Амфетамин Лёвен Бельгия

• • • • • • • • • • • • • • • • •

• • • • • • • • • • • • • • • • •

Гарантии ❗ Качество ❗ Отзывы покупателей ❗

• • • • • • • • • • • • • • • • •

👇 👇 👇 👇 👇 👇 👇 👇 👇 👇 👇 👇

Наши контакты:

▶️▶️▶️ (НАПИСАТЬ ОПЕРАТОРУ В ТЕЛЕГРАМ)️ ◀️◀️◀️

👆 👆 👆 👆 👆 👆 👆 👆 👆 👆 👆 👆

• • • • • • • • • • • • • • • • •

🚩 ИСПОЛЬЗУЙТЕ ВПН (VPN), ЕСЛИ ССЫЛКА НЕ ОТКРЫВАЕТСЯ!

🚩 В Телеграм переходить только по ссылке что выше! В поиске тг фейки!

• • • • • • • • • • • • • • • • •

Амфетамин Лёвен Бельгия

До сих пор, C. Мы разработали подкожный крысиной модели в естественных условиях для изучения С формирование Albicans биопленки. В нашей модели множественного до 9 Candida -infected устройства имплантируют в задней части животного. Это дает нам большое преимущество над центральным венозным катетером модельной системы, так как позволяет нам изучать несколько независимых биопленки в одном животного. В этой модели, зрелые С альбиканс биопленки развиваются в течение 48 ч и демонстрируют типичное трехмерное архитектуры биопленки. Количественное грибковой биопленкитрадиционно анализируются после смерти и требует хоста жертвы. Поскольку это требует использования многих животных для выполнения кинетических исследований, мы использовали неинвазивный биолюминесценции изображений BLI , чтобы следовать в продольном направлении в естественных условиях зрелых С Albicans биопленки развития в нашей подкожной модели. С альбиканс клетки, сконструированные для экспрессии гена принцепс люциферазы Gaussia Gluc , прикрепленный к клеточной стенке. Сигнал биолюминесценции получают путем люциферазы, который преобразует дополнительное подложки коэлентеразина в свет, который может быть измерен. Сигнал BLI напоминал количества клеток, полученных из эксплантированных катетеров. Неинвазивная визуализация для количественной оценки в формировании естественных биопленки обеспечивает немедленную приложения для скрининга и подтверждения противогрибковых препаратов в условиях естественных условиях, а также для исследований, основанных на хозяин-патоген взаимодействий, настоящим способствует лучше понятьчисле патогенеза катетер ассоциированных инфекций. Candida Albicans является синантропных организма, которые могут быть найдены в различных местах здоровых лиц, например на кожу или в виде части желудочно-кишечного тракта и вагинальной флоры. Тем не менее, в больницу, и особенно у пациентов с иммунодефицитом, это может привести к широкий спектр инфекций 1. В таких лиц, ослабленная иммунная система позволяет Candida клеток для распространения в кровоток и вторгнуться глубокие ткани, вызывая угрожающих жизни инфекций. Кроме того, присутствие абиотических субстратов, таких как центрального венозного и мочевых катетеров, искусственных клапанов сердца и суставов могут служить ниши для крепления Candida 2. Адгезия к таким субстратов является необходимым условием для дальнейшего развития биопленки, которая представляет собой слой дрожжей и гиф клеток, встроенных в внеклеточной полимерного материала, в основном состоящий из полисахаридов 2. Общая характеристика биопленки является их снижения чувствительности к известным противогрибковые препараты, такие как азолов 3,4. Только новые классы противогрибковых препаратов, таких как эхинокандинов и липосомальной композиции амфотерицина оказался активным против катетер-ассоциированной инфекции Из-за биопленки устойчивости к противогрибковые препараты, лечебные подходы являются весьма ограниченными, что часто приводит к удалению катетера и его последующей заменой в качестве единственного решения. Большинство нашего нынешнего понимания С. Эти модели являются весьма прогрессивным и попытаться имитировать ситуацию в естественных условиях, насколько это возможно. Тем не менее, эти системы не связаны с непрерывным потоком крови и тон иммунная система хозяина. Это привело к разработке систем в естественных условиях модели, такие как центральный венозный катетер CVC модели протеза стоматита модели кандидоза полости рта 11 и мышиной модели для катетер-ассоциированной кандидурия Кроме того, С. Развитие Albicans биопленки изучали на крысах на поверхности слизистых оболочек, таких как те, из влагалища 13 и полости рта Наша лаборатория вклад с созданием подкожного С Albicans биопленки модель, которая основана на имплантат зараженных катетер частей на задней Sprague Dawley крыс Эта модель была успешно использована в нашей лаборатории, чтобы проверить биопленки восприимчивость к флуконазолу и эхинокандин наркотики 5,16, для изучения влияния комбинаторной терапии диклофенака и каспофунгином Впо сравнению с другими в моделях естественных условиях, главным преимуществом этого подкожной модели возможность учиться несколько биопленки на одно животное, разработанной внутри просвета имплантированных катетер штук. Чтобы уменьшить количество лабораторных животных, мы адаптировали эту модель для изучения развития C. Albicans биопленки неинвазивным путем использования биолюминесценции томография BLI 18, Этот метод оказался мощный метод, который может быть использован для количественного биопленки путем измерения определенный сигнал BLI в интересующей области в нашем случае площадь имплантированных катетеров , избегая жертву животных. По сравнению с бактериями, которое можно выразить как ген и подложки, необходимое для проведения реакции биолюминесценции в связи с введением определенного лк оперона 20 большинство из эукариотических организмов, в том числе С Albicans, зависит от гетерологичной экспрессии гена люциферазы в сочетании сВнешний введение специфического субстрата, такого как D-люциферин или коэлентеразина Возможно из-за присутствия грибковых клеточной стенки и С. Albicans морфогенез, внутриклеточной доставки субстрата для фермента люциферазы был основной проблемой Для того чтобы решить эту проблему, Enjalbert др. Albicans кодон-оптимизированная версия гена естественно, выделяемой Gaussia принцепса люциферазы Gluc был присоединен к к С. Из-за присутствия люциферазы в клеточных стенок, проблемы, связанные с внутриклеточной доступности субстрата можно было бы избежать. Это особая система была использована для изучения поверхностных инфекций, вызванных C. Albicans Совсем недавно, BLI был также использован, чтобы следовать прогрессирование орофарингеального кандидоза и его possiblе лечение Такие выводы поддерживают использование BLI как перспективный метод для изучения инфекций, вызванных свободно живущих клеток, но также устройств, ассоциированных инфекций. Мы предлагаем подробный протокол колонизации в пробирке полиуретановых катетеров в период адгезии с последующим имплантации у мышей и последующего развития биопленки в живых животных. Помимо измерения сигнала BLI излучаемого С альбиканс клетки мы также определить колониеобразующих единиц для сравнения со стандартным техники для нагрузки количественной биопленки грибковой,. Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian. Поддержание животных в соответствии с руководящими принципами по уходу за животными KU Leuven. Экс естественных C. Количественная оценка биопленки, связанные ячейки путем колониеобразующих единиц графа КОЕ и статистического анализа результатов. В этом исследовании, мы показываем хирургическую процедуру катетера имплантата и эксплантата во время в естественных условиях C. Разработка Albicans биопленки у мыши. Как показано на фиг. Этот шаг очень важен, поскольку он позволяет Candida клеткам прикрепляться к субстрату быстрее, по сравнению с покрытием имплантатов без сыворотки Важно отметить, что до какой-либо С Albicans эксперимент мы впервые зафиксировали фонового свечения наших устройств Этот шаг является решающим перед выполнением любой BLI, потому что высокая фосфоресценции устройства будет вмешиваться в оценки конкретных интенсивности биолюминесценции сигнала и сигнала кинетики от gLuc- экспрессирующих клеток. Далее, C. Albicans клетки инкубировали с сывороткой покрытием катетер части. Катетер фрагменты затем имплантируют на задней части животного после подкожного надреза фиг. В этом ин виво, созданной, две насечки выполняются один справа и еще один на левой стороне задней части мыши с последующим образованием подкожных туннелей внутри каждого разреза 2А 3 , Впоследствии три устройства, ранее инфицированных клеток Candida, имплантируют в каждом месте эксплуатации фиг. Этот комплекс мер позволяет изучать до шести биопленок на животное. Следует отметить, что два операционных сайты предоставляют возможность изучать образования биопленки на двух различных штаммов интерес, например, дикого типа и мутанта в то же животного. Биопленки, разработанные внутри задней части животного оценивали для измерения биолюминесценции сигнала. Один из представительных животных, отображающих сигнал биолюминесценции вместе с прямоугольниками, характеризующих области интереса трансформирования показана на фиг. После последнего BLI момент времени, катетеры эксплантировали, обрабатывали ультразвуком и затем перемешивали и далее оценивали для формирования биопленки клеток количественного определения КОЕ. Анализ данных, свидетельствующих Войти 10 КОЕ, полученные от каждого катетера на участке после развития биопленки и эксплантация показаны на рис 4А. Девяносто минут после имплантации четкий сигнал BLI производится ACTgLuc экспрессирующие биопленки тогда как у дикого типа, свет практически не производится; Интенсивность света, обнаруживается из экспрессирующие ACTgLuc биопленки значительно возрастает как биопленка образуется, здесь в том же мыши рис 4в , Это увеличение в свете следует той же тенденции, как увеличение КОЕ в биопленки рис 4а. В наших экспериментах мы наблюдали, что нормальное штамма дикого типа не сконструированные для экспрессии люциферазы также приводит к получению света при добавлении субстрата. Тем не менее, поток фотонов был значительно ниже, чем полученный в инженерии штамма. Взятые вместе, наши данные показывают, что BLI является мощным средством для контроля и количественной оценки в естественных условиях зрелой С. Рисунок 1: Получение полиуретана устройств полиуретан часть катетера нарезать 1 см кусочки.. Пластиковые PoCКетский содержащий катетер открыт под стерильных условиях и все части, за исключением того, катетер удален из пакета. Во-вторых, место правителя под пластиковой кармане и сократить ровно 1 см полиуретановые штук. Рисунок 2: Основные шаги в процессе операции на животных. Процедура катетера имплантата. Создать подкожного туннеля внутри каждого разреза и место 3 катетеры внутри. B Процедура удаления катетера. Вырезать рану прямо над катетеров. Место для отдельной трубки микроцентрифужных. Рисунок Измерение биолюминесценции сигнала В естественных условиях BLI изображения с одного репрезентативного мыши отображены после 6 дней развития биопленки. Количественная оценка интенсивности сигнала осуществляется путем размещения области интереса ROI прямоугольник вокруг катетеров с последующим измерением потока фотонов в секунду через каждый ROI. В естественных условиях зрелой С. Сигнал был определен после 90 мин период адгезии , 2 дня и 6 дней развития биопленки. В качестве контроля использовали мышей, которые были имплантированы с не-колонизировали катетеров и подкожную инъекцию CTZ. Поток фотонов, полученные в этих мышей приводит в нашем фонового сигнала BG. В естественных условиях биолюминесценции изображения из одной репрезентативной мыши, которые были имплантированы с катетером фрагментов, содержащих дикого типа C. Мышь была отображена в трех различных периодов времени, то есть 90 мин, 2 дней и 6 дней после имплантации фрагментов катетера. Использование моделей животных, и особенно грызунов моделей, для исследования, посвященные микробных биопленок очень важно, так как иммунная система хозяина является существенным фактором в формировании биопленки, что модели в пробирке не может объяснить. В этом исследовании мы описываем относительно простой подкожной С Albicans модель биопленки мышь, которая может быть легко принят в научно-исследовательской лаборатории и не требует серьезных технических навыков. Эта модель изначально была разработана для изучения формирования эпидермального стафилококка биопленки на крысах, Это первый шаг в пробирке можно рассматривать как ограничивающий фактор из-за отсутствия иммунной системы на самых первых этапах процесса биопленки инфекции. После адгезии и доКатетер имплантат, не устройств, связанные клетки удаляются промывкой. Как избежать стадии промывки после периода адгезии может создать неуправляемый количества клеток, связанных с устройством. По этой причине, мы предлагаем, чтобы вымыть катетеров до имплантата, и поэтому, чтобы начать свое развитие от прилипших клеток. На этом этапе Candida образует зародышевые трубы, которые крепятся на основу. Для того, чтобы походить на ситуацию в госпитализированных пациентов, которых иммунная система часто под угрозу, мы иммуносупрессии крыс в нашей подкожной модельной системе Частичное нарушение функций иммунной системы крысы, до имплантата устройства и на протяжении всего периода развития биопленки, привело к увеличению воспроизводимости биопленки клеток, образующих, полученных изКатетеры имплантированные в том же хосте, а также от устройств, полученных из дополнительных животных. Из-за этих выводов мы предлагаем immunosuppress мышей до катетера имплантата, а также в период образования биопленки. Тем не менее, наши результаты показывают, что различия в иммунокомпетентных мышей значительно меньше по сравнению с наблюдаемым у крыс, что делает что мыши модельную систему также подходит для изучения роли иммунной системы хозяина на биопленок. В нашей исходной модели на крысах, а также в одной и той же модели в переводе с мышами, пожилые С Albicans биопленки развиваться в 48 ч продемонстрировано аналогичным количеством КОЕ биопленки и архитектуры между 2 и 6 дней 15,18, Подкожной модель биопленки была успешно использована следить за развитием биопленки нескольких мутантов Было показано, ранее Нобиле др. Этот штамм отображается элементарные функции биопленки в нашем подкожной модели, указывающей на то, что фенотипические изменения, обнаруженные в модели CVC может быть воспроизведен в подкожной модели По сравнению с другими существующими моделями, т. Несмотря на эти преимущества, недостаток может быть отсутствие кровотока, что может привести к определенным лишением питательных веществ в биопленки. Таким образом, в перспективе питательных поставок и условий окружающей среды, подкожной модель больше связана с аппаратно-инфекций, связанных с разработанными на протезы суставов, голосовые протезы и кардиостимуляторами, чем те, сформированных на внутривенных катетеров. Что еще более важно,перевод крысы системы подкожной биопленки на мышей из этой модели на животных совместимы с BLI, что дополнительно снижает затраты и, самое главное, количество необходимых животных. Кроме того, перевод модели крысы мышам позволяет использовать трансгенных мышах для изучения факторов хостов, относящиеся к катетер-ассоциированной инфекции исследований. Основное преимущество использования BLI количественно биопленки в живых животных заключается не только в неинвазивной характера этого метода, но и в его способности обеспечить динамическую информацию о развитии инфекции. В этом исследовании Gluc выражается в клеточной стенке С Albicans позволило лучше доступности и прямое взаимодействие с подложкой коэлентеразином, которые имеют решающее значение для выявления биолюминесцентной сигнала в естественных условиях. При исследовании Ванде Вельде и др. Albicans биопленки разработан на foreiGN органы в пробирке. Интенсивность сигнала BLI сильно переписывался с данными, полученными из дополнительных методов биопленки количественного, то есть КОЕ определения и XTT снижение анализа данных. Рядом с этими результатами мы показали, что биолюминесценции сигнал от естественных условиях биопленки в сходился с количеством биопленки, связанные клеток, выделенных из эксплантированных биопленок. Кроме того, Вандевельде др. Такие выводы решительно поддерживаем использование BLI в ходе исследования, посвященные оценке временной ход развития биопленки и инфекции в тех же животных. При этом, мы описали экспериментальную процедуру в естественных условиях подкожного имплантата устройств Candida -infected с последующим мониторингом ОF в естественных условиях развитие биопленки BLI. Взятые вместе, BLI показали, что надежная техника, которая позволила нам следовать инфекции с течением времени избежать жертвоприношения животных в каждый момент времени из анализа данных. To learn more about our GDPR policies click here. If you want more info regarding data storage, please contact gdpr jove. You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions jove. Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login. You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free. To get started, a verification email has been sent to email institution. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your 'Spam' folder. Your access has now expired. Provide feedback to your librarian. If you have any questions, please do not hesitate to reach out to our customer success team. Login processing JoVE Journal Medicine. Albicans роста Через двадцать четыре часа до начала эксперимента животных, готовят YPD пластины путем добавления 10 г дрожжевого экстракта гранулируют, 20 г бактериологического пептона и 15 г гранулированного агара. Макияж объем до мл с Milli-Q воды и автоклава. Тщательно перемешать и разлить в чашки Петри. Оставьте агаром для охлаждения и отверждения. До всех штаммов эксперимент стрик на качестве YPD пластины. Катетер шт Приготовление Перед экспериментом определить, сколько необходимо катетеры. Это можно имплантировать до 6 штук в катетер мыши 3 катетеров слева и 3 катетер на правой стороне животных фиг. Двадцать четыре часа до операции животных, открыть упаковкувозраст, содержащий тройной люмен катетер под бокс биологической безопасности. Удалить все ненужные части с стерильных пинцетов и сократить часть, прикрепленную к катетеру стерильным скальпелем. Поместите линейку под пластиковой упаковке и сократить полиуретан катетер куски ровно 1 см по шкале на линейке рис 1. Поместите максимум 15 вырезать катетер штук шагом. Всегда готовьте 3 штук дополнительных, которые используются для перечисления количество присоединенных клеток Candida на устройстве после периода адгезии. Полностью охватить все катетер части с сывороткой. Держите иммуносупрессии животных в течение всего эксперимента до 6 дней. Albicans Сцепление на FBS-полиуретановым покрытием Поверхности Передача каждого сыворотки покрытием катетера часть в свежем 1,5 мл микроцентрифужных трубки. Очистите от некоторых C. Развести Может Dida клетки 1: в отдельном микроцентрифужных трубки. Возьмите 10 мкл разведенного образца и применить его на счетной ячейки камеры. Граф по меньшей мере 16 маленьких квадратов. Добавить 1 мл клеточной суспензии в каждую сыворотки покрытием катетера части. Энергично вихрь и убедитесь, что катетеры погружены в среду, и не плавающие на поверхности. Удалить катетеров стерильных пинцетов и промойте их в два раза с 1 мл PBS. На этом этапе убедитесь, что промывочная жидкость проходит через просвет, сохраняя катетер в вертикальном положении, а очень аккуратно промывки катетеров. Главное, не использовать сильный поток, который может привести к удалению прикрепленных клеток. Передача каждого промывают катетер на чистую пробирку микроцентрифужных одна часть по ТУбыть. Поместите на льду и держать там, пока хирургии. После введения наркоза, поместите животное в отдельной клетке и подождите, пока он полностью не спят. Подтвердите надлежащего обезболивания животного светом кожной складки и ног крайнем случае, которые не причиняют никакого вреда для кожи. Любое наблюдаемое движение указывает, что животное не в достаточной степени анестезии, чтобы выполнить операцию. Если это произойдет, подождите корPLE минут дольше, пока животное не показывает никаких признаков движения на кожу, или ноги крайнем случае. Кроме того, можно использовать изотермические колодки, которые должны быть нагреты в микроволновой печи до операции животных. Применение глазной мази на глазах. Бритье нижней части спины животного с электрической бритвой. Удалить все волоски животных и передать животное на чистой ткани. Проанализируйте подкожном слое с ножницами, чтобы создать два подкожные тоннели. Каждый туннель должен быть примерно 1,5 см в длину и 1 см в ширину. Вставьте три катетера штук, ранее инфицированных Candida, в каждом туннеле. Убедитесь, что катетеры расположены рядом друг с другом в горизонтальном расположении и что они не перекрывают друг друга, чтобы дать возможность имплантации шести фрагментов катетера в общем фиг. Закрыть разрезы со швами. Администрирование вспять анестезии протокол 5, шаг 2 : внутрибрюшинно мкл на 10 г веса тела. Передача животных в чистую клетку ранее размещенных на нагревательной пластине. Держите животноеотдельный и теплый, пока животное не полностью проснулся. Между тем, по-прежнему в эксплуатации и имплантата следующего животного. После того, как все оперированных животных полностью проснулся. Трансфер в одной клетке. Монитор животных регулярно. Подготовьте 1,2 рабочего раствора мМ разбавлением исходного раствора соотношении стерильным PBS. Используйте инсулиновые шприцы для подкожного введения ЧТЗ. Биолюминесценция изображений Инициализировать камеру BLI. Обезболить животных с использованием индукционной окно. Перед началом сеанса формирования изображения, поместить изображения пластину в положение А, что соответствует в поле зрения 10 см. Убедитесь, что в правой позиции анестезии точек и животного путем размещения спящего животного в коробке. Возьмем несколько фотографий, пока животное не в нужном положении формирования изображения, в поле зрения прямо под камерой. Приготовьте два инсулиновые шприцы каждый содержащий мкл рабочего раствора ЧТЗ. Поместите одно животное на скамейке и держать его спящим с помощью носового конуса, обеспечивающих газа анестезии. Принесите иглы шприцев в месте вокруг катетеры подкожно и придатьCTZ одновременно на верхней части катетера. Сразу же после инъекции, поместите животное на теплой плите в поле камеры и запустить сканирование биолюминесценции изображения. Приобретение последовательных сканирований с Время сбора данных в пределах от 20 до 60 сек в зависимости от интенсивности сигнала до тех пор, максимальная интенсивность сигнала не будет достигнута. При приобретении следующего кадра, измерять интенсивность BLI сигнала ранее приобретенных кадров путем размещения ROI по каждому катетеров трио и измерения потока фотонов через эту ROI. Повтор со стадии 7 в следующем животного ов. После обработки изображений, вернуться животных в клетку. Повторите BLI в ходе эксперимента по продольной неинвазивного наблюдения образования биопленки. Поместите прямоугольную ROI фиксированного размера за каждый катетера трио и измерить поток фотонов сияние через каждый ROI. Повторите эту процедуру для каждого животного. Представлять данные BLI по логарифмической шкале, откладывая среднюю и SD потока фотонов в секунду для каждой группы. Выполните статистический анализ преобразованных данных журнала Катетер эксплантата Подготовка микроцентрифужных пробирки, содержащие 1 мл PBS, по одной для каждого катетера устройства и сохранять их на льду. Эвтаназии животных путем смещени шейных позвонков фиг. Сделайте надрез примерно 3 см над катетеров. Сокращение подкожной ткани и удалить фрагментов катетера по одному из-под подкожной ткани с помощью пинцета стерильные фиг. Место каждого катетерачасть в отдельном микроцентрифужных трубки полученного на стадии 1. Количественная оценка биопленки, связанные ячейки путем колониеобразующих единиц графа КОЕ и статистического анализа результатов Соникатные катетеры, ранее помещенных в 1 мл PBS в течение 10 мин при Гц на водяной бане ультразвуком и поместите их на лед. После обработки ультразвуком, энергично вихрь в течение 30 сек и место снова на льду. Приготовьте два дополнительных микроцентрифужных пробирки, содержащие мкл PBS. Сделать и 1: разведения от вашего исходного образца тот, который содержит катетер и соблюдать все микроцентрифужных пробирок на льду. Пластина мкл исходных образцов, и один: разбавлени на YPD агаровые пластины в дубликате. Кроме того умножить каждый кусок катетера по 10x, что соответствует конечного количества колоний в 1 мл пробирку, содержащую катетер. Укажите конкретные группы для сравнения, то есть WT против мутанта или 2 дней против. Экспресс уровень значимости по значению р. Play Video. Before you can use the favorites feature you must sign in or create an account. Continue with Shibboleth or Forgot Password? Please enter your email address so we may send you a link to reset your password. You might already have access to this content! Please enter your Institution or Company email below to check. Please enter an institutional email address. Check access. Create Account. Forgot Password? Reset Password. Phone number. Request trial. Thank You! A JoVE representative will be in touch with you shortly. Waiting for verification email? Please click here to activate your free 2-hour trial. If you do not wish to begin your trial now, you can log back into JoVE at any time to begin. Enable Javascript for audio controls. Get cutting-edge science videos from J o VE sent straight to your inbox every month. We use cookies to enhance your experience on our website. Continue Learn more Close.

Могилёв купить Бошки Шишки