Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор В. Майский доктор медицинских наук, профессор В. Островитянова Актуальность проблемы. К ним прежде всего относятся пептиды, обладателе антиопиоидными свойствами: фрагмент бета-эндорфина Suh H. Имеются также данные о наличии гипералгетической активнос-и у субстанции Р Matsumara Н. Вместе о тем показано, что в условиях болевого оздействия в сыворотке крови происходит изменение содержания яда неизвестных веществ бедково-пептидной природы Drysdale. Также имеются данные об облегчающем влиянии. Следовательно, наряду с хорошо изученными белково-пептидными системами с аналитической и гипералгетической активностью в крови млекопитающих присутствуют и другие вещества белково-пептидной природы, участвующие в регуляции боли. Таким образом, детальное изучение в указанном аспекте новых белко-во-пептидных фракций, выделенных из сыворотки крови млекопитающих, и их активных метаболитов позволит существенно расширить современные представления о белково-пептидных механизмах регуляции боли, что может явиться фундаментом нового подхода к эффективному лекарственному обезболиванию. Цель х задачи исследования. Целью настоящей работы являлось изучение характера и механизмов влияния белково-пептидных фракций сыворотки крови человека и млекопитающих на болевую чувствительность. Выявить наиболее активные в отношении влияния на болевую чувствительность белково- пептидные фракции сыворотки крови различных видов животных и человека. Исследовать влияние на болевую чувствительность отдельных компонентов наиболее активной фракции. Оценить характер взаимодействия суммарных фракций и их наиболее активных компонентов с эндогенными и экзогенными опиатами и опиоидами. Научная новизна исследования состоит в том, что впервые получены данные о наличии гипералгетических свойств у белково-пептидных фракций сыворотки крови человека и животных, и выявлена наиболее активная - белково-пептидная фракция сыворотки крови гренладского тюленя ФВ-Т. При этом обнаружено, что в ее составе присутствуют вещества как с гипер-, так и аналгетической активностью. Эффекты последних, как и суммарной фракции, зависят от активности ферментных систем, ингибирова-ше которых полностью устраняет или существенно ослабляет вли-. Выявлено, что ФВ-Т обладает способностью предупреждать и устранять болеутоляюще действие морфина производное фенантрена и энкефалинов и, напротив, усиливает обезболивающий эффект промедола и фен-танила производные пипередина. ФВ-Т и ее субфракции обладают выраженным центральным действием, что проявляется в изменениях амплитуды компонентов ноцицептивкых вызванных потенциалов в структурах ноци- и антиноцицептивной систем и связывания меченых лигандов со специфическими рецепторами головного мозга. В основе аналитической активностью субфракции ФБ-Т лежит ее способность взаимодействовать с мю-опиоиднми и бензодиазепино-выми рецепторами. Практическая ценность работ. Настоящая работа относится к числу фундаментальных исследований. Результаты этого исследования могут лечь в основу новых фармакологических подходов к регуляции боли. Апробация работы. Результаты работы и основные положения диссертации доложены и обсуждены на I конференции Российской Ассоциации по изучению боли 'Патофизиология и фармакология боли экспериментальные и клинические аспекты ' Москва, г. Структура и объем работа. Диссертация написана на русском языке, состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования, трех глав результатов собственных исследований, обсуждения результатов, заключения, выводов и списка литературы. Диссертация изложена на страницах машинописного текста и документирована 22 таблицами, 1 рисунком. Список литературы содержит 47 названий работ отечественных и зарубежных авторов. Опыты проводили на. Всего проведено экспериментов. Исследование болевсй чувствительности. Выло использовано 4 теста для определения болевой чувствительности у экспериментальных животных: тест 'корчи' по методике Okutoml Т. Для определения нейрсфармакологических механизмов действия изучаемых веществ исследовали динамику параметров ноци-цептивных вызванных потенциалов в сенсомоторнойрной зоне коры и подкорковых структурах ноцицептивной и антиноцицептивной системы: парафасцнкулярном комплексе ядер таламуса 1Ш , центральном ядре миндалевидного комплекса М , дорсомедиальном ядре гипоталамуса ДМГ , центральном сером веществе ЦСВ и дорсальном ядре шва ДОТ. Применяемые вещества. Для получения фракций белков сыворотки крови крупного рогатого скота ФВ-С лиофихизовали стерильную сыворотку крови крупного рогатого скота, выпускаемую заводом медпрепаратов Киевского мясокомбината. Фракцию белков крови человека ФБ-Ч получали из сыворотки крови человека, предоставленную Центральной московской станцией переливания крови. Фракцию белков тюленя ФВ-Т выделяли иа сыворотки крови гренландского тюленя, заготовленную на месте забоя животных. Шло получено 5 субфракцийб рис. Электрофоретическое разделение изучаемых веществ выявило, что они являются не однородными по своей структуре. В первой субфракции присутствуют пять основных компонентов с молекулярными весами 81; 74; 60; 59 и 24 кДа, а так же до 13 минорных компонентов с низко- и высокомолекулярными весами. Субфракция- 2 состоит из четырех основных: 65; 60; 55 и 23 кДа и десяти минорных компонентов. Субфракция-3 характеризуется наличием. Четвертая субфракция включает два основных и 67 кДа и 15 минорных компонентов. Субфракция пять имеет основные полосы с молекулярным весом 72 и 39 кДа и 8 минорных полос. Дозы этих веществ соствляли для сист-нмного введения 0. Также в ходе экспериментов использовали введение сывороточного альбумина, получаемого из сыворотки крови крупного рогатого скота. Процесс растворения, дозы и объем введения сывороточного альбумина были аналогичны таковым при введении бел-ково-пептидных фракций. Исследование рецепторного связывания проводили на рецеп-торном аппарате синаптосом головного мозга крыс. В случае определения неспецифического связывания вытесняющими агентами являлись: диазепам, морфин, пиренперон, клонидин в концентрации 10Е - 6 Ы. При оценки активности исследуемых веществ использовали концентрации от 0. За досто-. Также в ряде экспериментов вычисляли коэффициент ранговой корреляции Спир-мана. Так, например, в тесте 'tall-flick' табл. Менее активной по этому тесту являлась ФБ-С, вместе с тем в тесте 'корчи' табл. Таким образом, все исследуемые белково-пептидные вещества обладают гипералгетической активностью, сравнимой с таковой эталонных препаратов налоксона и налорфина. Однако выраженность их эффекта в отличие от эталонных препаратов существенно варьирует в зависимости от применяемого теста. Дифференцированное действие пептидов при болях разной природы продемонстрировано в различных исследованиях Калюжный Л. В, ; Раевская О. Учитывая эти данные, можно объяснить подученные нами результаты о различном влиянии ФБ-Т и ФВ-С на боль термического и химического генеза. Однако обращает на себя внимание тот факт, что. Принципиальное отличие этой белково-пептидной фракции состоит в том, что она была выделена иа сыворотки крот здорового человека, причем забор крови не сопровождался зтоль выраженным эмоционально-болевым стрессом, как это наблюдалось в двух предыдущих случаях. Большинство из этих веществ способны участвовать в регуляции болевой чувтвительности, а ряд из них обладает и гипе-эалгетической активностью. К ним прежде всего следует отнести 1Нтерлейкинбета Ferrelra е. Исследование их активности при внутрижелудочковом зведении бодрствующим и наркотизированным крысам 10 мкг в гесте РОТ выявило, что субфракция-1 обладает гипералгетическим действием, а субфракция-2 - авалгетическим. При этом сывороточный альбумин, введенный животным контрольной группы, не вызывал достоверных изменений болевого порога. Аналогичные дан-аде по влиянию на болевую чувствительность- были получены и при зистемном введении 0. В ФБ-Т, а также в субфракциях 1 и 2 содержатся высокомолекулярные компоненты белков с молекулярной массой более 22 кД. В связи с тем, что испытанные препараты при системном и центральном введении действуют довольно сходным образом, то имеется определенная вероятность их проникновения из крови в мозг, например, через ГЭБ с помощью специфических транспортных систем, или в обход ГЭБ через циркумвентрикулярные органы Марьянович А. Также не исключено, что гипералгетйческим и аналитическим действием обладают не сами белки, а их метаболиты -различного рода пептиды, обладающие значительно меньшей молекулярной массой. Следовательно, болеутоляющее действие субфракции-2 определяется ее ферментативным расщеплением в организме. Предварительное расщепление субфракции-1 колагеназой и трипсином с различным временем инкубации либо не приводило к усилению ее гипералгетической активности, либо в ряде случаев ее снижало табл. Между тем, введение бацитрацина существенно ослабляло гипералгетическое действие этого препарата табл. Таким образом, в состав обеих субфракций как с аналитической, так и гипералгетичеекой активностью входят высокомолекулярные белки-прекурзоры, действие которых определяется ферментативным расщеплением в организме. Известно, что ряд веществ опосредуют свое гипералгетическое влияние за счет блокады антиноцицептивных эффектов эндогенных опиоидов, а также обладают свойствами антагонистов экзогенных опиатов. Из синтетических препаратов к ним прежде всего относятся блокаторы опиоидных рецепторов: налорфин, на-локсон, MR и др. Игнатов Ю. Эндогенные вещества, обладающие антиопиоидной активностью, обнаружены среди различных групп. Була-ев В. В свете изложенного, естественно возникает вопрос о механизме гипералгетического действия ФБ-Т и ее субфракции. По всей вероятности, в его основе лежит ослабление антиноцицеп-тивного эффекта эндогенных опиоидов в частности, как показали проведенные эксперименты, мет- и лей-энкефалинов и опиатов, в частности морфина табл. Увеличение дозы до мкг незначительно сказывалось на выраженности аналгезии. Представленные выше данные о сравнтельном влиянии ФБ-Т, налоксона и налорфина по влиянию на болевую чувствительность и выраженность морфиновой и энгеефалиновой аналгезии могут свидетельствовать о том, что в основе гипералгетического действия ФБ-Т лежит антиопиоидный механизм. В то же время нами било выявлено, что ФБ-Т способна усиливать аналгетический эффект про-медола и фентанила. Вместе с тем на 90 мин при комбинированном введении ФБ-Т и промедола наблюдалась достоверное повышение болевого порога. Аналогичные данные были получены при исследовании влияния ФБ-Т на выраженность и длительность фентаниловой аналгезин табл. Следует отметить, что промедол и фентанил по своей химической структуре принадлежат к производным пиперидина в отличие от морфина, который является производным фенантрена. Однако, по имеющимся литературным данным, и морфин, и наркотические анальгетитики пиперёдиновой природы вызывают аналгеэию, благодаря одному механизму - взаимодействию с мю-опиоидными рецепторами Игнатов Ю. Шесте с тем в ряде последних работ показано, что производные фенантренового ряда морфин и кодеин являются эндогенными компонентами спинномозговой жидкости и содержатся наряду с продуктами их биосинтеза в мозге млекопитающих Cardinale. Поскольку и знкефали-ны являются эндогенными веществами, то можно предположить, что эта особенность и лежит в основе противоположного действия ФБ-Т на аналитический эффект морфина и энкефалинов, с одной стороны, и производных пипередина с другой. Необходимо также подчеркнуть, что, как было выявлено, ФБ-Т содержит в своем составе субфракцию-2, обладающую обезболивающим действием. Следовательно, усиление аналгетического эффекта промедрла и фентанила, по всей вероятности, зависит от активности именно этого компонента ФБ-Т, в то время как ослабление болеутоляющего действия морфина и знкефалинов связано с активностью субфракции Радиолигандное исследование рецепторного. ЕБ-Ч проявляла выраженный аффинитет к альфаадренорецепто-рам, S-2 серотониновым и бензодиазепиновым рецепторам и не «мела сродства к мю-опиоидным. Таким образом, общим для всех испытанных суммарных фрак-дий является то, что они обладают сродством к бензодиазепино-зым рецепторам. Этот факт позволяет объяснить полученные нами гходные результаты по влиянию указанных фракций на порог вока-шзации у крыс, поскольку данный тест отражает эмоциональный юмпонент боли и, следовательно, высокочувствителен к препаратам, обладающим транквилизирующими свойствами. Как указано выше, гипералгетическая активность ФБ-Т, ФБ-С и ФБ-Ч далеко не одинакова, однако полученные данные радиолигандного исследования не позволяют провести четкую корреляцию между способностью препаратов к рецепторному связыванию и их гипералгетичеекой активностью. Для решения этого вопроса было проведено исследование влияния субфракции ФБ-Т с гипер- и аналгетической активностью на связывание меченых лигандов со специфическими рецепторами синаптических мембран головного мозга крыс. Было обнаружено, что субфракция-2, вызывающая аналгезию, обладает высоким сродством к мю-опиоидным и бензодиазепиновым рецепторам. По всей вероятности; эта способность и лежит в основе аналгетического действия указанной субфракции. Напротив, субфракция-1 с гипералгетичеекой активностью не проявляла сродства ни к одному из исследуемых типов рецепторов. Если предположить, что антиопиоидное действие ФБ-Т обусловлено наличием в ее составе субфракции-1 с гипералгетичеекой активностью, то оно не может быть обусловлено взаимодействием с мю-опиоидными рецепторами, так как нами не было обнаружено аффинитета субфракции-1 к этому типу рецепторов. Для изученных пептидов, ослабляющих аналгетический эффект опиатов и опиои-дов, установлено несколько механизмов их антиопиоидного действия. Наряду с пептидами, связывающимися с опиоидными рецепторами тиролиберин, фрагменты бета-эндорфина, АКТГ и др. Так, напримкр, в механизме действия холецистокинина показано участие собственных В-холецистокининовых рецепторов Wlesenfeld-Hallln 2. Ряд пептидов способен ослаблять опиатную аналгезию посредством снижения синтеза эндогенных опиоидов. К ним прежде всего необходимо отнести ваэопресин и окситоцин Laczi F. Б целом можно заключить, что механизмы антиопиоидного действия известных ре-гуляторных пептидов не ограничиваются их взаимодействием с опиоидными рецепторами. Обобщая собственные и литературные данные, можно прийти к ыводу, что возможные механизмы антиопиоидного действия ФБ-Т и е субфракции, по-видимому, обусловлены или неисследованными ами типами рецепторов, или взаимодействием с другими нейрохи-ическими системами без вовлечения рецепторного звена. Подтверждением того, что гипералгетический и антиопиоид-ый эффект ФБ-Т не связан с блокадой мо-опиоидных рецепторов югут служить данные по сравнительному действии налокеона и В-Т на биоэлектрическую активность различных структур ЦНС. При этом навидается преимущественный рост амплитуды длиннолатентных пи-ювая латенция более мс комплексов. Следовательно, ФБ-Т в отличие от налокеона, вызывая гипералгезию, об-1егчает проведение по полисинаптическим путям. Эта особенность действия препарата сохраняется и на фоне предварительно введенного морфина. В пользу этого свидетельствуют данные о наличии «эрреляции между усилением импульсной активности и ростом ком-тоне нтов ноцицептивных ВП в структурах антиболевой системы гтвола мозга при развитии некоторых видов обезболивания Рудаков А. Следовательно, морфиновая аналгезия сопровождается активацией стволовых антиноцицептивных структур - ЦСВ и ДЯШ, что хорошо согласуется с имеющимися литературными данными об участии системы нисходящего торможения в болеутолящем эффекте опиатов. Итак, антиопиовдное действие ФБ-Т сопровождается снижением активности структур головного мозга, относящихся к антино-цицептивной системе, в частности ЦСВ и ДЯШ, опосредующих нисходяще тормозные влияния морфина на дорсальные рога спинного мозга, а также повышением активности МК, М и сенсомоторной области коры - структур, участвующих в проведении, переработке и интеграции болевых возбуждений. С другой стороны, при нейрофармакологическом исследовании способности ФБ-Т усиливать и пролонгировать обезболивающий эффект прмедола было выявлено, что при комбинированном введении этих препаратов отмечается практически полное подавление ДВП в сенсомоторной коре, ШК сохраняется лишь первичный комплекс и миндалине. В ДЯШ не отмечалось достоверных изменений по сравнению с эффектом одного промедола. В крови человека и млекопитающих присутствуют вещества белково-пептидной природы, способные изменять болевую чувствительность и отличающиеся по своим химическим и фармакологическим свойствам от известных ранее. Белково-пептидная фракция сыворотки крови гренландского тюленя ФБ-Т в разных тестах при боли различного генеза проявляет наибольшую активность по сравнению с другими аналогичными фракциями. В составе ФБ-Т содержатся две субфракции с противоположным влиянием на болевую чувствительность: с аналгетической и гипералгетической активностью, которые являются белками-пре-курзорами, а выраженность их действия зависит от активности ферментных систем организма. ФБ-Т и ее две субфракции обладают выраженным центральным действием: они способны изменять амплитуду компонентов но-. Предупреждение и устранение морфиновой аналгезии ФБ-Т юпровождается повышением биоэлектрической активности структур гацицептивной системы головного мозга и снижением. Асланянц Ж. Яснецов В. Мелик-Еганов K. Батраков С. I конф. Российской Ассоциации по изучению боли. Медицина , Фармакология и Ветеринария в научной электронной библиотеке. Как скачать диссертацию? Автореферат и диссертация по медицине Мелик-Еганов, Георгий Рафаэлевич Москва г. Фисенко Ведущая организация: Московский медицинский стоматологический институт Защита состоится ' ' г. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке университета. Автореферат разослан ' ' г. Ученый секретарь специализированного совета кандидат медицинских наук, доцент Т. Также имеются данные об облегчающем влиянии неизвестных гуморальных факторов на устойчивые разряды псшимо-дальных нощщепторов Ни гм-Отепг е. Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи: 1. Исследовать механизмы гипер- и аналгетического действия белково-пептидных фракций. Эффекты последних, как и суммарной фракции, зависят от активности ферментных систем, ингибирова-ше которых полностью устраняет или существенно ослабляет вли- яние этих веществ на болевую чувствительность. По теме диссертации опубликовано 8 работ. За досто- - g - верные принимались результаты с р не больше 0, Шесте с тем в ряде последних работ показано, что производные фенантренового ряда морфин и кодеин являются эндогенными компонентами спинномозговой жидкости и содержатся наряду с продуктами их биосинтеза в мозге млекопитающих Cardinale G. Следовательно, морфиновая аналгезия сопровождается активацией стволовых антиноцицептивных структур - ЦСВ и ДЯШ, что хорошо согласуется с имеющимися литературными данными об участии системы нисходящего торможения в болеутолящем эффекте опиатов Игнатов Ю. ФБ-Т и ее две субфракции обладают выраженным центральным действием: они способны изменять амплитуду компонентов но- хицепгивных вызванных потенциалов в структурах ноци- и антино-дицептивных систем и связывание меченых лигандов со специфическими рецепторами синаптических мембран головного мозга. Похожие научные работы Дезоксирибонуклеазная и БАПНА-амидазная активность фракции иммуноглобулинов класса G сыворотки крови у больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки. Иммуноферментный анализ антител к пептидным биорегуляторам и белкам системы гемостаза в норме и при патологии. Лейкоцитарные и сывороточные маркеры атерогенеза, их взаимосвязь со структурно-функциональным состоянием миокарда и сосудистой стенки, значимость для дифференциальной диагностики сердечно-сосудистых заболеваний атеросклеротического генеза. Патофизиологический анализ динамики и механизмов регуляции антенатального гемопоэза. Каталог диссертаций Медицинские науки Фармацевтические науки Ветеринарные науки Всегда поможем: help medical-diss.

АМФЕТАМИН ФЕН бесплатные пробы Майский

Купить Амфетамин в Мещовск

АМФЕТАМИН ФЕН бесплатные пробы Майский

Альфа-ПВП купить наркотик Унеча

Электронный каталог

АМФЕТАМИН ФЕН бесплатные пробы Майский

Закладки Марихуана Лида Беларусь

АМФЕТАМИН ФЕН бесплатные пробы Майский

Электронный каталог

Электронный каталог

Электронный каталог

Электронный каталог

Электронный каталог

Report Page