый имплантировали канюли требует обтуратор. Хранить как канюли и обтураторов в отдельных ампулах например. Держите один конец трубки microinjector перпендикулярно с заблокированных прямых кровоостанавливающих. Твист кровоостанавливающего, сохраняя напряжение на трубке, чтобы катушка плотно вокруг кровоостанавливающего, по крайней мере один раз. Измерьте 32 мм от противоположной, свободный конец трубки microinjector и понять эту точку перпендикулярно второй раз подряд, средний вес кровоостанавливающего и заблокировать их. Возьмитесь трубки microinjector с кровоостанавливающих на стороне 32 мм отметить ближе к свободному концу, а не на стороне, ближайшей к кровоостанавливающего с раневой проволоки. Бенd трубки и обратно, сохраняя напряжение на трубке, пока она не сломается. Примечание: Один, острый вверх и вниз изгиб будет производить тупой разрыв, что желательно, чтобы гарантировать, что микроинъекции происходит в требуемой области головного мозга. Осмотрите microinjector трубки для того, чтобы оба конца прямой и что внутренний диаметр препятствий. Приобретать канюли трубку, которая будет использоваться для производства microinjector воротник. Измерьте и отметьте последовательные 5 мм секции канюли трубки с помощью перманентным маркером и 5 мм справочную линию, проведенную на ленту шаг 1. Примечание: Каждый microinjector требуется один воротник. Ошейники просто короткая канюли придерживался microinjector проволоки. Нажмите канюли трубку, в отмеченных точках, с медленным спиннинг светотеневой диска вращающегося инструмента для того, чтобы засечь трубки. Резка полностью закрывают может трубку. Ream внутренний диаметр обоих концах воротника с 26 г скошенный иглы коричневый концентратор , чтобы гарантировать, что большинство из заусенцев были удалены. Некоторые небольшие заусенцы захватить microinjector провод и, таким образом, помочь в склейке. Создать небольшой бассейн супер клей в углу небольшой взвешивании лодки. Обложка оба конца воротника с клеем. Примечание: Избегайте большое скопление супер клей на воротнике, как это будет препятствовать пластиковые трубы из уплотнения вокруг microinjector. Хотя важно, чтобы избежать супер клей на открытом конце трубки microinjector, как это сделаетmicroinjector непригодным, важно также, чтобы скользить воротник как можно ближе к концу, чтобы минимизировать пустот не вводили объем. Lean заполненную microinjector на внешней другом небольшом взвешивании лодки со стороной воротника вверх и дать высохнуть в течение 24 часов. Прикрепите 26 G коричневый ступица иглы шприца и сдвиньте вырезать трубки на иглу, обеспечивая не проколоть трубу. Слайд пластиковые трубы над воротником конце высушенной, полной microinjector. Сожмите заполненный водой шприца, чтобы проверить на проходимость. Примечание: Вода должна распылять очень далеко и прямо из кончика microinjector. Если поток не прямо, место инъекции не будет правильным. Источник боковом или диффузного спрей является плохим брейк шаг 1. Microinjector должны нет быть использованы, если спрей боком или диффузным. Солевой не должны использоваться, так как это может засорить microinjector или иглу. Потяните шприц обратно для того, чтобы удалить воду из microinjector. Хранить в сухом, закрытом сосуде, например: 20 мл сцинтилляционный флакон из стекла. Примечание: микроинъекторы может быть в автоклаве после изготовления с большинством клеев супер, 31, но это должно быть определено эмпирически. Альтернативные методы стерилизации включают этиленоксид и гамма-облучение. Примечание: Точная изгиб расположение необходимо для точного местоположения инъекции. Использование 7 щипцы или аналогичный , чтобы захватить microinjector и изгиб вверх полезно. Всегда повторно измерить длину перед выполнением микроинъекций. Примечание: Добавление ленты вкладки в одной пластиковой трубки около как microinjector и свободный конец полезно при заполнении инъекции, особенно при введении два различных решения. Вкладки не рекомендуется для обеих трубках, как они становятся громоздкими во время инъекции. Подготовка насос для микроинъекций: Включение насоса. Установите диаметр иглы микроинъекции, требуемую скорость инфузии, и цель объем впрыска. Примечание: настой крысуе и объем инъекции зависит от экспериментальных требований. Это подробно рассматриваются в дискуссии. Некоторые насосы имеют шприцев таблицы предварительно загружены. Если нет, то таблица шприц можно найти на веб-сайте ы производство. Установите режим насоса на «Том», так что точный объем поставляется автоматически. Если режим «Насос» выбран вместо этого, экспериментатор должен вручную остановить насос. Отрегулируйте обратного хода насоса, чтобы шприц, чтобы заполнить объему впрыска плюс еще 0,2 мкл. Подготовка микроинъекции шприц и microinjector для инъекций: Блокировка каждый герметичное микроинъекции шприц в стойке микроинъекции насоса. Поместите кончик шприца герметично в стерильной воде, содержащейся в небольшой вес лодки и осторожно флаттера поршень смазывать внутреннюю проволоку. Равномерно потянуть поршень обратного хода на насосе для заполнения водой. Слайд трубы PE20, который совместноnnected к microinjector на этапе 2. Спрей стерильную воду через microinjector и проверить распыла и расстояние. Поместите стерилизовать microinjector на стерильной области. Слайд трубы от иглы, держа трубку microinjector вертикальном положении для предотвращения воды из капает, а также резки трубки ниже области поврежденной иглы. Нажмите микроинъекции шприца немного вперед, чтобы создать капли на конце иглы и слайд PE20 трубок заполненный водой который подключен к microinjector на иглу. Примечание: Это создаст соединение жидкость-жидкость, которая позволит соответствующее противодавление, что может выбить помеху, которая может сформировать наверхушка microinjector. Надавите на поршень полностью вперед, чтобы подготовиться к нагружения образца и убедиться, что никаких следов этанола остается в microinjector. Проверьте настройку на герметичность путем прикосновения капли воды, образовавшуюся на кончике microinjector на чистую лаборатории стереть несколько раз. Примечание: При нажатии в лабораторию протрите, только один мокрое пятно должно сформироваться. Если есть еще капли, есть утечка в системе. Избегайте утечек путем контроля супер клей приложение этап 1. Кроме того, повторите шаги 2. Примечание: Этот пузырь предотвращает разбавление инжекционной, загрязнение воды, и позволяетдля мониторинга процесса впрыска, так как она будет двигаться во время инъекции. Один твердый пузырь должен быть произведен. Если это работает, утечка присутствует или наконечник microinjector окклюзии; указывая, что шаг 2. Поместите microinjector в реагент, который будет введен и медленно потяните поршень шприца на блокиратором обратного хода. Примечание: При правильном обращении, мыши могут быть аккуратно сдержан в Чашевидный стороны. В противном случае, scruffing может потребоваться. Выполнение инъекции: Поместите наполненный microinjector шаг 2. Пресс-старт на микроинъекции насоса и движения монитора пузыря. Примечание: мау необходимо применить легкое давление к тому, чтобы микроинъекторы не поднять. Пузырь полученный на стадии 2. Удалить из микроинъекторы канюли и заменить обтураторов, когда инъекция завершена, и после инъекции период диффузии прошло. Примечание: Типичное время диффузии после инъекции являются 2 - 4 мин для фармакологических реагентов, и 2 - 10 мин на наличие вирусов. Оставив microinjector в течение периода после инфузии предотвращает инжекционной из кип вверх по канюли, а не диффузии в ткани. Место обтураторы на стороне этанола заполненный вес лодки, чтобы позволить стечь этанола, затем вставьте в канюлю. Очистка microinjector и микроинъекции шприц: Удалить стеклянный шприцс от шприца насос стойки и микроинъекции трубки из стекла шприца. Отключите трубки microinjector из стекла шприц и присоединить шприц 1 мл, наполненный стерильной водой с трубкой microinjector через 26 G иглы коричневый хаб. Далее, коснуться кончиком microinjector в лабораторию протрите и потяните воздух обратно через microinjector. Примечание: microinjector и трубки могут быть повторно использованы для подобных экспериментов, если считать разумным. Поместите стеклянную иглу шприца в стерильной воде и сделать поршень полностью назад. Далее, толкать поршень до упора вперед, чтобы смыть. Сенсорный кончике шприца стекла в лабораторию протрите чтобы гарантировать, что жидкость не остается. Повторите шаг 3. Выполнение всех этих шагов очистки поможет сохранить микроинъекции шприц. Поместите microinjector шприц ы в упаковке и потяните поршень назад до 0,05 мкл. Примечание: Это важно, так как позволяет поршень для толкают или тянут, чтобы выбить застрявший поршень, который может произойти должно либо солевые отложения образуют после хранения. Программирование мотивации анализе Вход в графический государства с правами администратора. Выберите или создайте соответствующую базу данных. Выберите 'Добавить'. Введите соответствующий номер в списке L и описание. Выберите 'Добавить События'. Введите первое значение подкрепления и выберите 'Добавить'. Для того, чтобы адаптировать это уравнение правильно проверить гипотезу, значение J должны быть определены эмпирически или полученные из литературы. Введите значение подкрепления в текстовое поле, что далеко превышает ожидаемого реагирования. Это будет необходимо усилие для всех последующих записей, как только список был исчерпан. Создание экспериментального протокола: Примечание: Графический государство движется предмет через ряд состояний, которые вышли на основе времени или критериев эффективности. Введите нужный номер протокола и описание в соответствующем текстовом поле. Выберите 'Новый государство' и назовите его 'S4 - Тайм-аут'. Была определена единица времени 'единиц', когда база данных была первоначально создана. Выберите Добавить 'Событие Перейти. Идентификатор 1 - Активный был назначен во время создания базы данных. Здесь 1 - Активныйимеет в виду operandum подключен к коммутатору одного. Выберите 'Добавить Time To Go'. Это будет гарантировать, что сессия закончится, если нет активности в этом operandum после установленного порога; т. Е, заседание будет таймаут после животное удерживает отвечать на подкрепление-парные operandum для заданного периода времени. Этот шаг гарантирует, что при освобождении operandum указывается скобках выше , что государство вернулся, таким образом, сброс порог тайм-аута сессии 4. В этот момент, государство будет выходить, когда прогрессивное отношение содержится в списке завершается шаг 4. Таким образом, каждый раз, когда operandum активирована, она рассчитывает к прогрессивной соотношении. И каждый раз, когда operandum инактивируется; например, рычаг освобождается и нос совать выходе, порог тайм-аута сеанса этап 4. Выделите 'S3 - PR подкрепления и Cue. Государство 'S4 - Тайм-аут' не может быть обязательным для всех конструкций. Выберите государства решают. Примечание: Этот протокол готов к запуску. Play Video. Cite this Article Poland, R. Before you can use the favorites feature you must sign in or create an account. Continue with Shibboleth or Forgot Password? Please enter your email address so we may send you a link to reset your password. Please enter your institutional email to check if you have access to this content. Please create an account to get access. Forgot Password? To receive a free trial, please fill out the form below. Not your institution? A JoVE representative will be in touch with you shortly. You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions jove. Thank You. Please enjoy a free hour trial. In order to begin, please login or create an account. Please click here to activate your free hour trial. If you do not wish to begin your trial now, you can log back into JoVE at any time to begin. Enable Javascript for audio controls. Get cutting-edge science videos from J o VE sent straight to your inbox every month. We use cookies to enhance your experience on our website. Continue Learn more Close.
Грызунов Мозг Микроинъекция по изучению молекулярных субстратов мотивированное поведение
Купить закладку экстази (МДМА) Кобулети
Нафплион Купить Cocaine, Экстази (МДМА), Кокаин (VHQ, HQ, MQ, первый, орех), Конопля (Cannabis)
Купить шишки, бошки, гашиш закладкой Святой Константин и Елена