Buy cocaine Chang

______________

✅ ️Наши контакты (Telegram):✅ ️

>>>НАПИСАТЬ ОПЕРАТОРУ В TELEGRAM (ЖМИ СЮДА)<<<

✅ ️ ▲ ✅ ▲ ️✅ ▲ ️✅ ▲ ️✅ ▲ ✅ ️

_______________

Запомни! Важно!🔥🔥🔥

В Telegram переходить именно по ссылке что выше, по другому никак, в поиске фейки и боты!

_______________

Buy cocaine Chang

Pin on Mis looks favoritos

Buy cocaine Chang

Закладки кокса Гавана

Buy cocaine Chang

Купить кокаин Мнемба

Buy cocaine Chang

Buddha View Restaurant, Bang Bao, Koh Chang, Thailand - Приключения желтого чемоданчика

Cones, Bosko, Hashish Elenite

Эта статья описывает, как microinject вирусных векторов в мозг мыши, а затем проверить в кондиционированной парадигму предпочтения места, которое включает в себя приобретение, исчезновение и восстановление фазы. Microinjecting рекомбинантных вирусных adenoassociated rAAV векторов, экспрессирующих Cre рекомбиназу в различных регионах мозга мыши выборочно нокаутом интерес генов позволяет усилить временно-и регионально-специфический контроль делеция гена, по сравнению с существующими методами. В то время как условная делеция также может быть достигнуто в результате скрещивания мышей, экспрессирующих рекомбиназы Cre под контролем промоторов гена мышей, несущих ген floxed, стереотаксической микроинъекции обеспечивающим направление дискретных областей мозга на экспериментатор определенное время точек интереса. В частности,Этот метод позволяет для селективного удаления генов-мишеней во время дискретные фазы поведения, чтобы проверить их вклад в поведение во времени. В конечном счете, это понимание позволяет более целевой терапии, которые являются лучшими в состоянии решать самые мощные факторы риска, которые представляют себя во время каждой фазы аддиктивного поведения. Кокаин является весьма укрепления психостимулятор. После неоднократного воздействия, несколько молекулярной и клеточной адаптации происходят в награду-соответствующими схемами мозга, которые, как полагают, приведет к компульсивным наркотиков поведение, побуждая высокой частотой рецидивов, которые представляют серьезную клиническую проблему 1. Кокаин оказывает эти длительные поведенческие эффекты, регулируя экспрессию генов. Для изучения адаптации, которые возникают из-за хронического употребления кокаина, доклинических моделях грызунов широко используются. Одной из таких моделей является кондиционером место предпочтения CPP парадигмы. Эта модель включает в себя разработку узнали связь между ранее нейтральную среду и полезный свойств кокаина. После нескольких пар кокаина с конкретной камеры, животным позволяют свободно исследовать кокаин-парных и без кокаина среди парных и если они предпочитают наркотиков парного отделения, они, как говорят, приобрел, вызванных употреблением кокаина НОАКэлектронной предпочтения. Кроме того, после периода обучения исчезновения, эта парадигма может быть использована для изучения конкретных условий восстановления кокаина помощью. По сравнению с другими поведенческих моделей привыкание поведение как, например, психомоторного аллерген, который используется для изучения долгосрочного кокаин-индуцированное поведенческие и молекулярные пластичность 2,3 и самоуправления SA , который, как полагают, чтобы более точно имитировать привыкание -подобное поведение у людей, парадигма CPP является простой процедурой для изучения кокаина контекстная обучения 4. CPP протоколов может быть удобно расширена, чтобы включить исчезновение и восстановление фазы, подобно SA, которые позволяют исследование механизмов, лежащих в основе тяга наркотиков и рецидив и которые, как полагают резюмировать аспекты того, что происходит в человеческом наркотиков поведение и лекарственное средство - и кий-индуцированной рецидива Один механизм, который лежит в основекокаин-индуцированное поведенческой пластичности, характерного для каждой из отдельных фаз СРР, включая приобретение, исчезновения, и восстановление, активация уникальный подписи экспрессии генов в различных областях головного мозга. Чтобы непосредственно проверить, какие гены в награду-соответствующих регионах мозга посредником, вызванных употреблением кокаина поведенческие изменения, полезно, чтобы иметь возможность манипулировать ими избирательно в регионально-специфическим образом. Одним из способов достижения этой цели является microinject рекомбинантных вирусных adenoassociated rAAV векторов, которые выражают Cre рекомбиназу использованием стереотаксической хирургии, в различных областях мозга мышей, которые имеют гены-мишени в окружении сайтов LoxP floxed мышей. Этот метод позволяет очень точные временные и региональные управления, когда и где гены абляции, в обоих деления и без деления нейронов, не вызывая иммунный ответ Такой уровень контроля является важным преимуществом по сравнению с традиционными CRE-LoxP технология разведения мышей floxed Wй мышей, экспрессирующих рекомбиназы Cre под контролем эндогенного промотора гена, в то время и распределение делеции гена может быть более жестко регулируется. Кроме того, вирусный вектор-опосредованного нокаут гена обходит потенциал развития компенсационные эффекты, которые могут происходить с использованием традиционных стратегий нокаутом. В дополнение к кокаину CPP, который описан здесь, микроинъекции rAAV-Cre в мозг мышей floxed оценить роль определенных генов могут быть применены повсеместно поведенческие парадигмы, которые включают отдельные фазы, в том числе самоуправления и психомоторных сенсибилизации. Тем не менее, rAAV-Cre стратегия не может быть использован, если мышей с floxed интерес ген не существуют, как это было нашему опыту для оценки роли Са версии 1. Таким образом, ограничение использования rAAV-Cre представляет себя, если условная мышей не существует для конкретного гена. Microinjecting rAAV-Cre в дискретных областях мозга floxed мышей и затем проверить их в парадигме CPP позволяет по расследованию конкретных генов, которые обеспечивают различные фазы привыкания поведение как и где они действуют. Использование этой парадигмы помог в нашем понимании того, как повторное введение кокаина в сущности захватывает брAINS награда схема вызывает неадекватные изменения в молекулярных сигнальных путей и экспрессии генов, которые приводят к зависимым состоянии 1,16, Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian. Все процедуры проводятся в соответствии с Weill Cornell Medical College Уходу за животными и использованию комитета правил. После выполнения CPP микроинъецированных на мышах, следует убедиться, что когорта управления впрыском rAAV-GFP мышей, который обычно приобретается предпочтение наркотиков парные камеры рис. Мышей считается приобретшим предпочтение определенному камере, когда кокаин предпочтения время, проведенное в парной кокаином камере минус время, проведенное в солевой камере парные значительно выше, по сравнению с исходным предпочтение Оценка рис. Если, как когорты, управления впрыском мыши не отдают предпочтение кокаину парные камеру, или показать отвращение, размещение должно быть проверено немедленно через гистологии см. Если предпочтение было нормально, приобретенные управления впрыском когорты, можно впоследствии расширить парадигму начала исчезновения рис. В это время можно восстановить с лекарственным средством Первичный 1А, 1В. Если предпочтение Оценка после введения препарата простые статистически неотличимо от при приобретении, то, что когорта, как говорят, восстановил медикаментозный предпочтение наркотиков парные камеры рис. Если двусторонние структуры были направлены, правильное размещение двустороннего должна быть уточнена люминесцентные иммуногистохимического окрашивания рис. Если правильную область действительно была целенаправленной, окрашивание следует визуализировать исключительно в предназначенных регионе, а не за ее пределами. Если один или оба из инъекции от цели, мыши должна иметь обратную силуLY исключены из CPP набора данных. Другая стратегия для визуализации точной ориентации вирусного вектора-инфицированных областей мозга и последующее вскрытие инфицированной области для биохимических анализов, может быть достигнуто с использованием GFP-осветительный фонарь, как описано в Li и Wolf Рисунок 1а. Экспериментальный график rAAV-Cre микроинъекции и кондиционером место предпочтение приобретению, исчезновение и восстановление фаз. RAAV-Cre это микроинъекции в области интереса недели до начала поведенческого тестирования. Через четыре часа после каждой сессии кондиционирования кокаину, мышиполучала физиологический раствор и ограничивается противоположной камере. Следующий день мышей тестируют на приобретение CPP. Вымирание обучения начинается 24 часов позже, и включает в себя 2 ежедневных сеансов, которые разделены по крайней мере 2 часа, которые позволяют бесплатно доступ ко всему аппарат. Представитель результаты базовых, приобретение, вымирание обучения и восстановления на работе. Гомозиготные Ca V 1. После максимальной активации Cre мышей умерщвляли и мРНК была выделена и относительных уровней экспрессии были исследованы с помощью количественной полимеразной цепной реакции использованием Ca объем 1,2 специфические праймеры. Рисунок 1D. Нажмите здесь, чтобы увеличить рисунок. Регионально-и временно-специфический ген абляции с помощью стереотаксической микроинъекции вирусных векторов в сочетании с CPP, которая включает исчезновение и восстановление фазы позволяет для исследования конкретного вклада генов в трех различных фазах привыкание-подобное поведение. В то время как условные нокаутом, которая достигается использованием традиционных CRE-LoxP система обеспечивает пространственно-временно запрещен гена абляция, стереотаксически microinjecting CRE-рекомбиназу на дискретные области мозга мышей floxed позволяет еще более жесткий контроль, когда и где ген нокаутирован. Кроме того, это позволяет обойти возможность компенсационных изменений, происходящих в процессе развития, которые иногда приходится ограниченное фенотипическая изменчивость наблюдается в нокаут мышей. Кроме того, использование когорты мышей, которые были микроинъекции в различные моменты времени в течение поведение может позволить причинные связи должен быть заключен между изменением в экспрессии генов и изменение поведения. Importantly, эта методика может быть применена к нескольким различным кокаин поведенческие парадигмы в том числе самоуправление и психомоторных сенсибилизации. Важно, чтобы ждать по крайней мере дней после операции для обеспечения максимальной активации рекомбиназы Cre произошла Начиная с поведенческим тестированием до это может привести к использованию мыши с неизвестным количеством субмаксимальной выражение Cre, что делает поведенческие результаты трудно интерпретировать. Максимальной активации результатов Cre в полном нокауте гена, однако это происходит только в клетках, которые на самом деле инфицированы. Кроме того, этот метод идеально подходит для длительного поведенческие парадигмы, как когда-то Cre активация происходит в естественных условиях, его выражение и соответствующее нокаутом гена длится не менее 6 месяцев Если кто-то заинтересован в изучение роли гена над более дискретных периода времени, однако, что не возможно с этим конкретным способом. Для краткосрочных выражение, вирус простого герпеса вирусный HSV векторы могут быть использованы, которое предпочтительно инфицирует нейронов По сравнению с rAAV выражение Cre рекомбиназу, которая сохраняется в течение более длительных периодов как промотор не замолчать после нескольких дней или недель, в естественных условиях 23, HSV векторов являются предпочтительными для временной экспрессии как они выражаются в естественных условиях в течение нескольких дней. HSV векторов также имеют преимущество в том, что они демонстрируют общее эффективности трансдукции и что помощник вирусов существуют запасы Кроме того, HSV векторов также можете выразить Cre RECombinase и посредником иссечение floxed последовательности как в культуре, и в естественных условиях Тем не менее, иногда цитотоксичность был найден. Практически в любом регионе в мозге могут быть направлены с помощью этого микроинъекции. При попытке целевой меньшей подобластей в пределах большей области, можно необходимо оптимизировать количество вирусного вектора, используемого. Кроме того, изучение различных вариантов серотипа, каждая из которых распространение инфекционной дифференциального и свойств см. Чой и соавт. И наоборот, если попытка целевой большей области, можно увеличить объем вирусного вектора микроинъекции. Это яс более эффективным, чем использование более высоких титров вектором, как они, вероятно, дать дополнительные инфекции на клетку по сравнению с более высоким числом от общего числа клеток, зараженных Кроме того, можно выполнять многократные инъекции в пределах области или нескольких областей, чтобы более эффективно инфицировать большей площади Использование векторов rAAV также выгодно по сравнению с другими вирусными векторами, которые используются для изучения функции мозга и заболевание. В частности, традиционные аденовирусных векторов оказалось проблематичным в том, что они индуцированных тяжелых воспалительных реакций, в то время как другие векторы, такие как ретровирусы и лентивирусов может включать в себя проблемы с инсерционного мутагенеза. Более того, в отличие от других вирусных векторов, трансдукции rAAV происходит без выражения родного AAV 27 вирусных белков, что делает вторичные эффекты на клетки-мишени гораздо меньше беспокойства. Кроме того, rAAV векторы в настоящее время производится, которые могут ориентироваться на конкретные подтипы нейронов в мозге мыши 29 и CRE-зависимые системы rAAV выражение также все более широкое применение см. Чжан и др.. Таким образом, кокаина CPP служит простым, но информативным поведенческих инструментом для изучения кокаина контекстная обучения, имеющие отношение к приобретению, исчезновения, и ее восстановление кокаином помощью. Сочетание использования rAAV выразив Cre рекомбиназу у мышей, несущих аллель floxed с CPP предоставляет мощную стратегию для изучения роли генов-мишеней в определенных областях мозга, которые опосредуют кокаина помощью. Авторы хотели бы поблагодарить Анни Ли Бирн и Морин за помощь в создании расширенного протокола кондиционером предпочтение месте. Schierberl, K. To learn more about our GDPR policies click here. If you want more info regarding data storage, please contact gdpr jove. Your access has now expired. Provide feedback to your librarian. If you have any questions, please do not hesitate to reach out to our customer success team. Login processing JoVE Journal Behavior. Log in or Start trial to access full content. Подготовка и настройка для стереотаксической Доставка вирусных векторов Если в векселе, стерильный тампон, или руки, носить стерильные перчатки загрязненных вступления в контакт с нестерильной поверхностью, отказать или повторной стерилизации инструмента с использованием горячего стерилизатор шарик, отказаться от тампона или изменить новые стерильные перчатки. Наведите мышь клетке с постельными принадлежностями на нагревательный блок, чтобы нагреть для послеоперационного восстановления. Настройка электрическая бритва для бритья головы и этанола и йода для стерилизации кожи головы. Микроволновая печь грелку или включить электрическую накладка нае место на stereotax. Накрыть чистой абсорбирующей прокладки, чтобы уменьшить риск ожогов. Монитор мыши температуры тела между После того, как мыши под наркозом, кончик хвоста щепотку, чтобы проверить рефлексы мыши и отметить любое движение или ответа для того, чтобы адекватно мышь под наркозом. Бритье головы между ушами и глазами. Очистите бритая голова с чередующимися этанола и йода стерильные аппликаторы хлопка. Передача мышь с подогревом накладка на stereotax. Стереотаксические Микроинъекции вирусных векторов Носите стерильные перчатки всей операции. Если перчатки загрязнены в любой момент, нажав нестерильных поверхностей, меняйте перчатки. Нулевой бар зуба и весов ухо бар. Установить зубов в зубном бар. Винт в морду. Винт на ухо баров. Смажьте глаза PuraLube. Разрезать кожу головы, чтобы сразу за уши с помощью скальпеля. Место бульдог клипы на углах кожу головы, чтобы очистить кожу от черепа. Брегмы и лямбда должна быть хорошо видна. Убедитесь, что шов от темени к лямбда выровненную. Если шов кривым повторно выверить позиционирование головки. Убедитесь, что все настройки stereotax обнуляются. Положите кончик иглы в место на темени. Измерьте все координаты для обоих брегмы и лямбда. Регулировка подголовника до вентральной координат брегмы и лямбда не находятся в пределах 0,02 мм друг от друга. Удостоверитьсялевую и правую стороны выровнены в пределах 0,02 мм друг от друга. При необходимости угол иглы в одном направлении и убедитесь, что stereotax заблокирована. Дрель скважины помощью стерильного сверла в нужном координат. Убедитесь, что игла может ввести непрерывное через череп. Опустите иглу в нужное вентральной координат. Подождите 3 минуты для вирусного вектора диффундировать полностью. Поднимите кончик иглы 0, мм и ждать еще 2 мин. Опустите иглу если делать инъекции угловой в противоположном направлении. Опять же, записи вентральной позиции в качестве ссылки для верхней части черепа. Повторите те же шаги, на первой стороне для введения вирусного вектора на противоположной стороне если это двусторонний инъекций. Применение костного воска оба отверстия для уплотнения их с помощью деревянных конец стерильной аппликатор хлопка. Шовный кожу головы. Применить блока нерва к раненым области. Удалить мышь от stereotax и место в клетке на нагревается нагревательный блок для восстановления в течение 45 мин. Следить за признаками боли, включая: снижение общей активности или беспокойство, снижение потребление пищи и воды или повышенной вокализации. После приучения, открытые двери гильотинного и позволяют мышам свободное исследование все 3 камеры для с, причем время, проведенное в каждой камере быть записаны с помощью программного обеспечения MedPC IV Med Associates, Inc. Назначить мышей кондиционирования камер на основе своего выступления во время предварительного теста. Использование предвзятым дизайна, пара медикаментов в течение последующих 3-х дней с отсек, в который был наименее предпочтительным в течение базового предварительного теста. Вернуться мышей, чтобы их дом клетках после сессии. Чтобы проверить на приобретение, место мышей в центральной камере с гильотиной двери закрыты на период привыкания 60 сек. Открытые двери гильотинного и позволяют свободное исследование на сек, время, проведенное с во всех камерах записаны MedPC IV программное обеспечение Med Associates, Inc. Рассчитать предпочтения путем вычитания количества времени, проведенного в солевой камере парные от количества времени, проведенного в кокаин-парные камеры. Для тушения месте предпочтений, подвергать мышей с двумя 20 мин сессий свободное исследование ежедневно в том же устройстве, разделены по крайней мере 2 часа, начиная с 24 часов после проведения испытаний, для приобретения. Время, проведенное во всех камерах должны снова быть записаны и величины начальной CPP следует сравнению с каждым сеансом. Play Video. Cite this Article Schierberl, K. Before you can use the favorites feature you must sign in or create an account. Continue with Shibboleth or Forgot Password? Please enter your email address so we may send you a link to reset your password. Please enter your institutional email to check if you have access to this content. Please create an account to get access. Forgot Password? To receive a free trial, please fill out the form below. Not your institution? A JoVE representative will be in touch with you shortly. You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions jove. Thank You. Please enjoy a free hour trial. In order to begin, please login or create an account. Please click here to activate your free hour trial. If you do not wish to begin your trial now, you can log back into JoVE at any time to begin. Enable Javascript for audio controls. Get cutting-edge science videos from J o VE sent straight to your inbox every month. We use cookies to enhance your experience on our website. Continue Learn more Close.

Купить кокс Пунта-Кана

Buy cocaine Chang

Закладки мефедрона Анаклия