Чэнду бесплатные пробы Экстази, Лсд 25

≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈

Гарантии! Качество! Отзывы!

Проверенный магазин!

≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈ ≈

▼▼ ▼▼ ▼▼ ▼▼ ▼▼ ▼▼ ▼▼ ▼▼ ▼▼

Наши контакты (Telegram):☎✍

>>>✅(НАПИСАТЬ ОПЕРАТОРУ В ТЕЛЕГРАМ)✅<<<

▲▲ ▲▲ ▲▲ ▲▲ ▲▲ ▲▲ ▲▲ ▲▲ ▲▲

≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡

⛔ ВНИМАНИЕ!

📍 ✅✅✅ Используйте ВПН, если ссылка не открваеться !!!

📍 В Телеграм переходить только по ССЫЛКЕ что ВЫШЕ! В поиске НАС НЕТ там только фейки!

📍 Гарантии и Отзывы!

📍 Работаем честно!

≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡ ≡

Чэнду бесплатные пробы Экстази, Лсд 25

Вы точно человек? Пользовательское соглашение Политика конфиденциальности.

Чэнду бесплатные пробы Экстази, Лсд 25

Купить Соль, альфа pvp закладку Лисаков

Чэнду бесплатные пробы Экстази, Лсд 25

Вы точно человек?

Наркотики в телеграме Борисов

Чэнду бесплатные пробы Экстази, Лсд 25

Мефедрон, меф Город Тунис

Вы точно человек?

В настоящем протоколе описывается комплексная стратегия изучения ключевых мишеней и механизмов Fructus Phyllanthi против гиперлипидемии, основанная на прогнозировании сетевой фармакологии и проверке метаболомики. Гиперлипидемия стала ведущим фактором риска сердечно-сосудистых заболеваний и повреждения печени во всем мире. Fructus Phyllanthi FP является эффективным препаратом против гиперлипидемии в традиционной китайской медицине ТКМ и теориях индийской медицины, однако потенциальный механизм требует дальнейшего изучения. Настоящее исследование направлено на выявление механизма ФП против гиперлипидемии на основе комплексной стратегии, сочетающей прогнозирование сетевой фармакологии с валидацией метаболомики. Модель мышей, индуцированная диетой с высоким содержанием жиров HFD , была создана путем оценки уровней липидов в плазме, включая общий холестерин TC , триглицериды TG , холестерин липопротеинов низкой плотности LDL-C и холестерин липопротеинов высокой плотности HDL-C. Сетевая фармакология была применена для выяснения активных ингредиентов FP и потенциальных мишеней против гиперлипидемии. Метаболомика плазмы и печени была выполнена для выявления дифференциальных метаболитов и соответствующих им путей среди нормальной группы, модельной группы и группы вмешательства. Взаимосвязь между сетевой фармакологией и метаболомикой была дополнительно построена для получения всестороннего представления о процессе ФП против гиперлипидемии. Полученные ключевые белки-мишени были верифицированы методом молекулярного докинга. Эти результаты показали, что FP улучшил уровень липидов в плазме и повреждение печени при гиперлипидемии, вызванной HFD. Галловая кислота, кверцетин и бета-ситостерол в FP были продемонстрированы в качестве ключевых активных соединений. Было обнаружено, что в общей сложности 16 и шесть потенциальных дифференциальных метаболитов в плазме и печени, соответственно, участвуют в терапевтических эффектах FP против гиперлипидемии путем метаболомики. Кроме того, интеграционный анализ показал, что эффекты вмешательства были связаны с CYP1A1, AChE и MGAM, а также с корректировкой L-кинуренина, кортикостерона, ацетилхолина и рафинозы, в основном с участием пути метаболизма триптофана. Молекулярный докинг гарантирует, что вышеуказанные ингредиенты, действующие на белковые мишени, связанные с гиперлипидемией, играют ключевую роль в снижении уровня липидов. Таким образом, это исследование предоставило новую возможность для профилактики и лечения гиперлипидемии. Гиперлипидемия является распространенным метаболическим заболеванием с серьезными последствиями для здоровья человека, а также основным фактором риска сердечно-сосудистых заболеваний 1. В последнее время наблюдается тенденция к снижению возрастного заболевания, и молодые люди стали более восприимчивыми из-за длительного нерегулярного образа жизни и нездоровых привычек питания 2. В клинике для лечения гиперлипидемии применялись различные препараты. Например, одним из наиболее часто используемых препаратов для пациентов с гиперлипидемией и связанными с ней атеросклеротическими расстройствами являются статины. Однако длительное применение статинов имеет побочные эффекты, которыми нельзя пренебрегать, которые приводят к плохому прогнозу, такие как непереносимость, резистентность к лечению и нежелательные явления 3,4. Эти недостатки стали дополнительными болями для пациентов с гиперлипидемией. Поэтому следует предложить новые методы лечения для стабильной гиполипидемической эффективности и меньшего количества побочных эффектов. Традиционная китайская медицина ТКМ широко используется для лечения заболеваний из-за ее хорошей эффективности и небольшого количества побочных эффектов 5. Это лекарство использовалось для очищения от жары, охлаждения крови и улучшения пищеварения в соответствии с теориями ТКМ 8. Современные фармакологические исследования показали, что FP богат биологически активными соединениями, такими как галловые кислоты, эллаговые кислоты и кверцетин 9 , которые отвечают за ряд многогранных биологических свойств, действуя как антиоксидант, противовоспалительное средство, средство защиты печени, антигиполипидемическое и так далее Недавние исследования также показали, что FP может эффективно регулировать липиды крови пациентов с гиперлипидемией. Например, Variya et al. Терапевтическая эффективность была связана с регуляцией FP в увеличении экспрессии рецептора-альфа, активируемого пролифератором пероксисом, и снижении липогенной активности печени. Тем не менее, основной механизм FP в улучшении гиперлипидемии должен быть дополнительно изучен, поскольку его биологически активные ингредиенты довольно обширны. Мы стремились изучить потенциальный механизм терапевтической эффективности ФП, который может быть полезен для дальнейшей разработки и использования этого лекарства. В настоящее время сетевая фармакология рассматривается как целостная и эффективная методика изучения терапевтического механизма ТКМ. Вместо того, чтобы искать отдельные болезнетворные гены и лекарства, лечащие исключительно индивидуальную мишень, строится полная сеть лекарств-ингредиентов-генов-заболеваний, чтобы найти многоцелевой механизм многокомпонентного лекарственного средства в отношении их комплексного лечения Этот метод особенно подходит для ТКМ, так как их химический состав огромен. К сожалению, сетевая фармакология может быть использована только для прогнозирования целей, на которые влияют химические ингредиенты в теории. Эндогенные метаболиты в модели заболевания следует наблюдать, чтобы подтвердить эффективность сетевой фармакологии. Метод метаболомики, появившийся с развитием системной биологии, является важным инструментом мониторинга изменений эндогенных метаболитов Изменения в метаболитах отражают устойчивые изменения состояния хозяина, что также является важным показателем для изучения внутреннего механизма. Некоторые исследователи успешно интегрировали сетевую фармакологию и метаболомику для изучения механизма взаимодействия между лекарствами и заболеваниями 14, В этой статье исследуются механистические основы ФП против гиперлипидемии путем интеграции методов сетевой фармакологии и метаболомики. Сетевая фармакология была применена для анализа взаимосвязи между основными активными ингредиентами в FP и молекулярными мишенями для гиперлипидемии. Впоследствии была проведена метаболомика для наблюдения изменения эндогенных метаболитов на животной модели, что может объяснить действие лекарства на метаболическом уровне. По сравнению с применением только сетевой фармакологии или метабономики, этот интегрированный анализ обеспечил более конкретный и всеобъемлющий механизм исследования. Кроме того, стратегия молекулярного докинга использовалась для анализа взаимодействия между активными ингредиентами и ключевыми белками. В целом, этот комплексный подход может компенсировать отсутствие экспериментальных данных по сетевой фармакологии и отсутствие эндогенного механизма для метода метаболомики и может быть использован для анализа терапевтического механизма натуральной медицины. Основная схематическая блок-схема протокола показана на рисунке 1. Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian. Все процедуры, связанные с обращением с животными, проводились в соответствии с Руководством Университета традиционной китайской медицины Чэнду по уходу за лабораторными животными и их использованию и были одобрены Комитетом по институциональной этике Университета традиционной китайской медицины Чэнду протокол No Мыши были получены из коммерческого источника см. Таблицу материалов. Оцените стабильность и повторяемость метаболомики по относительному стандартному отклонению RSD областей пика КК. Таблицу материалов для анализа данных. Рассмотрим значение p Subscription Required. Сетевая фармакология В общей сложности 18 потенциальных ингредиентов в FP были проверены в соответствии с их фармакокинетическими и фармакодинамическими свойствами из базы данных и анализа LC-MS общее количество ионных хроматограмм показано на дополнительном рисунке 1. Согласно соответствующей литературе, содержание галловой кислоты намного выше, чем у других ингредиентов, и эффективно снижает уровень липидов 9, Поэтому этот ингредиент также считался потенциальным ингредиентом. В общей сложности было найдено 19 ингредиентов и связанных с ингредиентами мишеней FP. Все 19 ингредиентов показаны в таблице 1. Согласно сети «ингредиент-мишень-путь-заболевание», некоторые биологически активные ингредиенты, такие как галловая кислота, кверцетин и бета-ситостерол, были идентифицированы как наиболее важные ингредиенты FP, связанные с гиперхолестеринемией и коронарным атеросклерозом дополнительный рисунок 2. Среди них галловая кислота является одной из наиболее широко изученных фенольных кислот; это основной биологически активный ингредиент, представленный в FP El-Hussainy et al. Содержание кверцетина и бета-ситостерола ниже, но некоторые исследования доказали их влияние на снижение липидов. Кверцетин, как важный флавоноид, широко распространенный в растениях, обладает различными свойствами, такими как антиоксидантное, противовоспалительное и сердечно-сосудистое действие Lu et al. Что касается бета-ситостерина, клинические исследования показали, что растительный стерол может значительно предотвратить гиперхолестеринемию и сердечно-сосудистые заболевания 22, Althwab et al. Можно видеть, что гиполипидемический эффект FP может быть связан с этими тремя ингредиентами. После сопоставления мишеней, связанных с ФП, с мишенями, связанными с гиперлипидемией, 62 мишени были определены в качестве потенциальных мишеней для ФП против гиперлипидемии рис. Все пересекающиеся мишени были нормализованы к их официальным символам, согласно базе данных UniProt. Подробности представлены на дополнительном рисунке 3. Все эти 62 мишени являются основой дальнейшего анализа, который интегрируется с результатами метабономики. Топ путей по количеству мишеней были отобраны для анализа в соответствии с p-значением. Результаты обогащения GO показали, что биологические процессы и молекулярная функция FP против гиперлипидемии в основном связаны с экспрессией генов и связыванием с белками рис. Как основной орган жирового обмена, вес печени в определенной степени отражает накопление жира у мышей Группа ПК также показала разную степень снижения этих показателей выше, демонстрируя, что FP имеет сходные эффекты со статинами, а защитный эффект показал зависимость доза-реакция. Различные клинические исследования показали, что после приема экстракта или целого FP в течение некоторого времени уровни TC и LDL-C значительно снижались. Намбияр и Шетти 30 обнаружили, что сок FP может уменьшать окисленные липопротеины низкой плотности, что значительно снижает риск атеросклероза. Gopa et al. Патологические участки печени в группе НК экспрессировали регулярную морфологию гепатоцитов, четко очерченные границы клеток и отсутствие явных жировых вакуолей рис. Для сравнения, группа HFD имела жировые вакуоли разного размера вокруг кровеносных сосудов и демонстрировала очевидное повреждение печени, характеризующееся отеком клеток, жировой дегенерацией, потерей клеточных границ, клеточным сокращением и некрозом гепатоцитов рис. Это означает, что вмешательство FP может защитить ткань печени от повреждения печени, вызванного HFD. Профилирование метаболомики Согласно уровню липидов в плазме крови и гистопатологическому наблюдению за печенью, высокие дозы ФП оказывали лучшее влияние на гиперлипидемию, чем низкие дозы ФП. Общее количество ионных хроматограмм образцов КК было показано на дополнительном рисунке 4. PCA и ионные хроматограммы показали, что образцы контроля качества были стабильными во время процесса дополнительный рисунок 5. Всего после предварительной обработки данных было определено и признаков в плазме и печени. Среди них и метаболита в плазме и печени соответственно были идентифицированы на основе базы данных KEGG. OPLS-DA показал, что одни и те же групповые образцы сгруппированы вместе, и разные групповые образцы хорошо различаются рис. Результаты OPLS-DA хорошо различались и показали значительные различия между различными группами моделей 14 дополнительный рисунок 6. Информация об этих метаболитах приведена в таблице 2. Чтобы визуализировать различия в метаболитах между тремя группами, с помощью MetaboAnalyst 5. Все дифференциальные метаболиты в плазме и печени были изменены в группе HFD, и большинство из них были обращены вспять в группе FP, что указывает на то, что вмешательство FP может улучшить метаболическое расстройство рис. Кроме того, дифференциальные метаболиты были импортированы в MetaboAnalyst 5. Основываясь на p 0,10, метаболизм триптофана в плазме значительно влиял, и метаболитами, связанными с этим путем, были D-триптофан и L-кинуренин рис. Jung et al. Метаболизм таурина и гипотаурина значительно повлиял на метаболизм таурина и гипотаурина, и родственным метаболитом был таурин рис. Таурин является важной и необходимой аминокислотой в организме животных; Dong et al. В этом исследовании вмешательство FP увеличило содержание L-кинуренина и таурина, что положительно связано со снижением уровня липидов, поддерживая эффективность FP против гиперлипидемии. Комплексный анализ сетевой фармакологии и метаболомики Комплексная стратегия сетевой фармакологии в сочетании с метаболомикой становится все более необходимой при изучении механизмов заболевания и стратегий вмешательства. Была установлена связь между сетевой фармакологией и метаболомикой с ограниченными доказательствами. Для получения комплексного представления о механизме ФП на фоне гиперлипидемии были построены сети взаимодействия, основанные на сетевой фармакологии и метаболомике. Дифференциальные метаболиты были импортированы в плагин MetScape в Cytoscape и соответствовали генам-концентраторам, идентифицированным в сетевой фармакологии, для сбора сетей соединений-реакций-ферментов-генов рис. Как показано в таблице 3 , в метаболитах плазмы L-кинуренин и кортикостерон были связаны с CYP1A1, который может катализировать перекисное окисление липидов и индуцировать неалкогольную жировую болезнь печени 34,35 ; Затронутыми путями были метаболизм триптофана и биосинтез стероидных гормонов соответственно. Ацетилхолин был связан с АХЭ и влиял на метаболизм глицерофосфолипидов. В метаболитах печени MGAM и рафиноза были связаны с метаболизмом галактозы. Несколько исследований показали, что потребление олигосахаридов семейства рафиноз может улучшить метаболические нарушения у мышей HFD Кроме того, была построена сеть ингредиентов-мишеней-метаболитов-путей рис. В ингредиентах кверцетин соединил большинство краев, что указывает на то, что кверцетин FP играет наиболее важную роль в снижении уровня липидов. Проведенный выше комплексный анализ выявил ключевые мишени, метаболиты и пути ФП против гиперлипидемии, что может стать основой для дальнейшего изучения терапевтического механизма и клинического применения этого препарата. Молекулярный докинг Для дальнейшего изучения возможности взаимодействия между выбранными ингредиентами и ключевыми мишенями был использован молекулярный докинг для анализа их взаимодействий лиганд-активных центров. Программное обеспечение AutoDock Vina см. Таблицу материалов использовалось для выполнения молекулярного стыковки, и первая поза стыковки была выведена в соответствии с рангом функции подсчета очков. Результаты стыковки показаны на рисунке 8. Дальнейший молекулярный докинг был выполнен для проверки связи между мишенью и ингредиентами. При взаимодействии с MGAM галловая кислота стабилизировалась водородными связями с Ile, Gly и Trp и гидрофобным взаимодействием с Tyr и Trp рис. Подробная информация о взаимодействиях и сродстве связывания представлена в таблице 4. Множественные сайты связывания и высокая энергия связывания объясняют высокое сродство между ингредиентами и белковыми мишенями, подтверждая, что эти ингредиенты играют роль снижения уровня липидов, воздействуя на мишени, связанные с гиперлипидемией. Рисунок 1 : Схематическая блок-схема интегрированной стратегии. Основные ингредиенты и гены были извлечены с помощью сетевой фармакологии часть 1. Дифференциальные метаболиты ФП в отношении гиперлипидемии анализировали методом метаболомики плазмы и печени часть 2. Ключевые мишени, метаболиты и пути были идентифицированы и связаны на основе комплексного анализа Части 1 и Части 2 Часть 3. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка. Рисунок 2 : Целевой скрининг, построение сети и анализ обогащения эффекта FP против гиперлипидемии. A Диаграмма Венна мишеней FP-гиперлипидемии. B Сеть потенциальных активных ингредиентов-мишеней-болезней: различные цветовые символы, как указано здесь: болезнь красный , лекарство синий , ингредиенты зеленый и мишени желтый. D Анализ пути обогащения GO. D Уровень ТГ. Статистически значимые различия оценивались с помощью одностороннего ANOVA с последующим тестом множественных сравнений Даннетта или постфактум-анализом. Тепловые карты дифференциальных метаболитов в плазме С и печени D. Метаболические пути дифференциальных метаболитов в плазме Е и печени F. Рисунок 6 : Сети соединений-реакций-ферментов-генов ключевых метаболитов и мишеней. Узлы низкой степени были удалены. Красные шестиугольники, синие круги, круглые зеленые прямоугольники и серые ромбы представляют активные соединения, гены, белки и реакции соответственно. Ключевые мишени и метаболиты были увеличены. Пути с белым фоном значительно регулируются в плазме. Путь с серым фоном значительно регулируется в печени. Рисунок 7 : Сеть ингредиентов-мишеней-метаболитов-путей. Чем темнее цвет, тем больше связанных краев, означающих, что узел важнее в этой сети. Рисунок 8 : Диаграммы взаимодействия ингредиентов FP и ключевые мишени. D Галловая кислота, действующая на AChE. E Кверцетин, действующий на AChE. F Бета-ситостеролинг действует на АХЭ. Рисунок 9 : Обзор результатов ФП на фоне гиперлипидемии. Пожалуйста , нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка. Таблица 1: Выбранные ингредиенты водного экстракта FP. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы загрузить эту таблицу. Таблица 2: Дифференциальные метаболиты между тремя группами. Таблица 3: Информация об основных мишенях, метаболитах и путях развития. Таблица 4: Сайты связывания и силы действия между ингредиентами FP и белками-мишенями. Дополнительный рисунок 1: Хроматограммы положительных и отрицательных ионов водного экстракта FP. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы загрузить этот файл. Дополнительный рисунок 3: Частотный анализ генов-концентраторов в сетевой фармакологии. Дополнительный рисунок 4: Ионные хроматограммы образцов КК плазмы и печени. Репрезентативные положительные А и отрицательные В ионные хроматограммы образцов КК плазмы. Репрезентативные положительные С и отрицательные D ионные хроматограммы образцов КК печени. Дополнительный рисунок 7: Диаграммы Венна дифференциальных метаболитов в образцах плазмы А и печени В. В последние годы уровень заболеваемости гиперлипидемией увеличивается, в основном из-за долгосрочных нездоровых привычек питания. ТКМ и ее химические ингредиенты обладают различной фармакологической активностью, которая была широко изучена в последние годы 37, FP является своего рода фруктовым ресурсом, используемым как в качестве лекарства, так и в качестве пищи, и обладает важным потенциалом для лечения гиперлипидемии. Тем не менее, потенциальный терапевтический механизм FP против гиперлипидемии нуждается в дальнейшем изучении. Сетевая фармакология оценивает полифармакологические эффекты лекарств на молекулярном уровне и прогнозирует взаимодействие натуральных продуктов и белков для определения основного механизма Первым шагом является выбор активных ингредиентов и ключевых мишеней препарата. В этом исследовании было обнаружено девять активных ингредиентов и 62 гена-концентратора. Для дальнейшего понимания молекулярного механизма ФП при гиперлипидемии на основе анализа сетевой фармакологии были установлены ИПП и сети ингредиент-мишень. Чтобы сузить круг ключевых ингредиентов и мишеней, BATMAN-TCM основала три ключевых ингредиента галловая кислота, кверцетин и бета-ситостерин , связанных с гиперхолестеринемией и коронарным атеросклерозом. Кроме того, согласно анализу обогащения KEGG, функция FP на гиперлипидемию связана с активностью липидного и атеросклерозного пути. Хотя этот метод слишком сильно зависит от базы данных и не имеет экспериментальной проверки, он имеет теоретическую ценность и дает идеи для последующих экспериментальных проверочных исследований. Для дальнейшего экспериментального подтверждения мышей кормили диетой с добавками жиров в течение 8 недель, чтобы вызвать гиперлипидемию. Гистопатологические наблюдения показали, что ткань печени мышей HFD была сильно повреждена, но значительного увеличения печеночного индекса не наблюдалось; Может случиться так, что изменения массы тела и висцерального веса занимают больше времени. Липидные и печеночные изменения адекватно показали влияние вмешательства ФП на гиперлипидемию. Тем не менее, внутренний механизм эффекта вмешательства все еще нуждается в дальнейшем изучении. Метаболомика предоставляет список потенциальных метаболитов и связанных с ними путей, целью которых является изучение механизма метаболических заболеваний и действия терапевтических препаратов На результат метаболомики может влиять тип образца. Учитывая патогенетические особенности гиперлипидемии, для метабономического анализа в данном исследовании были отобраны образцы плазмы и печени. Всего в плазме было обнаружено 16 дифференциальных метаболитов, а в печени - 6 дифференциальных метаболитов. В плазме было больше пораженных метаболитов, чем в печени, что доказывает, что кровь является основным местом метаболического нарушения, вызванного гиперлипидемией. Кроме того, эти дифференциальные метаболиты были импортированы в базу данных KEGG. Значимыми метаболическими путями дифференциальных метаболитов в плазме были метаболизм триптофана, а в печени - метаболизм таурина и гипотаурина. В этом исследовании вмешательство FP увеличило содержание L-кинуренина в метаболизме триптофана и содержание таурина в метаболизме таурина и гипотаурина, что означает, что FP может быть эффективным в благоприятной коррекции метаболических нарушений и гиперлипидемии. Метаболомный анализ показал, какие метаболиты были связаны с гиперлипидемией или вмешательством FP, и определил последующий механизм эффекта FP. Согласно анализу молекулярного стыковки, эти мишени показали высокое сродство с ингредиентами FP галловой кислотой, кверцетином и бета-ситостерином. Четыре метаболита L-кинуренин, кортикостерон, ацетилхолин и рафиноза и четыре связанных пути метаболизм триптофана, биосинтез стероидных гормонов, метаболизм глицерофосфолипидов и метаболизм галактозы были идентифицированы как ключевые метаболиты и метаболические пути. Среди них кверцетин был связан с большинством мишеней, а метаболизм триптофана появился как в метабономике, так и в интегрированных результатах. Они играют наиболее существенную роль в терапевтическом эффекте ФП против гиперлипидемии. Приведенные выше результаты доказывают, что эти скрининговые мишени тесно связаны с терапевтическим эффектом ФП. В настоящем исследовании галловая кислота, кверцетин и бета-ситостерол были идентифицированы как активные ингредиенты FP для антигиперлипидемии, а метаболизм триптофана является основным метаболическим путем терапии FP у мышей HFD. Обзор результата показан на рисунке 9. Это исследование предоставило данные и теоретическую поддержку для дальнейших исследований механизмов и заложило основу для клинического применения медицины FP. Это также доказало, что натуральная пища может быть перспективным вариантом с большими перспективами в клинической практике. Однако в этом исследовании все же есть некоторые недостатки. Терапевтическое влияние одного действующего вещества на гиперлипидемию не проверено. Кроме того, не изучен путь достижения ключевых целей; Он также нуждается в дальнейших систематических экспериментах в области молекулярной биологии для проверки точного механизма. Zeng, B. To learn more about our GDPR policies click here. If you want more info regarding data storage, please contact gdpr jove. You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions jove. Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login. You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free. To get started, a verification email has been sent to email institution. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your 'Spam' folder. Your access has now expired. Provide feedback to your librarian. If you have any questions, please do not hesitate to reach out to our customer success team. Login processing JoVE Journal Medicine. Загрузите электронные таблицы с целевыми показателями заболеваний. Удалите повторяющиеся мишени, чтобы получить список мишеней гиперлипидемии. Скопируйте эти списки из шагов 1. Используйте функцию «Данные - Идентификация дубликатов» на панели инструментов, чтобы получить цели пересечения. Таким образом, предсказывайте эти перекрестные мишени как мишени FP против гиперлипидемии. Вставьте список пересечений целей FP против гиперлипидемии в диалоговом окне «Список имен». Поэтому дальнейшая экспериментальная проверка проводится на мышах. Когда результаты будут доступны, поставьте галочку напротив скрытия отключенных узлов в сети в «Дополнительных настройках». Создание целевой сети по лекарственным компонентам и болезням Откройте Cytoscape 3. Импортируйте файл формата TSV шага 1. Оптимизируйте цвет, шрифт и боковые стороны сетевых узлов с помощью панели стилей на панели управления. Используйте функцию «Анализ сети» для анализа топологии сети. Получите гены-концентраторы с помощью CytoHubba в Cytoscape. Создайте сеть лекарств-ингредиентов-мишеней-болезней. Нажмите « Начать анализ» и вставьте целевой список в левое диалоговое окно. Выберите Homo sapiens в разделе «Выбрать виды». Отметьте список генов в «Типе списка». Нажмите « Отправить список ». Нажмите на функциональную диаграмму аннотаций , чтобы отобразить результаты. Замочите высушенный порошок FP 90 г в 1 л чистой воды в чистой мерной колбе объемом 2 л. Процеживают раствор для получения экстракта двухслойной стерильной медицинской марлей размером 1 мм х 1 мм. Повторите вышеописанную операцию три раза, чтобы обеспечить полное растворение ФП. Используйте метод ротационного выпаривания для дальнейшей концентрации. Сконцентрируйте водный экстракт до мл. Для введения используйте водные растворы с высокими и низкими дозами ФП. Случайным образом распределите мышей на две группы: кормите 10 мышей обычной диетой и 40 мышей диетой с высоким содержанием жиров см. Таблицу материалов , чтобы вызвать гиперлипидемию. На 8-й неделе изымают около мкл крови с каждой орбиты мыши. Определите уровни ТС и ТГ с помощью коммерчески доступных наборов для анализа см. Выберите шесть мышей с наиболее нормальным уровнем липидов в качестве контрольной группы без лечения NC. Таблицу материалов ; и промывание желудка группам NC и HFD одинаковым объемом физиологического раствора один раз в сутки в течение 4 недель. Если реакции нет, это доказывает адекватную анестезию. Получают образцы тканей печени 16 и подвергают их гистопатологическому анализу. Используйте оставшиеся образцы плазмы и печени для анализа метаболомики шаг 3. Извлеките ткань из фиксатора и разгладьте ткани-мишени скальпелем. Поместите салфетку и соответствующую этикетку в дегидратор. Поместите тканевую кассету в тканевую форму в парафиновом воске на три стирки, по 30 мин каждая Поместите пропитанные воском салфетки в тканевую закладку см. Прежде чем воск застынет, извлеките салфетки из дегидратора, поместите их во встроенную коробку и прикрепите соответствующую этикетку. Разрежьте обрезанные восковые блоки на участки толщиной 3 мкм с помощью микротома см. После запекания водой и сухим воском выньте его и держите при комнатной температуре. Испачкайте срезы раствором для окрашивания эозином в течение 2 минут и промойте их водой. Наблюдайте за срезами с помощью оптического микроскопа с увеличением х и х. Точно отмерьте 1 г лиофилизированного порошка FP и поместите его в чистую мерную колбу объемом 50 мл. Взбейте, чтобы полностью перемешать. Для фильтрации используйте микропористую мембрану размером 0,22 мкм. Подготовка образцов плазмы Точно добавьте мкл плазмы этап 2. Выполните эту процедуру для всех образцов. Перенесите надосадочные жидкости после центрифугирования в новую центрифужную пробирку объемом 1,5 мл. Высушите надосадочную жидкость под азотом. Подготовка образцов печени Гомогенизируют 90 мг ткани печени стадия 2. Перелейте надосадочную жидкость в центрифужные пробирки объемом 1,5 мл. Снова извлеките осадки, следуя той же процедуре, и объедините надосадочные жидкости в новые центрифужные пробирки объемом 1,5 мл. Перелейте эти растворители в чистую стеклянную бутылку и соедините их с системой LC-MS. Выполните сбор данных MS, используя как положительный, так и отрицательный режимы ионизации. Импортируйте собранные необработанные данные в программное обеспечение Compound Discoverer и установите шаблон метода, следуя инструкциям производителя см. Таблицу материалов для многомерного статистического анализа интегральных значений, полученных по результатам LC-MS. Используйте ортогональный дискриминантный анализ частичных наименьших квадратов OPLS-DA для среднецентрированных данных и моделирования классов выборки. Визуализируйте представления результатов с помощью MetaboAnalyst5. Найдите названия ингредиентов в поле поиска «Химическое название» и загрузите соответствующие файлы 3D-структур в формате mol2. Найдите имена целевых объектов в поле поиска и загрузите соответствующие файлы кристаллических структур в формате pdb. Импортируйте файлы ингредиентов и целевых структур в программное обеспечение AutoDockTools. Установите ингредиенты в качестве «лиганда» и выполните слепую стыковку, выбрав целые мишени в качестве «рецептора» Введите значение в поле за «центром» и «размером», чтобы скорректировать вновь разработанное пространство, что позволит полностью охватить лиганд и рецептор. Сохраните файлы лиганда и рецептора в формате pdbqt. Используйте AutoDock Vina для выполнения молекулярной стыковки. Задайте для панели «Рецептор» имя «receptor. Получение оптимального места для связывания лиганда с рецептором. Запишите значение энергии связи в оптимальном положении. Все параметры прогона стыковки были значениями по умолчанию. Стыковочные рамы будут автоматически ранжированы от самой высокой до самой низкой энергии связи. Загрузите файлы модели в формате pse и импортируйте их в программное обеспечение PyMOL см. Таблицу материалов для построения дальнейшей визуализации. Выполните одностороннюю ANOVA, за которой следует постфактум наименьшая значимая разница LSD , Даннетта в случае равной дисперсии или T3 Даннетта в случае неравной дисперсии , чтобы проверить статистическую значимость среди групп. Play Video. Cite this Article Zeng, B. Before you can use the favorites feature you must sign in or create an account. Continue with Shibboleth or Forgot Password? Please enter your email address so we may send you a link to reset your password. You might already have access to this content! Please enter your Institution or Company email below to check. Please enter an institutional email address. Check access. Create Account. Forgot Password? Reset Password. Phone number. Request trial. Thank You! A JoVE representative will be in touch with you shortly. Waiting for verification email? Please click here to activate your free 2-hour trial. If you do not wish to begin your trial now, you can log back into JoVE at any time to begin. Enable Javascript for audio controls. Get cutting-edge science videos from J o VE sent straight to your inbox every month. We use cookies to enhance your experience on our website. Continue Learn more Close.

Купить Лирика, амфетамин телеграм Купино